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一、簡(jiǎn)介
大腸埃希氏菌（Escherichia coli），又叫大腸桿菌，是條件致病菌，在人體飲食不當或免疫力下降的時(shí)候可以引起胃腸道感染或尿道等多種局部組織器官感染，患者容易出現腹瀉、腹痛、發(fā)燒等臨床表現。
為了幫助更好地理解本文的操作，此處需要特別明確一下：大腸菌群并非細菌學(xué)分類(lèi)命名，而是衛生細菌領(lǐng)域的用語(yǔ)，它不代表某一個(gè)或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細菌，這些細菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致，其定義為：需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。一般認為該菌群細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。大腸菌群主要包括中希氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬。
《GB4789.38 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 大腸埃希氏菌計數》中，有關(guān)大腸埃希氏菌的計數共涉及兩種方法，MPN法和平板法，其中MPN法中對大腸埃希氏菌的分離主要分為三個(gè)步驟：初發(fā)酵試驗、復發(fā)酵試驗和平板分離試驗（如圖1）。
相關(guān)標準：GB 4789.38-2012 大腸埃希氏菌計數 -點(diǎn)擊查看下載
本文主要對這些分離步驟進(jìn)行解讀和探討。
圖1 大腸埃希氏菌MPN計數法檢驗程序
二、培養基的選擇與比較
為了有效分離出樣品中的大腸埃希氏菌，標準中共選用了三種培養基，LST肉湯、EC肉湯和EMB瓊脂。下面對這三種培養基全面進(jìn)行比較（如表1）。
表1 大腸埃希氏菌分離用三種培養基的比較
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比較 項目 |
液體發(fā)酵培養基 |
平板分離培養基 |
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初發(fā)酵 |
復發(fā)酵 |
劃線(xiàn)平板 |
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名稱(chēng) |
月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（LST肉湯） |
EC肉湯 |
EMB瓊脂 |
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貨號 |
HB0102（干粉） |
HB0105（干粉） |
HB0107（干粉） |
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HBKD0102/ HBKP0102（顆粒） |
HBKD0105/ HBKP0105（顆粒） |
HBKP0107（顆粒） |
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HBPT017（即用型試管） |
HBPT020-1（即用型試管） |
HBPM007（即用型平皿） |
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用途 |
用于大腸菌群、 大腸桿菌的測定 |
用于糞大腸菌群、 大腸桿菌的測定 |
用于分離腸道致病菌， 特別是大腸桿菌 |
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配方（g/L） |
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原理 |
乳糖提供菌體細胞生長(cháng)所需要的碳源；月桂基硫酸鈉抑制非大腸菌群類(lèi)細菌的生長(cháng)。 |
乳糖是可發(fā)酵的糖類(lèi)；3號膽鹽抑制革蘭氏陽(yáng)性菌，特別抑制革蘭氏陽(yáng)性桿菌和糞腸球菌。 |
乳糖作為可發(fā)酵的碳源；伊紅和美藍同時(shí)作為抑制劑和指示劑，在酸性條件下產(chǎn)生沉淀，形成具黑色中心有金屬光澤或無(wú)光澤的菌落。 |
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接種量 |
1mL |
1環(huán) |
/ |
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培養溫度 |
36℃±1℃ |
44.5℃±0.2℃ |
36℃±1℃ |
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培養時(shí)間 |
24h-48h |
24h-48h |
18h-24h |
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陽(yáng)性菌特征 |
渾濁度2，且氣體充滿(mǎn)管內1/3 |
渾濁度2，且氣體充滿(mǎn)管內1/3 |
黑色菌落，有金屬光澤 |
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排除菌 |
革蘭氏陽(yáng)性菌（糞腸球菌、金黃色葡萄球菌）：抑制；沙門(mén)氏菌：生長(cháng)，但不產(chǎn)氣 |
革蘭氏陽(yáng)性菌（糞腸球菌、金黃色葡萄球菌）：抑制；沙門(mén)氏菌-生長(cháng)，但不產(chǎn)氣；非大腸埃希氏菌的大菌群其它種類(lèi)（檸檬酸桿菌、腸桿菌、克雷伯氏菌）-生長(cháng)，但不產(chǎn)氣 |
革蘭氏陽(yáng)性菌（糞腸球菌、金黃色葡萄球菌）-抑制；沙門(mén)氏菌-無(wú)色菌落；非大腸埃希氏菌的大菌群其它種類(lèi)（檸檬酸桿菌、腸桿菌、克雷伯氏菌）-粉紅色菌落，無(wú)金屬光澤 |
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可疑菌 |
大腸菌群（大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、腸桿菌、產(chǎn)氣克雷伯氏菌） |
大腸埃希氏菌 |
大腸埃希氏菌 |
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三、程序解讀和結果判斷
從表中可以清晰地看出：該程序就是通過(guò)使用LST培養，將革蘭氏陽(yáng)性菌抑制住，并將非大腸菌群的其他細菌排除掉，有目的地篩選出大腸菌群細菌；然后通過(guò)使用EC肉湯培養，抑制革蘭氏陽(yáng)性細菌的同時(shí)，通過(guò)產(chǎn)氣特征，進(jìn)一步從大腸菌群中篩選出大腸埃希氏菌；然后將含有大量大腸埃希氏菌和少量雜菌的菌液進(jìn)行EMB平板劃線(xiàn)，徹底將大腸埃希氏菌培養成單菌落，通過(guò)菌落特征進(jìn)行有效識別，方便后期進(jìn)一步挑選、純化和鑒定。
三個(gè)步驟中所用的培養基都能有效抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(cháng)，所以完全不用擔心這類(lèi)細菌的干擾。
不同菌種在這三種培養基上的生長(cháng)情況如圖2所示：
圖2-1 LST肉湯培養不同菌株的試驗結果（渾濁且產(chǎn)氣的為大腸菌群）
圖2-2 EC肉湯培養不同菌株的結果（渾濁產(chǎn)氣的為大腸埃希氏菌）
圖2-3 EMB培養不同菌株的試驗結果（菌落黑色且有金屬光澤的為大腸埃希氏菌）
四、后續試驗
通過(guò)逐步分離，形成的典型大腸埃希氏菌單菌落，并不能判定為就一定是大腸埃希氏菌，還需要將這些單菌落進(jìn)一步純化，進(jìn)行后續的生化鑒定試驗，才能最終確定是否為大腸埃希氏菌。
相關(guān)標準：
GB 4789.38-2012 大腸埃希氏菌計數 -點(diǎn)擊標準下載
相關(guān)產(chǎn)品：
月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（LST）-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情
伊紅美藍瓊脂(EMB)-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情
注:本文屬海博生物原創(chuàng ),未經(jīng)允許不得轉載。
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