細菌的特殊結構及其染色方法

一、莢膜

某些細菌生活在一定的營(yíng)養條件下時(shí)，會(huì )在細胞壁表面形成一層松散的粘液狀物質(zhì)，稱(chēng)為莢膜，一般由多糖和多肽組成。莢膜能夠保護細胞免遭干燥影響，同時(shí)也是細胞外的碳源和能源的儲備物質(zhì)。當環(huán)境缺乏營(yíng)養時(shí)，可被細胞利用。從臨床方面來(lái)講莢膜可以保護病原菌免遭宿主吞噬細胞的吞噬，增強其致病能力。如具有莢膜的S 型肺炎球對人體毒力強，能引起肺炎，但如果細胞失去莢膜(即成為R型菌株)后，致病力就下降。

因莢膜是由細菌細胞壁外的一層粘液性多糖類(lèi)物質(zhì)組成，其對染料的親和力較弱，因此不容易著(zhù)色，通常采用負染色法進(jìn)行染色，讓菌體和背景著(zhù)色，而莢膜不著(zhù)色，從而使菌體周?chē)�呈現透明圈。

莢膜染色方法：

第一步：需要制作適當厚度的細菌涂片，涂片時(shí)可多挑些菌體與水充分混合，并將粘稠的菌液盡量涂開(kāi)，但涂布的面積不宜過(guò)大，在空氣中自然干燥，不要加熱固定。

第二步：滴加適量的結晶紫染色液于載玻片上，完全覆蓋菌體，靜置染色5-7分鐘。

第三步：用20%硫酸銅水溶液沖洗涂片，沖洗要適度，2-3遍即可。

第四步：用吸水紙吸干多余的水分，并立刻滴加1-2滴香柏油，以免形成CuSO4結晶。

第五步：使用顯微鏡鏡檢觀(guān)察。

二、鞭毛

鞭毛是生長(cháng)在細菌菌體表面的細長(cháng)、彎曲的，具有運動(dòng)功能的蛋白質(zhì)附屬物。鞭毛的數目大約有一至數十條，長(cháng)度約為15-20μｍ，直徑為0.01-0.02μｍ。鞭毛是細菌的運動(dòng)器官，觀(guān)察細菌鞭毛對于細菌鑒定有十分重要的意義。依據鞭毛的有無(wú)、位置和數量，細菌分為無(wú)鞭毛菌、單端極鞭毛菌、單端雙鞭毛菌、單端叢鞭毛菌、周鞭毛菌、側鞭毛菌等。

一般情況下，因鞭毛較細，在光學(xué)顯微鏡下不易觀(guān)察，通常需使用電鏡進(jìn)行觀(guān)察，但通過(guò)特殊染色方法使染料沉積在鞭毛上使其加粗，就可克服上述困難。

鞭毛染色方法：

第一步：挑選活力較強的幼齡細菌進(jìn)行涂片，挑取菌的時(shí)候盡量不要帶有培養基，涂片的玻片必須清洗干凈，染色前可用洗衣粉洗凈并在酒精中浸泡24h，用前擦拭干凈后使用。

第二步：將菌落輕點(diǎn)在玻片上，傾斜玻片讓菌液自然留下，不要用接種環(huán)涂抹或用力過(guò)猛，以免破壞鞭毛。

第三步：靜置待其自然干燥。

第四步：滴加鞭毛染色液 2-3滴，在室溫中染色10分鐘。

第五步：直接用蒸餾水緩慢沖洗染液，不要先傾去染液后再水洗，以免污染背景不易觀(guān)察，沖洗時(shí)要將染液的顏色沖洗干凈否則也會(huì )影響觀(guān)察。

第六步：使用顯微鏡鏡檢觀(guān)察。鏡檢時(shí)先從邊緣開(kāi)始逐漸向中間鏡檢，因為邊緣處菌量小，易觀(guān)察到單菌落，中心處菌易重疊，不易觀(guān)察。

三、芽孢

芽胞是芽胞桿菌休眠期的一種特殊形態(tài)。芽胞的形態(tài)包括芽胞形狀、芽胞位置和胞子囊膨大，芽胞形態(tài)分為圓柱形、橢圓形、球形，芽胞位置分為端生、近端生、中生或近中生。具有非常強勁的抗熱、抗化學(xué)藥物、抗輻射性能。根據芽胞的形態(tài)學(xué)可以對芽胞桿菌屬和梭菌屬進(jìn)行初步鑒定。

芽孢壁厚、透性低，著(zhù)色、脫色均較困難。因此，用著(zhù)色力強的染色劑(如孔雀石綠)在加熱條件下進(jìn)行染色時(shí)，染料不僅可以進(jìn)入菌體，而且也可以進(jìn)入芽孢，進(jìn)入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色，而進(jìn)入芽孢的染色的染料則難以透出，若再用復染液(如沙黃水溶液)染色后，芽孢仍然保留初染劑的顏色，而菌體被染成復染劑的顏色，即菌體和芽孢分別染成紅色和綠色易于區分。

芽孢染色方法：

第一步：常規涂片，待干燥后，通過(guò)火焰上方3次，進(jìn)行固定。

第二步：滴加3-4滴孔雀石綠水溶液于涂片上。

第三步：用木夾夾住載玻片在火焰上持續加熱6-8s，使染液冒蒸汽但不沸騰。

第四步：待玻片冷卻后，傾去染液，水洗至不再褪色為止。

第五步：用番紅溶液復染1min，水洗至水為無(wú)色。

第六步：待其干燥后，使用顯微鏡鏡檢觀(guān)察。

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