黑曲霉的活化、保存及孢子懸液制備

一、黑曲霉簡(jiǎn)介

  黑曲霉（Aspergillus niger）為曲霉屬真菌中一個(gè)常見(jiàn)種，在自然界中廣泛存在，生命力強，在馬鈴薯葡萄糖瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂上生長(cháng)初期產(chǎn)生白色菌絲，長(cháng)大后逐漸變黃，隨著(zhù)培養基內營(yíng)養的不斷消耗，菌絲的頂端逐漸產(chǎn)生灰黑色的孢子。

二、活化方法

  黑曲霉的活化可以使用沙氏葡萄糖液體/瓊脂培養基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂/馬鈴薯葡萄糖水等常用的真菌類(lèi)培養基，也能在胰酪胨大豆瓊脂、營(yíng)養瓊脂等細菌培養基上生長(cháng)，而實(shí)驗室培養黑曲霉通常需要用到孢子進(jìn)行各種測試，一般建議使用固體培養基（SDA或PDA）進(jìn)行活化。

  注：若需要用到黑曲霉的孢子，通常需培養至較長(cháng)時(shí)間（一般為5-7天左右）可產(chǎn)生豐富的孢子，選擇較低營(yíng)養的培養基有時(shí)候可以更快獲得孢子，培養時(shí)還需注意保持良好的透氣性，有助于霉菌的快速生長(cháng)和孢子的產(chǎn)生。

培養初期，黑曲霉產(chǎn)生白色菌絲，向周?chē)鷶U散生長(cháng)

培養時(shí)間延長(cháng)，培養基內營(yíng)養逐漸被耗盡，菌絲顏色開(kāi)始變黃色，并開(kāi)始產(chǎn)生少量孢子

產(chǎn)孢子量逐漸增加

培養結束后，菌絲頂端產(chǎn)生大量黑色孢子

三、實(shí)驗室常用保存方法

  1.斜面保存法

  將SDA或PDA制成斜面管，接種黑曲霉后培養至產(chǎn)生豐富孢子，置于2-8℃可保存3-6個(gè)月或更長(cháng)時(shí)間，若在表面覆蓋無(wú)菌液體石蠟隔絕空氣和減少水分蒸發(fā)，保存時(shí)間可延長(cháng)至一年以上。

  2.甘油冷凍保存法

  可將黑曲霉的孢子懸液加入至甘油保存管中（甘油濃度通常為20%左右，也可使用商品化的液體菌種保存管），置于-70℃以下冷凍保存，一般可穩定保存兩年至數年。

  3.瓷珠菌種保存法

  將黑曲霉的孢子轉移至瓷珠菌種保存管中，上下顛倒數次，舍棄管內液體，將瓷珠冷凍保存與-20℃或-70℃以下冰箱或液氮罐中，可長(cháng)期存活（一般在-20℃至少存活一年以上，在-70℃至少存活兩年以上）。

  注：黑曲霉的活化和保存通常使用孢子部分。在進(jìn)行轉接培養時(shí)，一般需挑取黑曲霉的孢子體轉接至另一培養基中進(jìn)行培養，進(jìn)行甘油或瓷珠冷凍保存時(shí)，也應保存黑曲霉的孢子體。

四、孢子懸液的制作

  在進(jìn)行培養基的靈敏度檢驗或者做一些霉菌殺滅效果試驗時(shí)，通常需要用到黑曲霉的孢子懸液�？蓪⑸呈掀咸烟黔傊�或馬鈴薯葡萄糖瓊脂制成斜面培養基（如需要得到大量孢子懸液，可使用錐形瓶制大斜面），接種黑曲霉，培養至產(chǎn)生豐富的孢子，加入一定體積的洗脫液（可用生理鹽水、0.1%蛋白胨水、磷酸鹽緩沖液等）對斜面進(jìn)行沖洗，得到高濃度的混懸液，將混懸液通過(guò)無(wú)菌棉花或紗布進(jìn)行過(guò)濾，除去懸液中可能混入的菌絲體，便可得到孢子懸液。制備好的孢子懸液可放置于2-8℃，在驗證過(guò)的有效期內保存及使用。

相關(guān)產(chǎn)品：

沙氏瓊脂培養基(SDA)-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情

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