配制培養基時(shí)的注意事項以及常見(jiàn)問(wèn)題分析

一、配制培養基時(shí)的注意事項

  1.培養基在滅菌前，需進(jìn)行加熱溶解（含瓊脂的培養基需煮沸4-6次至瓊脂完全溶解），再進(jìn)行分裝滅菌（應不超過(guò)1000mL）；

  2.含瓊脂培養基，若滅菌前未進(jìn)行加熱溶解，滅菌后需充分搖勻使用；

  3.所有培養基不宜滅菌過(guò)度和長(cháng)時(shí)間保溫，特別是含糖量高的培養基，如沙氏葡萄糖瓊脂，滅菌過(guò)度或保溫時(shí)間過(guò)長(cháng)易使葡萄糖發(fā)生焦化，滅菌后的培養基顏色會(huì )變深，pH會(huì )下降，此外還會(huì )使蛋白胨中的維生素分解，降低培養基的營(yíng)養；

  4.需另加添加劑的培養基通常在培養基冷卻至50℃左右時(shí)加入，已加入添加劑的瓊脂類(lèi)培養基不可熔化再次使用；

  5.配制好的培養基需及時(shí)滅菌，不可久置；

  6.培養基不可重復滅菌；

  7.瓊脂培養基不可反復熔化使用；待用的瓊脂培養基可置47-50℃水浴保溫或50-60℃烘箱保溫，一般不可超過(guò)4小時(shí)。

  8.使用蒸餾水或純化水配制。飲用水或自來(lái)水中由于含礦物鹽離子，配制培養基會(huì )產(chǎn)生渾濁現象。

  9.容器不易過(guò)滿(mǎn)，容量至少應比培養基體積大20%。

二、配制過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題分析

  1、培養基顏色不正確

  （1）含有酸堿指示劑的培養基，若顏色不正確，通常是由于pH不正確導致的，加熱過(guò)度、錯誤的滅菌方式等都會(huì )導致此項問(wèn)題。

  （2）加熱過(guò)度導致某些成分分解或糖焦化，如SC培養基加熱過(guò)度會(huì )變紅，含糖量高的培養基，加熱過(guò)度通常會(huì )出現顏色加深，呈焦糖色或棕褐色。

  （3）某些成分變質(zhì)，如血液久置易變黑，制成的平板顏色偏棕黑色。

  2、培養基不凝固或凝固性差

  （1）稱(chēng)量錯誤

  （2）瓊脂分布不均勻

  （3）培養基pH不正確

  （4）加熱過(guò)度

  （5）瓊脂量不足

滅菌前未加熱溶解，滅菌后未充分搖勻，

會(huì )出現分層現象，瓊脂凝固在底層，上層不凝固

  3、培養基產(chǎn)生沉淀

  （1）某些培養基原本就含有不溶性沉淀，如TTB，MC培養基等，配方中含有大量不溶性碳酸鈣。

  （2）滅菌前未充分溶解，如Fraser培養基中含有大量磷酸鹽，若滅菌前溶解不充足，滅菌后就會(huì )出現大量沉淀。

  （3）pH不正確，偏酸或偏堿都有可能使培養基中的部分金屬離子產(chǎn)生沉淀。

  （4）水的純度不夠，天然水中含有較多的礦物鹽離子，若未除凈，則易與培養基中的磷酸鹽反應生成沉淀。

  （5）添加劑加入溫度不正確，卵黃、血液等對溫度敏感的添加成分，若加入時(shí)溫度過(guò)高或溫差過(guò)大，易出現凝塊。

  （6）稱(chēng)量錯誤。

  （7）試劑加入順序不正確。

  4、培養基污染

  （1）滅菌方式不正確，導致滅菌不徹底

  （2）滅菌鍋的滅菌效力不達標

  （3）滅菌量過(guò)多，滅菌前未加熱溶解

  （4）培養基本身含耐熱菌較多

  （5）滅菌過(guò)程中，滅菌鍋內冷空氣未排干凈

  （6）滅菌鍋放置過(guò)滿(mǎn)

  （7）操作過(guò)程發(fā)生污染

  （8）分裝培養基器皿滅菌不充分

  （9）濾膜破損

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