選擇性分離/計數固體培養基的出廠(chǎng)檢驗及驗收方法

一、選擇性分離/計數固體培養基的介紹

  選擇性分離/計數固體培養基常用于特定細菌的分離培養，通常添加有特定的抑制成分，減少非目標菌的生長(cháng)，對目標菌的生長(cháng)沒(méi)有影響或影響較小，達到選擇性分離的效果，大部分的選擇性培養基中同時(shí)添加有特定的底物，使目標菌生長(cháng)具有特定的菌落特征、顏色反應，更容易識別所需的目標菌。

二、培養基的出廠(chǎng)檢驗

1.目標菌的生長(cháng)率測定（定量）

  將質(zhì)控菌株接種至非選擇性肉湯或平板中進(jìn)行活化培養，使用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液進(jìn)行十倍系列稀釋至適宜梯度，吸取0.1mL制備好的菌懸液，分別涂布至待測培養基和參比培養基，每平板接種水平為20-200CFU，至少接種2塊平板，將接種好的培養基置于標準規定的條件下進(jìn)行培養。生長(cháng)率P_R=N_S（待測平板菌落總數）/NO（參比培養基平板菌落總數，應≥100CFU），目標菌在待測培養基上應有典型的生長(cháng)和菌落特征，計數培養基的生長(cháng)率應不小于0.7，分離培養基的生長(cháng)率一般不小于0.5，最低應在0.1以上。

2.非目標菌的特異性檢驗（定性）

  將質(zhì)控菌株接種至非選擇性肉湯培養基中過(guò)夜培養，用1μL接種環(huán)挑取菌液在平板上劃平行直線(xiàn)或分區劃線(xiàn)，置標準規定的溫度培養，非目標菌應有典型的菌落外觀(guān)、大小和形態(tài)。

EMB非目標菌特異性檢驗-鼠傷寒沙門(mén)氏菌

3.非目標菌的抑制性檢驗（半定量）

  用1μL接種環(huán)取選擇性測試工作菌懸液1環(huán)， 在待測培養基表面劃六條平行直線(xiàn)，同時(shí)接種兩個(gè)平板，按標準規定的條件進(jìn)行培養，培養后計算生長(cháng)指數G，每條有比較稠密菌落生長(cháng)的劃線(xiàn)則G為1，如果僅一半的線(xiàn)有稠密菌落生長(cháng)，則G為0.5。如果劃線(xiàn)上沒(méi)有菌落生長(cháng)、生長(cháng)量少于劃線(xiàn)的一半或菌落生長(cháng)微弱，則G為0，記錄每個(gè)平板的得分總和便得到G。非目標菌的G值一般小于或等于1，至少應達到G＜5。

EMB非目標菌抑制性檢驗-金黃色葡萄球菌（G≤1）

三、培養基的驗收方法

1.目標菌的半定量測試

  將質(zhì)控菌株接種至非選擇性肉湯培養基中過(guò)夜培養制成工作菌懸液，使用1μL接種環(huán)挑取1環(huán)菌液，按照標準的方法連續劃16線(xiàn)，置于標準規定的溫度培養，如果僅一半的線(xiàn)有稠密菌落生長(cháng)，則G為0.5。如果劃線(xiàn)上沒(méi)有菌落生長(cháng)、生長(cháng)量少于劃線(xiàn)的一半或菌落生長(cháng)微弱，則G為0，計算G值總和，應達到G≥6。

EMB目標菌半定量測試-大腸桿菌（G≥6）

2.非目標菌的特異性、選擇性測試方法與出廠(chǎng)檢驗方法完全相同。

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