原生質(zhì)體融合的原理和過(guò)程

  原生質(zhì)體融合是通過(guò)人工方法，使遺傳性狀不同的兩個(gè)細胞的原生質(zhì)體發(fā)生融合，并產(chǎn)生重組子的過(guò)程，亦可稱(chēng)為“細胞融合”。原生質(zhì)體融合技術(shù)是繼轉化、轉導和接合等微生物基因重組方式之后，又一個(gè)極其重要的基因重組技術(shù)，廣泛應用于原核微生物、真核微生物以及動(dòng)植物和人體細胞的基因重組，大大提高了細胞間基因重組的頻率，可在不同種、屬、科甚至更遠的微生物間進(jìn)行，擴大了發(fā)生基因重組親本的選擇范圍。為利用基因重組技術(shù)培育更多、更優(yōu)良的生產(chǎn)菌種提供了可能。

微生物原生質(zhì)體融合的主要步驟為：

（1）選擇親株

  選擇遺傳性狀穩定且具有優(yōu)勢互補的兩個(gè)親株，可通過(guò)誘變劑對原種進(jìn)行處理獲得可識別的遺傳標記。

（2）制備原生質(zhì)體

  去除細胞壁是制備原生質(zhì)體的關(guān)鍵。一般都采用酶解法去壁。

（3）原生質(zhì)體融合：

  聚乙二醇能有效促進(jìn)原生質(zhì)體融合，一般使用濃度范圍在25%~40%。紫外線(xiàn)照射或脈沖電場(chǎng)等物理因素處理也能促進(jìn)原生質(zhì)體融合。

（4）原生質(zhì)體再生：

  預先去除再生平板培養基表面的冷凝水，稀釋涂布原生質(zhì)體懸液。需注意，殘存菌體、菌齡、再生時(shí)的溫度、溶菌酶用量和溶壁時(shí)間等因素會(huì )影響原生質(zhì)體再生。

（5）篩選優(yōu)良性狀的融合子

  原生質(zhì)體融合后，來(lái)自?xún)捎H代的遺傳物質(zhì)經(jīng)過(guò)交換并發(fā)生重組而形成的子代即融合重組子，可通過(guò)兩親株遺傳標記的互補識別篩選重組子。然后對融合重組子進(jìn)行生理生化測定及生產(chǎn)性能的測定，選出符合育種要求的優(yōu)良菌株。

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