微生物分離純化方法
錄入時(shí)間:2023-3-9 10:50:17
來(lái)源：青島海博生物
常見(jiàn)的微生物分離純化方法有稀釋混合倒平板法、平板劃線(xiàn)法、稀釋涂布法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常用，不需要特殊的儀器設備，分離純化效果好。
平板劃線(xiàn)法與稀釋涂布平板法的區別
一、平板劃線(xiàn)分離法
用接種環(huán)以無(wú)菌操作沾取少許待分離的材料，在無(wú)菌平板表面進(jìn)行平行劃線(xiàn)、扇形劃線(xiàn)或其他形式的連續劃線(xiàn)，微生物細胞數量將隨著(zhù)劃線(xiàn)次數的增加而減少，并逐步分散開(kāi)來(lái)，如果劃線(xiàn)適宜的話(huà)，微生物能一一分散，經(jīng)培養后，可在平板表面得到單菌落。
用途：一般多用于菌種的純化；
優(yōu)點(diǎn)：可以觀(guān)察菌落特征，對混合菌進(jìn)行分離；
缺點(diǎn)：不能計數；
二、稀釋涂布平板法：
稀釋平板計數是根據微生物在固體培養基上所形成的單個(gè)菌落，即是由一個(gè)單細胞繁殖而成這一培養特征設計的計數方法，即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細胞。計數時(shí)，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開(kāi)，使成單個(gè)細胞存在（否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養基內。經(jīng)培養后，由單個(gè)細胞生長(cháng)繁殖形成菌落，統計菌落數目，即可計算出樣品中的含菌數。此法所計算的菌數是培養基上長(cháng)出來(lái)的菌落數，故又稱(chēng)活菌計數。一般用于某些成品檢定（如殺蟲(chóng)菌劑等）、生物制品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。
用途：一般多用于篩選菌株。一般用于平板培養基的回收率計數。
優(yōu)點(diǎn)：可以計數，可以觀(guān)察菌落特征。
缺點(diǎn)：吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度大的話(huà)，長(cháng)不出單菌落。
a. 樣品稀釋液的制備
（1）將分別盛有9mL無(wú)菌生理鹽水的試管，進(jìn)行編號。
（2）準確稱(chēng)取待測樣品10g，放入裝有90mL無(wú)菌水并放有小玻璃珠的250mL三角瓶中，用手或置搖床上振蕩20 min，使微生物細胞分散，靜置20s-30s，即成10-1稀釋液；
（3）用移液槍吸取10-1稀釋液1mL，移入裝有9 mL無(wú)菌水的試管中，吹吸3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液；
（4）再吸取10-2稀釋液1mL，移入裝有9mL無(wú)菌水的試管中，也吹吸三次，即成l0-3稀釋液；以此類(lèi)推，連續稀釋?zhuān)瞥?0-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液。
用稀釋平板計數時(shí)，待測菌稀釋度的選擇應根據樣品確定。樣品中所含待測菌的數量多時(shí)，稀釋度應高，反之則低。通常測定細菌菌劑含菌數時(shí)，采用10-7、10-8、10-9稀釋度；測定土壤細菌數量時(shí)，采用10-4、10-5、10-6稀釋度；測定放線(xiàn)菌數量時(shí)，采用l0-3、10-4、10-5稀釋度；測定真菌數量時(shí)，采用10-2、10-3、10-4稀釋度
b.涂布操作：
(1) 將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。
(2) 取少量菌液（不超過(guò)0.1ml）滴加到培養基表面。
(3) 將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8~10s。
(4) 用涂布器將菌液均勻地涂布在培養基表面，涂布時(shí)可轉動(dòng)培養皿，使菌液分布均勻。
注意：將涂布器末端浸在盛有體積分數為百分之七十的酒精的燒杯中。取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。
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