1 主題內容與適用范圍
本標準規定了各種染色法、培養基和試劑。
本標準適用于食品和食物中毒樣品中各類(lèi)微生物的檢驗。
2 染色液配制及染色法
2.1 美藍染色法
2.1.1 呂氏堿性美藍染色液
美藍 0.3g
95%乙醇 30mL
0.01%氫氧化鉀溶液 100mL
將美藍溶解于乙醇中，然后與氫氧化鉀溶液混合。
2.1.2 染色法
將涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染1～3min，水洗，待干，鏡檢。
2.1.3 結果
菌體呈藍色。
2.2 革蘭氏染色法
2.2.1 結晶紫染色液
結晶紫 1g
95%乙醇 20mL
1%草酸銨水溶液 80mL
將結晶紫溶解于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。
2.2.2 革蘭氏碘液
碘 1g
碘化鉀 2g
蒸餾水 300mL
將碘與碘化鉀先進(jìn)行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至300mL。
2.2.3 沙黃復染液
沙黃 0.25g
95%乙醇 10mL
蒸餾水 90mL
將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。
2.2.4 染色法
2.2.4.1 將涂片在火焰上固定，滴加結晶紫染色液，染1min，水洗。
2.2.4.2 滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗。
2.2.4.3 滴加95%乙醇脫色，約30s；或將乙醇滴滿(mǎn)整個(gè)涂片，立即傾去，再用乙醇滴滿(mǎn)整個(gè)涂片，脫色10s。
2.2.4.4 水洗，滴加復染液，復染1min。水洗，待干，鏡檢。
2.2.5 結果
革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色。革蘭氏陰性菌呈紅色。
注：亦可用1：10稀釋石炭酸復紅染色液作復染液，復染時(shí)間僅需10s。
2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)
2.3.1 石炭酸品紅染色液
堿性品紅 0.3g
95%乙醇 10mL
5%酚水溶液 90mL
將品紅溶解于乙醇中，然后與酚溶液混合。
2.3.2 3%鹽酸－乙醇
濃鹽酸 3mL
95%乙醇 97mL
2.3.3 復染液
呂氏堿性美藍染色液。
2.3.4 染色法
2.3.4.1 將涂片在火焰上加熱固定，滴加石炭酸品紅染色液，徐徐加熱至有蒸氣出現，但切不可使沸騰。染液如因蒸發(fā)減少時(shí)，應隨時(shí)添加。染5min，傾去染液，水洗。
2.3.4.2 滴加鹽酸－乙醇脫色，直至無(wú)紅色脫落為止(所需時(shí)間視涂片厚薄而定，一般為1～3min)，水洗。
2.3.4.3 滴加呂氏堿性美藍染色液，復染30s～1min，水洗，待干，鏡檢。
2.3.5 結果：耐酸性細菌呈紅色，其他細菌、細胞等物質(zhì)呈藍色。
2.4 柯氏染色法
2.4.1 染色液
2.4.1.1 0.5%沙黃液。
2.4.1.2 0.5%孔雀綠液。
2.4.2 染色法
2.4.2.1 將涂片在火焰上固定，滴加0.5%沙黃液，并加熱至出現氣泡，約2～3min，水洗。
2.4.2.2 滴加0.5%孔雀綠液，復染40～50s。水洗，待干，鏡檢。
2.4.3 結果
布氏桿菌呈紅色，其他細菌及細胞呈綠色。
2.5 奧爾特氏莢膜染色法
2.5.1 染色液
沙黃 3g
蒸餾水 100mL
用乳缽研磨溶解。
2.5.2 染色法
將涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加熱至產(chǎn)生蒸氣后，繼續染3min。水洗，待干，鏡檢。
2.5.3 結果
炭疽芽胞桿菌菌體呈赤褐色，莢膜呈黃色。
2.6 瑞氏染色法
2.6.1 染色液
瑞氏色素 0.1g
甲醇 60mL
用乳缽研磨溶解。
2.6.2 染色法
2.6.2.1 涂片待自然干燥后，滴加染色液，固定1min。
2.6.2.2 加入等量蒸餾水(pH6.5)，染色3～5min。
2.6.2.3 用蒸餾水沖洗，待干，鏡檢。
2.7 鞭毛染色法
2.7.1 染色液的配制
2.7.1.1 甲液：稱(chēng)丹寧酸5g、氯化高鐵(FeCl3)1.5g，溶于100mL蒸餾水中，待溶解后加入1%的氫氧化鈉溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。
2.7.1.2 乙液：稱(chēng)2g硝酸銀溶于100mL蒸餾水中。
在90mL乙液中滴加濃氫氧化銨溶液，到出現沉淀后，再滴加使其變?yōu)槌吻�，然后用其�?0mL乙液小心滴加至澄清液中，至出現輕微霧狀為止(此為關(guān)鍵性操作，應特別小心)。滴加氫氧化銨和用剩余乙液回滴時(shí)，要邊滴邊充分搖蕩，染液當天配，當天使用，2～3d基本無(wú)效。
2.7.2 染色法
在風(fēng)干的載玻片上滴加甲液，4～6min后，用蒸餾水輕輕沖凈。再加乙液，緩緩加熱至冒汽，維持約半分鐘(加熱時(shí)注意勿使出現干燥面)。在菌體多的部位可呈深褐色到黑色，停止加熱，用水沖凈，干后鏡檢，菌體及鞭毛為深褐色到黑色。
2.8 堿性復紅染色法
將0.5g堿性復紅染料溶解于20mL95%乙醇中，然后用蒸餾水稀釋至100mL。如有不溶物時(shí)，可用濾紙過(guò)濾，或靜置后取上清液備用。
注：本染色液系用于蘇云金芽胞內蛋白質(zhì)毒素結晶的染色，藉以與蠟樣芽胞桿菌相區別。
3 生化試驗培養基和試劑
3.1 Hugh－Leifson培養基(O/F試驗用)
3.1.1 成分
蛋白胨 2g
氯化鈉 5g
磷酸氫二鉀 0.3g
瓊脂 4g
葡萄糖 10g
0.2%溴麝香草酚藍溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH7.2
3.1.2 制法
將蛋白胨和鹽類(lèi)加水溶解后，校正pH至7.2。加入葡萄糖、瓊脂煮沸，溶化瓊脂，然后加入指示劑�；靹蚝�，分裝試管，121℃高壓滅菌15min，直立凝固備用。
3.1.3 試驗方法
從斜面上挑取小量培養物作穿刺接種，同時(shí)接種兩支培養基，其中一支于接種后滴加溶化的1%瓊脂液于表面，高度約1cm，于36±1℃培養。
3.1.4 結果
3.2 糖發(fā)酵管
3.2.1 成分
?∨Ｈ飧唷 ?g
蛋白胨 10g
氯化鈉 3g
磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O) 2g
0.2%滇麝香草酚藍溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH7.4
3.2.2 制法
3.2.2.1 葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內，121℃高壓滅菌15min。
3.2.2.2 其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后，分裝每瓶100mL，121℃高壓滅菌15min。另將各種糖類(lèi)分別配好10%溶液，同時(shí)高壓滅菌。將5mL糖溶液加入于100mL培養基內，以無(wú)菌操作分裝小試管。
注：蔗糖不純，加熱后會(huì )自行水解者，應采用過(guò)濾法除菌。
3.2.3 試驗方法：從瓊脂斜面上挑取小量培養物接種，于36±1℃培養，一般觀(guān)察2～3d。遲緩反應需觀(guān)察14～30d。
3.3 ONPG培養基
3.3.1 成分
鄰硝基酚β－D-半乳糖昔(ONPG) 60mg
(O－Nitrophenyl－β－D－galactopyranoside)
0.01mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5) 10mL
1%蛋白胨水(PH7.5) 30mL
3.3.2 制法
將ONPG溶于緩沖液內，加入蛋白胨水，以過(guò)濾法除菌，分裝于10mm×75mm試管，每管0.5mL，用橡皮塞塞緊。
3.3.3 試驗方法
自瓊脂斜面上挑取培養物1滿(mǎn)環(huán)接種，于36±1℃培養1～3h和24h觀(guān)察結果。如果β－半乳糖苷酶產(chǎn)生，則于1～3h變黃色，如無(wú)此酶則24h不變色。
3.4 緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和VP試驗用)
3.4.1 成分
磷酸氫二鉀 5g
多胨 7g
葡萄糖 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.0
3.4.2 制法
溶化后校正pH，分裝試管，每管1mL，121℃高壓滅菌15min。
3.4.3甲基紅(MR)試驗
自瓊脂斜面挑取少量培養物接種本培養基中，于36±1℃培養2～5d，哈夫尼亞菌則應在22～25℃培養。滴加甲基紅試劑一滴，立即觀(guān)察結果。鮮紅色為陽(yáng)性，黃色為陰性。甲基紅試劑配法：10mg甲基紅溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸餾水。
3.4.4 V－P試驗
用瓊脂培養物接種本培養基中，于36±1℃培養2～4d。哈夫尼亞菌則應在22～25℃培養。加入6%α－萘酚－乙醇溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液0.2mL，充分振搖試管，觀(guān)察結果。陽(yáng)性反應立刻或于數分鐘內出現紅色，如為陰性，應放在36±1℃下培養4h再進(jìn)行觀(guān)察。
3.5 西蒙氏檸檬酸鹽培養基
3.5.1 成分
氯化鈉 5g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.2g
磷酸二氫銨 1g
磷酸氫二鉀 1g
檸檬酸鈉 5g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
0.2%溴麝香草酚藍溶液 40mL
pH6.8
3.5.2 制法
先將鹽類(lèi)溶解于水內，校正pH，再加瓊脂，加熱溶化。然后加入指示劑，混合均勻后分裝試管，121℃高壓滅菌15min。放成斜面。
3.5.3 試驗方法
挑取少量瓊脂培養物接種，于36±1℃培養4d，每天觀(guān)察結果。陽(yáng)性者斜面上有菌落生長(cháng)，培養基從綠色轉為藍色。
3.6 克氏擰檬酸鹽培養基
3.6.1 成分
檸檬酸鈉 3g
葡萄糖 0.2g
酵母浸膏 0.5g
單鹽酸半胱氨酸 0.1g
磷酸二氫鉀 1g
氯化鈉 5g
0.2%酚紅溶液 6mL
瓊脂 15g
蒸餾水 1000mL
3.6.2 制法
加熱溶解，分裝試管，121℃高壓滅菌15min。放成斜面。
3.6.3 試驗方法
用瓊脂培養物接種整個(gè)斜面，在36±1℃培養7d，每天觀(guān)察結果。陽(yáng)性者培養基變?yōu)榧t色。
3.7 丙二酸鈉培養基
3.7.1 成分
酵母浸膏 1g
硫酸銨 2g
磷酸氫二鉀 0.6g
磷酸二氫鉀 0.4g
氯化鈉 2g
丙二酸鈉 3g
0.2%溴麝香草酚藍溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH6.8
3.7.2 制法
先將酵母浸膏和鹽類(lèi)溶解于水，校正pH后再加入指示劑，分裝試管，121℃高壓滅菌15min。
3.7.3 試驗方法
用新鮮的瓊脂培養物接種，于36±1℃培養48h，觀(guān)察結果。陽(yáng)性者由綠色變?yōu)樗{色。
3.8 葡葡糖銨培養基
3.8.1 成分
氯化鈉 5g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.2g
磷酸二氫銨 1g
磷酸氫二鉀 1g
葡萄糖 2g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
0.2%溴麝香草酚藍溶液 40mL
pH6.8
3.8.2 制法
先將鹽類(lèi)和糖溶解于水內，校正pH，再加瓊脂，加熱溶化，然后加入指示劑，混合均勻后分裝試管，121℃高壓滅菌15min，放成斜面。
3.8.3 試驗方法
用接種針輕輕觸及培養物的表面，在鹽水管內做成極稀的懸液，肉眼觀(guān)察不見(jiàn)混濁，以每一接種環(huán)內含菌數在20～100之間為宜。將接種環(huán)滅菌后挑取菌液接種，同時(shí)再以同法接種普通斜面一支作為對照。于36±1℃培養24h。陽(yáng)性者葡萄糖銨斜面上有正常大小的菌落生長(cháng)；陰性者不生長(cháng)，但在對照培養基上生長(cháng)良好。如在葡萄糖銨斜面生長(cháng)極微小的菌落可視為陰性結果。
注：容器使用前應用清潔液浸泡。再用清水、蒸餾水沖洗干凈，并用新棉花做成棉塞，干熱滅菌后使用。如果操作時(shí)不注意，有雜質(zhì)污染時(shí)，易造成假陽(yáng)性的結果。
3.9 馬尿酸鈉培養基
3.9.1 成分
馬尿酸鈉 1g
肉浸液 100mL
3.9.2 制法
將馬尿酸鈉溶解于肉浸液內，分裝于小試管內，并于管壁畫(huà)一橫線(xiàn)。以標志管內液面高度，高壓滅菌121℃20min。
3.9.3 試劑
三氯化鐵(FeCl3·6H2O)12g，溶于2%鹽酸溶液100mL中即成。
3.9.4 試驗方法
用純培養物接種，于42℃培養48h，觀(guān)察培養液是否到達試管壁上記號處，如不足時(shí)，用蒸餾水補足至原量。經(jīng)離心沉淀，吸取上清液0.8mL，加入三氯化鐵試劑0.2mL，立即混合均勻，經(jīng)10～15min，觀(guān)察結果。
3.9.5 結果：出現恒久之沉淀物為陽(yáng)性。
3.10 營(yíng)養明膠
3.10.1 成分
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
明膠 120g
蒸餾水 1000mL
pH6.8～7.0
3.10.2 制法
加熱溶解、校正至pH7.4～7.6，分裝小管，121℃高壓滅菌10min，取出后迅速冷卻，使其凝固。復查最終pH應為6.8～7.0。
3.10.3 試驗方法
用瓊脂培養物穿刺接種，放在22～25℃培養，每天觀(guān)察結果，記錄液化時(shí)間�；蚍旁�36士1℃培養，每天取出，放冰箱內30min后再觀(guān)察結果。
3.11 苯丙氨酸培養基
3.11.1 成分
酵母浸膏 3g
DI－苯丙氨酸(或L－苯丙氨酸1g) 2g
磷酸氫二鈉 1g
氯化鈉 5g
瓊脂 12g
蒸餾水 1000mL
3.11.2 制法
加熱溶解后分裝試管，121℃高壓滅菌15min，使成斜面。
3.11.3 試驗方法
自瓊脂斜面上挑取大量培養物，移種于苯丙氨酸瓊脂，在36±1℃培養4h或18～24h。滴加10%三氯化鐵溶液2～3滴，自斜面培養物上流下，苯丙氨酸脫氨酶陽(yáng)性者呈深綠色。
3.12 氨基酸脫羧酶試驗培養基
3.12.1 成分
蛋白胨 5g
酵母浸膏 3g
葡萄糖 1g
蒸餾水 1000mL
1.6%滇甲酚紫－乙醇溶液 1mL
L－氨基酸或DL－氨基酸 0.5或1g/100mL
pH6.8
3.12.2 制法
除氨基酸以外的成分加熱溶解后，分裝每瓶100mL，分別加入各種氨基酸：賴(lài)氨酸、精氨酸和鳥(niǎo)氨酸。L－氨基酸按0.5%加入，DL－氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。對照培養基不加氨基酸。分裝于滅菌的小試管內，每管0.5mL，上面滴加一層液體石蠟，115℃高壓滅菌10min。
3.12.3 試驗方法
從瓊脂斜面上挑取培養物接種，于36±1℃培養18～24h，觀(guān)察結果。氨基酸脫羧酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿，培養基應呈紫色。陰性者無(wú)堿性產(chǎn)物，但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養基變?yōu)辄S色。對照管應為黃色。
3.13 蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗用)
3.13.1 成分
蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
3.13.2 制法
按上述成分配制，分裝小試管，121℃高壓滅菌15min。
3.13.3 靛基質(zhì)試劑
3.13.3.1 柯凡克試劑：將5g對二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后緩慢加入濃鹽酸25mL。
3.13.3.2 歐－波試劑：將1g對二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇內。然后緩慢加入濃鹽酸20mL。
3.13.4 試驗方法
挑取小量培養物接種，在36±1℃培養1～2d，必要時(shí)可培養4～5d。加入柯凡克試劑約0.5mL，輕搖試管，陽(yáng)性者于試劑層呈深紅色；或加入歐－波試劑約0.5mL，沿管壁流下，覆蓋于培養液表面，陽(yáng)性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。
注：蛋白胨中應含有豐富的色氨酸。每批蛋白胨買(mǎi)來(lái)后，應先用已知菌種鑒定后方可使用。
3.14 硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗用)
3.14.1 成分
牛肉膏 3g
酵母浸膏 3g
蛋白胨 10g
硫酸亞鐵 0.2g
硫代硫酸鈉 0.3g
氯化鈉 5g
瓊脂 12g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
3.14.2 制法
加熱溶解，校正pH，分裝試管，115℃高壓滅菌15min，取出直立候其凝固。
3.14.3 試驗方法
挑取瓊脂培養物，沿管壁穿刺，于36±1℃培養1～2d，觀(guān)察結果。產(chǎn)硫化氫者使培養基變?yōu)楹谏?br> 注：腸桿菌科細菌測定硫化氫的產(chǎn)生，應采用三糖鐵瓊脂或本培養基。
3.15 尿素瓊脂
3.15.1 成分
蛋白胨 1g
氯化鈉 5g
葡萄糖 1g
磷酸二氫鉀 2g
0.4%酚紅溶液 3mL
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
20%尿素溶液 100mL
pH7.2±0.1
3.15.2制法
將除尿素和瓊脂以外的成分配好，并校正pH，加入瓊脂，加熱溶化并分裝燒瓶。121℃高壓滅菌15min。冷至50～55℃，加入經(jīng)除菌過(guò)濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為2%，最終pH應為7.2±0.1。分裝于滅菌試管內，放成斜面備用。
3.15.3 試驗方法
挑取瓊脂培養物接種，在36±1℃培養24h，觀(guān)察結果。尿素酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿而使培養基變?yōu)榧t色。
3.16 氰化鉀(KCN)培養基
3.16.1 成分
蛋白胨 10g
氯化鈉 5g
磷酸二氫鉀 0.225g
磷酸氫二鈉 5.64g
蒸餾水 1000mL
0.5%氰化鉀溶液 20mL
pH7.6
3.16.2 制法
將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。放在冰箱內使其充分冷卻。每100mL培養基加入0.5%氰化鉀溶液2.0mL(最后濃度為1∶10000)，分裝于12mm×100mm滅菌試管，每管約4mL，立刻用滅菌橡皮塞塞緊，放在4℃冰箱內，至少可保存兩個(gè)月。同時(shí)，將不加氰化鉀的培養基作為對照培養基，分裝試管備用。
3.16.3 試驗方法
將瓊脂培養物接種于蛋白胨水內成為稀釋菌液，挑取1環(huán)接種于氰化鉀(KCN)培養基。并另挑取1環(huán)接種于對照培養基。在36±1℃培養1～2d，觀(guān)察結果。如有細菌生長(cháng)即為陽(yáng)性(不抑制)，經(jīng)2d細菌不生長(cháng)為陰性(抑制)。
注：氰化鉀是劇毒藥物，使用時(shí)應小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分裝培養基應在冰箱內進(jìn)行。試驗失敗的主要原因是封口不嚴，氰化鉀逐漸分解，產(chǎn)生氫氰酸氣體逸出，以致藥物濃度降低，細菌生長(cháng)，因而造成假陽(yáng)性反應。試驗時(shí)對每一環(huán)節都要特別注意。
3.17 硝酸鹽培養基
3.17.1 成分
硝酸鉀 0.2g
蛋白 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
3.17.2 制法
溶解，校正pH，分裝試管，每管約5mL，121℃高壓滅菌15min。
3.17.3 硝酸鹽還原試劑
3.17.3.1 甲液：將對氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
3.17.3.2 乙液：將甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
3.17.4 試驗方法
接種后在36±1℃培養1～4d，加入甲液和乙液各一滴，觀(guān)察結果。硝酸鹽還原為亞硝酸鹽時(shí)于立刻或數分鐘內顯紅色。
注：本試驗陰性的原因有三：細菌不能還原硝酸鹽；亞硝酸鹽繼續分解，生成氨和氮；培養基不適于細菌的生長(cháng)。如欲檢查培養基中硝酸鹽是否未被分解，可再加入鋅粉少許，可使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽而呈現紅色。
3.18 氧化酶試驗
3.18.1 試劑
3.18.1.1 1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液：少量新鮮配制，干冰箱內避光保存。
3.18.1.2 1%α-萘酚－乙醇溶液。
3.18.2 試驗方法
3.18.2.1 取白色潔凈濾紙沾取菌落。加鹽酸二甲基對苯二胺溶液一滴，陽(yáng)性者呈現粉紅色，并逐漸加深；再加α-萘酚溶液一滴，陽(yáng)性者于半分鐘內呈現鮮藍色。陰性于兩分鐘內不變色。
3.18.2.2 以毛細吸管吸取試劑，直接滴加于菌落上，其顯色反應與以上相同。
3.19 細胞色素氧化酶試驗
3.19.1 試劑
3.19.1.1 1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液。
3.19.1.2 1%α-萘酚－乙醇溶液。
3.19.2 試驗方法
取37℃(或低于37℃)培養20h的斜面培養物一支，將兩種試劑各2～3滴，從斜面上端滴下，并將斜面略加傾斜，使試劑混合液流經(jīng)斜面上的培養物。如系平板培養物，則可用試劑混合液滴在菌落上。
3.19.3 結果
于2min內呈現藍色者為陽(yáng)性。陽(yáng)性培養物大多數于半分鐘內出現強陽(yáng)性反應，2min以后出現微弱或可疑反應均作為陰性結果。
3.20 過(guò)氧化氫酶試驗
3.20.1 試劑
3%過(guò)氧化氫溶液：臨用時(shí)配制。
3.20.2 試驗方法
挑取固體培養基上菌落一接種環(huán)，置于潔凈試管內，滴加3%過(guò)氧化氫溶液2mL，觀(guān)察結果。
3.20.3 結果
于半分鐘內發(fā)生氣泡者為陽(yáng)性，不發(fā)生氣泡者為陰性。
3.21 過(guò)氧化物酶試驗
3.21.1 試劑
3.21.1.1 2%兒茶酚溶液。
3.21.1.2 3%過(guò)氧化氫溶液。
3.21.2 試驗方法
挑取固體培養基上菌落一接種環(huán)，置于潔凈試管內，滴加2%兒茶酚溶液1mL及3%過(guò)氧化氫溶液1mL。靜置于室溫(20℃)中30～60min，觀(guān)察結果。
3.21.3 結果
陽(yáng)性反應，細菌變?yōu)楹诤稚�；陰性反應，細菌不變色�?br> 注：過(guò)氧化物酶的作用可受氰化鉀的抑制。
3.22 磷酸鹽緩沖液
3.22.1 儲存液
磷酸二氫鉀 34g
1mol/L氫氧化鈉溶液 175mL
蒸餾水 825mL
pH7.2
3.22.2 制法
先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾水中，用1mol/L氫氧化鈉溶液校正pH后，再用蒸餾水稀釋至1000mL。
3.22.3 稀釋液：取儲存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL。分裝每瓶100mL或每管10mL，121℃高壓滅菌15min。
3.23 明膠磷酸鹽緩沖液
3.23.1 成分
明膠 2g
磷酸氫二鈉 4g
蒸餾水 1000mL
pH6.2
3.23.2 制法
加熱溶解，校正pH，121℃高壓滅菌15min。
3.24 乳酸－苯酚溶液
3.24.1 成分
苯酚 10g
乳酸(比重1.21) 10g
甘油 20g
蒸餾水 10mL
3.24.2 制法
將苯酚在水中郵熱溶解，然后加入乳酸及甘油。
3.24.3 用途
檢驗真菌形態(tài)時(shí)用。
4 一般培養基和專(zhuān)用培養基
4.1 肉浸液肉湯
4.1.1 成分
絞碎牛肉 500g
氯化鈉 5g
蛋白胨 10g
磷酸氫二鉀 2g
蒸餾水 1000mL
4.1.2 制法
將絞碎之去筋膜無(wú)油脂牛肉500g加蒸餾水1000mL，混合后放冰箱過(guò)夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時(shí)，使肉渣完全凝結成塊，用絨布過(guò)濾，并擠壓收集全部濾液，加水補足原量。加入蛋白胨、氯化鈉和磷酸鹽，溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并過(guò)濾，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌30min。
4.2 肉浸液瓊脂
4.2.1 成分
肉浸液肉湯(PH7.4) 1000mL
瓊脂 17～20g
4.2.2 制法
加熱溶化瓊脂，分裝燒瓶或試管，121℃高壓滅菌30min。根據需要，傾注平板或放成斜面。
4.3 牛肉(或牛心)消化湯
4.3.1 成分
絞碎牛肉(或牛心) 1000g
15%氫氧化鈉溶液 27mL
胰蛋白酶 40mL
三氯甲烷 1mL
氯化鈉 10g
蒸餾水 2000mL
4.3.2 制法
4.3.2.1 稱(chēng)取碎牛肉，加蒸餾水，隔水加熱到80℃，維持15min。
4.3.2.2 加氫氧化鈉溶液，對pH試紙呈弱堿性，冷至40℃。
4.3.2.3 加胰蛋白酶、氯仿，在36±1℃放置4～5h，每小時(shí)搖動(dòng)一二次。
4.3.2.4 4h后，吸取上層液5mL于試管中，加5%硫酸銅溶液0.1mL、4%氫氧化鈉溶液5mL，混合之。若呈紅色，則不須再消化，可由溫箱取出。
4.3.2.5 加入15%乙酸溶液45mL，對pH試紙呈酸性。
4.3.2.6 煮沸15min，使胰蛋白酶破壞，冷后，放冰箱內一夜。
4.3.2.7 次日吸取上層清液，加氯化鈉10g，并加水補足原量，煮沸。
4.3.2.8 校正pH7.4～7.6(加15%氫氧化鈉溶液約10mL)，加熱，用濾紙過(guò)濾，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌20min。
注：①此培養基可作為瓊脂培養基的基礎，不需加蛋白胨。
�、谝鹊鞍酌钢渲疲悍Q(chēng)取去脂絞碎的豬胰500g，加入乙醇500mL、蒸餾水1500mL，混合之，裝人玻塞瓶?jì)�。每日搖勻三次。3d后，用絨布過(guò)濾擠出其汁，加鹽酸至0.05%，放冰箱內保存備用。
4.4 血消化湯
4.4.1 成分
絞碎豬胃 100g
絞碎豬血塊 100g
蒸餾水 1000mL
濃鹽酸 10mL
4.4.2 制法
4.4.2.1 洗滌豬胃，除去油脂，保留胃粘膜，用絞肉機絞碎。
4.4.2.2 用絞肉機將豬血塊絞碎。
4.4.2.3 將蒸餾水加熱至55℃，加入豬胃、豬血塊和鹽酸，置55℃水浴中24h，時(shí)常加以搖動(dòng)。
4.4.2.4 從水浴內取出，加入1moL/L碳酸鈉溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱內一夜。
4.4.2.5 吸取上層清液，加磷酸氫二鉀1g，加熱至75℃，加入1mol/L碳酸鈉溶液45mL，煮沸，校正pH7.2～7.4。
4.4.2.6 用濾紙過(guò)濾，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌20min。
注：①本培養基不含糖可供作鑒別培養基之基礎，不需加蛋白胨和氯化鈉。
�、�1mol/L碳酸鈉溶液之配法：無(wú)水碳酸鈉10.6g，溶于1000mL蒸餾水中。
4.5 豆粉瓊脂
4.5.1 成分
牛心消化湯(PH7.4～7.6) 1000mL
瓊脂 20g
黃豆粉浸液 50mL
4.5.2 制法
將瓊脂加在牛心消化湯內，加熱溶解，過(guò)濾。加入豌豆粉浸液，分裝每瓶100mL，121℃高壓滅菌15min。
4.5.2.1 豌豆粉浸液制法：取豌豆粉5g、氯化鈉10g，加入蒸餾水100mL。置100℃水浴內加熱1h，放于冰箱中過(guò)夜。吸取上清液即為豌豆浸液。
4.6 血瓊脂
4.6.1 成分
pH7.4～7.6豆粉瓊脂 100mL
脫纖維羊血(或兔血) 5～10mL
4.6.2 制法
加熱溶化瓊脂，冷至50℃，以滅菌手續加入脫纖維羊血，搖勻，傾注平板。亦可分裝滅菌試管，置成斜面。亦可用其他營(yíng)養豐富的基礎培養基配制血瓊脂。
4.7 營(yíng)養瓊脂
4.7.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化鈉 5g
瓊脂 15～20g
蒸餾水 1000mL
4.7.2 制法
將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內，加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，校正pH至7.2～7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化。分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。
注：此培養基可供一般細菌培養之用，可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計數，瓊脂量為1.5%；如作成平板或斜面，則應為2%。
4.8 營(yíng)養肉湯
4.8.1 成分
蛋白陳 10g
牛肉膏 3g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
4.8.2 制法
按上述成分混合，溶解后校正pH，分裝燒瓶，每瓶225mL，121℃高壓滅菌15min。
4.9 乳糖膽鹽發(fā)酵管
4.9.1 成分
蛋白胨 20g
豬膽鹽(或牛、羊膽鹽) 5g
乳糖 10g
0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL
蒸餾水 1000mL
pH7.4
4.9.2 制法
將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，分裝每管10mL，并放入一個(gè)小倒管，115℃高壓滅菌15min。
注：雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。
4.10 乳糖發(fā)酵管
4.10.1 成分
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL
蒸餾水 1000mL
pH7.4
4.10.2 制法
將蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，按檢驗要求分裝30mL、10mL或3mL，并放入一個(gè)小倒管，115℃高壓滅菌15min。
注：①雙料乳糖發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。
�、�30mL和10mL乳糖發(fā)酵管專(zhuān)供醬油及醬類(lèi)檢驗用，3mL乳糖發(fā)酵管供大腸菌群證實(shí)試驗用。
4.11 EC肉湯
4.11.1 成分
胰蛋白胨 20g
3號膽鹽(或混合膽鹽) 1.5g
乳糖 5g
磷酸氫二鉀 4g
磷酸二氫鉀 1.5g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
4.11.2 制法
將上述成分混合，溶解后，分裝有發(fā)酵倒管的試管中，121℃高壓滅菌15min，最終pH為6.9±0.2。
4.12 緩沖蛋白胨水(BP)
4.12.1 成分
蛋白胨 10g
氯化鈉 5g
磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O) 9g
磷酸二氫鉀 1.5g
蒸餾水 1000mL
pH7.2
4.12.2 制法
按上述成分配好后以大燒瓶裝，121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)無(wú)菌分裝每瓶225mL。
注：本培養基供沙門(mén)氏菌前增菌用。
4.13 氯化鎂孔雀綠增菌液(MM)
4.13.1 甲液
胰蛋白胨 5g
氯化鈉 8g
磷酸二氫鉀 1.6g
蒸餾水 1000mL
4.13.2 乙液
氯化鎂(化學(xué)純) 40g
蒸餾水 100mL
4.13.3 丙液
0.4%孔雀綠水溶液。
4.13.4 制法
分別按上述成分配好后，121℃高壓滅菌15min備用。臨用時(shí)取甲液90mL、乙液9mL、丙液0.9mL，以無(wú)菌操作混合即可。
注：本培養基亦稱(chēng)Rappaport 10(R10)增菌液。
4.14 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)
4.14.1 基礎培養基
多胨或脙胨 5g
膽鹽 1g
碳酸鈣 10g
硫代硫酸鈉 30g
蒸餾水 1000mL
4.14.2 碘溶液
碘 6g
碘化鉀 5g
蒸餾水 20mL
4.14.3 制法
將基礎培養基的各成分加入蒸餾水中，加熱溶解，分裝每瓶100mL。分裝時(shí)應隨時(shí)振搖，使其中的碳酸鈣混勻。121℃高壓滅菌15min備用。臨用時(shí)每100mL基礎培養基中加入碘溶液2mL、0.1%煌綠溶液1mL。
4.15 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(換用方法)
4.15.1 基礎液
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化鈉 3g
碳酸鈣 45g
蒸餾水 1000mL
將各成分加入于蒸餾水中，加熱至約70℃溶解，校正pH至7.0±0.1，121℃高壓滅菌20min。
4.15.2 硫代硫酸鈉溶液
硫代硫酸鈉(Na2S2O3·5H2O) 50g
蒸餾水 加至100mL
4.15.3 碘溶液
碘片 20g
碘化鉀 25g
蒸餾水加至 100mL
將碘化鉀充分溶解于是少量的蒸餾水中，加入碘片，振搖玻瓶至碘片全部溶解，再加入蒸餾水至規定量。貯于棕色玻瓶?jì)�，緊塞瓶蓋備用。
4.15.4 煌綠水溶液
煌綠 0.5g
蒸餾水 100mL
存放暗處，不少于1d，使其自然滅菌。
4.15.5 牛膽鹽溶液
干燥的牛膽鹽 10g
蒸餾水 100mL
煮沸溶解，121℃高壓滅菌20min。
4.15.6 制備
基礎液 900mL
硫代硫酸鈉溶液 100mL
碘液 20mL
煌綠溶液 2mL
牛膽鹽溶液 50mL
臨用前，按上列順序，以無(wú)菌操作依次加入于基礎液中，每加入一種成分，均應搖勻后再加入另一種成分。分裝于滅菌瓶中，每瓶100mL。
4.16 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)
4.16.1 成分
蛋白胨 5g
乳糖 4g
亞硒酸氫鈉 4g
磷酸氫二鈉 5.5g
磷酸二氫鉀 4.58
L-胱氨酸 0.01g
蒸餾水 1000mL
4.16.2 1%L-胱氨酸－氫氧化鈉溶液的配法：稱(chēng)取L－胱氨酸0.1g(或DL－胱氨酸0.2g)，加1mol/L氫氧化鈉1.5mL，使溶解，再加入蒸餾水8.5mL即成。
4.16.3 制法：將除亞硒酸氫鈉和L－胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸餾水中，加熱煮沸，俟冷備用。另將亞硒酸氫鈉溶解于100mL蒸餾水中，加熱煮沸，候冷，以無(wú)菌操作與上液混合。再加入1%L－骯氨酸－氫氧化鈉溶液1mL。分裝于滅菌瓶中，每瓶100mL，pH應為7.0±0.1。
4.17 GN增菌液
4.17.1 成分
胰蛋白胨 20g
葡萄糖 1g
甘露醇 2g
檸檬酸鈉 5g
去氧膽酸鈉 0.5g
磷酸氫二鉀 4g
磷酸二氫鉀 1.5g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.0
4.17.2 制法
按上述成分配好，加熱使溶解，校正pH。分裝每瓶225mL，115℃高壓滅菌15min。
4.18 腸道菌增菌肉湯
4.18.1 成分
蛋白胨1 10g
葡萄糖 5g
牛膽鹽 20g
磷酸氫二鈉 8g
磷酸二氫鉀 2g
煌綠 0.015g
蒸餾水 1000mL
pH7.2
4.18.2 制法
按上述成分配好，加熱使溶解，校正pH。分裝每瓶30mL，115℃高壓滅菌15min。
4.19 亞硫酸鉍瓊脂(BS)
4.19.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
葡萄糖 5g
硫酸亞鐵 0.3g
磷酸氫二鈉 4g
煌綠 0.025g
檸檬酸鉍銨 2g
亞硫酸鈉 6g
瓊脂 18～20g
蒸餾水 1000mL
pH7.5
4.19.2 制法
4.19.2.1 將前面5種成分溶解于300mL蒸餾水中。
4.19.2.2 將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解。
4.19.2.3 將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解，冷至80℃
4.19.2.4 將以上三液合并，補充蒸餾水至1000mL，校正pH，加0.5%煌綠水溶液5mL，搖勻。冷至50～55℃，傾注平皿。
注：此培養基不需高壓滅菌。制備過(guò)程不宜過(guò)分加熱.以免降低其選擇性。應在臨用前一天制備，貯存于室溫暗處。
超過(guò)48h不宜使用。
4.20 DHL瓊脂(Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar)
4.20.1 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
去氧膽酸鈉 1g
硫代硫酸鈉 2.3g
檸檬酸鈉 1g
檸檬酸鐵銨 1g
中性紅 0.03g
瓊脂 18～20g
蒸餾水 1000mL
pH7.3
4.20.2 制法
將除中性紅和瓊脂以外的成分溶解于400mL蒸餾水中，校正pH。再將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解，兩液合并，并加入0.5%中性紅水溶液6mL，待冷至50～55℃，傾注平板。
4.21 HE瓊脂(Hektoen Enteric Agar)
4.21.1 成分
脙胨 12g
牛肉膏 3g
乳糖 12g
蔗糖 12g
水楊素 2g
膽鹽 20g
氯化鈉 5g
瓊脂 18～20g
蒸餾水 1000mL
0.4%溴麝香草酚藍溶液 16mL
Andrade指示劑 20mL
甲液 20mL
乙液 20mL
pH7.5
4.21.2 制法
將前面七種成分溶解于400mL蒸餾水內作為基礎液；將瓊脂加入于600mL蒸餾水內，加熱溶解。加入甲液和乙液于基礎液內，校正pH。再加入指示劑，并與瓊脂液合并，待冷至50～55℃，傾注平板。
注：①此培養基不可高壓滅菌。
�、诩滓旱呐渲�
硫代硫酸鈉 34g
檸檬酸鐵銨 4g
蒸餾水 100mL
�、谝乙旱呐渲�
去氧膽酸鈉 10g
蒸餾水 100mL
�、贏(yíng)ndrade指示劑
酸性復紅 0.5g
1mol/L氫氧化鈉溶液 16mL
蒸餾水 100mL
將復紅溶解于蒸餾水中，加入氫氧化鈉溶液。數小時(shí)后如復紅褪色不全，再加氫氧化鈉溶液1～2mL。
4.22 SS瓊脂
4.22.1 基礎培養基
牛肉膏 5g
脙胨 5g
三號膽鹽 3.5g
瓊脂 17g
蒸餾水 1000mL
再將兩液混合，121℃高壓滅菌15min，保存備用。
4.22.2 完全培養基
基礎培養基 100mL
乳糖 10g
檸檬酸鈉 8.5g
硫代硫酸鈉 8.5g
10%檸檬酸鐵溶液 10mL
1%中性紅溶液 2.5mL
0.1%煌綠溶液 0.33mL
加熱溶化基礎培養基，按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合均勻，校正至pH7.0，加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。
注：①制好的培養基宜當日使用，或保存于冰箱內于48h內使用。
�、诨途G溶液配好后應在10d以?xún)仁褂谩?br> �、劭梢再徲肧S瓊脂的干燥培養基。
4.23 Ws瓊脂
4.23.1 成分
�、陔恕 �12g
牛肉膏 3g
氯化鈉 5g
乳糖 12g
蔗糖 12g
十二烷基硫酸鈉 2g
瓊脂 15g
Andrade指示劑 20mL
0.4%溴麝香草酚藍溶液 16mL
甲液 20mL
蒸餾水 1000mL
pH7.0
4.23.2 制法
除指示劑和甲液外，將其他成分加熱溶解，不需消毒，校正pH后加入指示劑和甲液，傾注平板應呈草綠色。
注：①供沙門(mén)氏菌分離用。
�、贏(yíng)ndrade指示劑和甲液的配制均見(jiàn)HE瓊脂。
4.24 麥康凱瓊脂
4.24.1 成分
蛋白胨 17g
脙胨 3g
豬膽鹽(或牛、羊膽鹽) 5g
氯化鈉 5g
瓊脂 17g
蒸餾水 1000mL
乳糖 10g
0.01%結晶紫水溶液 10mL
0.5%中性紅水溶液 5mL
4.24.2 制法
4.24.2.1 將蛋白胨、胨、膽鹽和氯化鈉溶解于400mL蒸餾水中，校正pH7.2。將瓊脂加入600mL蒸餾水中，加熱溶解。將兩液合并，分裝于燒瓶?jì)龋?21℃高壓滅菌15min備用。
4.24.2.2 臨用時(shí)加熱溶化瓊脂，趁熱加入乳糖，冷至50～55℃時(shí)，加入結晶紫和中性紅水溶液，搖勻后傾注平板。
注：結晶紫及中性紅水溶液配好后須經(jīng)高壓滅菌。
4.25 伊紅美藍瓊脂(EMB)
4.25.1 成分
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氫二鉀 2g
瓊脂 17g
2%伊紅Y溶液 20mL
0.65%美藍溶液 10mL
蒸餾水 1000mL
pH7.1
4.25.2 制法
將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，校正PH，分裝于燒瓶?jì)龋?21℃高壓滅菌15min備用。臨用時(shí)加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至50～55℃，加入伊紅和美藍溶液，搖勻，傾注平板。
4.26 三糖鐵瓊脂(TSI)
4.26.1 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化鈉 5g
硫酸亞鐵銨〔e(NH4)2(SO4)2·6H2O〕 0.2g
硫代硫酸鈉 0.2g
瓊脂 12g
酚紅 0.025g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
4.26.2 制法
將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH。加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5mL，搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min。放置高層斜面備用。
4.27 三糖鐵瓊脂(換用方法)
4.27.1 成分
蛋白胨 15g
脙胨 5g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化鈉 5g
硫酸亞鐵 0.2g
硫代硫酸鈉 0.3g
瓊脂 12g
酚紅 0.025g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
4.27.2 制法
將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH。加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5mL，搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min，放置高層斜面備用。
4.28 克氏雙糖鐵瓊脂(KI)
4.28.1 上層培養基成分
血消化湯(PH7.6) 500mL
瓊脂 6.5g
硫代硫酸鈉 0.1g
硫酸亞鐵銨 0.1g
乳糖 5g
0.2%酚紅溶液 5mL
4.28.2 下層培養基成分
血消化湯(pH7.6) 500mL
瓊脂 2g
葡萄糖 1g
0.2%酚紅溶液 5mL
4.28.3 制法
4.28.3.1 取血消化湯按上層和下層的瓊脂用量，分別加入瓊脂，加熱溶解。
4.28.3.2 分別加入其他各種成分。將上層培養基分裝于燒瓶?jì)�；將下層培養基分裝于滅菌12mm×100mm試管內，每管約2mL。115℃高壓滅菌10min。
4.28.3.3 將上層培養基放在56℃水浴箱內保溫；將下層培養基直立放在室溫內，使其凝固。
4.28.3.4 俟下層培養基凝固后，以無(wú)菌手續將上層培養基分裝于下層培養基的上面，每管約1.5mL，放成斜面。
4.29 克氏雙糖鐵瓊脂(換用方法)
4.29.1 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
葡萄糖 1g
氯化鈉 5g
檸檬酸鐵銨 0.5g
硫代硫酸鈉 0.5g
瓊脂 12g
酚紅 0.025g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
4.29.2 制法
將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH。加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5mL，搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到比較高的底層。121℃高壓滅菌15min。放置高層斜面備用。
4.30 半固體瓊脂
4.30.1 成分
蛋白胨 1g
生肉膏 0.3g
氯化鈉 0.5g
瓊脂 0.35～0.4g
蒸餾水 100mL
pH7.4
4.30.2 制法
按以上成分配好，煮沸使溶解，并校正pH。分裝小試管。121℃高壓滅菌15min。直立凝固備用。
注：供動(dòng)力觀(guān)察、菌種保存、H抗原位相變異試驗等用。
4.31 葡萄糖半固體發(fā)酵管
4.31.1 成分
蛋白胨 1g
牛肉膏 0.3g
氯化鈉 0.5g
1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL
葡萄糖 1g
瓊脂 0.3g
蒸餾水 100mL
pH7.4
4.31.2 制法
將蛋白胨、牛肉膏和氯化鈉加入于水中，校正pH后加入瓊脂加熱溶解，再加入指示劑和葡萄糖，分裝小試管，滅菌121℃ 15 min。
4.32 5%乳糖發(fā)酵管
4.32.1 成分
蛋白胨 0.2g
氯化鈉 0.5g
乳糖 5g
2%溴麝香草酚藍水溶液 1.2mL
蒸餾水 100mL
pH7.4
4.32.2 制法
除乳糖以外的各成分溶解于50mL蒸餾水內，校正pH。將乳糖溶解于另外50mL蒸餾水內，分別滅菌121℃ 15min，將兩液混合，以無(wú)菌操作分裝于滅菌小試管內。
注：在此培養基內，大部分乳糖遲緩發(fā)酵的細菌可于1d內發(fā)酵。
4.33 CAYE培養基
此培養基附在腸毒素診斷試劑盒內，如無(wú)此培養基，亦可用Honda氏產(chǎn)毒肉湯。
4.34 Honda氏產(chǎn)毒肉湯
4.34.1 成分
水解酪蛋白 20g
酵母浸膏粉 10g
氯化鈉 2.5g
磷酸氫二鈉 15g
葡萄糖 5g
微量元素 0.5mL
蒸餾水 1000mL
pH7.5
4.34.2 制法
溶解后校正pH，高壓滅菌121℃ 15min，待冷至45～50℃時(shí)，加入林可霉素溶液，每毫升培養基內含90μg。
4.34.3 微量元素配方
硫酸鎂 5g，氯化鐵 0.5g，氯化鉆 2g，蒸餾水 100mL
4.35 Elek氏培養基(毒素測定用)
4.35.1 成分
胨 20g
麥芽糖 3g
乳糖 0.7g
氯化鈉 5g
瓊脂 15g
40%氫氧化鈉溶液 1.5mL
蒸餾水 1000mL
pH7.8
4.35.2 制法
用500mL蒸餾水溶解瓊脂以外的成分，煮沸，并用濾紙過(guò)濾。用1mo1/L氫氧化鈉校正pH。用另外500mL蒸餾水加熱溶解瓊脂。將兩液混合，分裝試管10mL或20mL。121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)加熱溶化瓊脂傾注平板。
4.36 氯化鎂孔雀綠羧芐青霉素培養基
4.36.1 甲液：胰蛋白胨 10g
蒸餾水 1000mL
乙液：磷酸氫二鈉 9.5g
蒸餾水 1000mL
丙液：氯化鎂(MgCl2·6H2O) 40g
蒸餾水 400mL
以上分別在121℃滅菌15min。
丁液：孔雀綠 0.2g
蒸餾水 100mL
戊液：羧芐青霉素 1mg/mL
4.36.2 制法
取甲液620mL、乙液160mL、丙液212mL混合，再加入丁液6.4mL和戊液2.4mL，即為1000mL培養基。分裝滅菌燒瓶，每瓶100mL，或滅菌試管10mL。
4.37 胰蛋白胨水
4.37.1 成分
胰蛋白胨 10g
蒸餾水 1000mL
pH7.0
4.37.2 制法
將上述成分溶解，校正pH。分裝試管，121℃高壓滅菌15min。
4.38 Rustigian氏尿素培養液
4.38.1 成分
尿素 20.0g
酵母浸膏 0.1g
磷酸二氫鉀(KH2PO4) 0.091g
磷酸氫二鈉(Na2HPO4) 0.095g
酚紅 0.01g
蒸餾水 1000mL
4.38.2 制法
將上述成分于蒸餾水中溶解，校正pH為6.8±0.2。不要加熱，過(guò)濾除菌，無(wú)菌分裝于滅菌小試管中，每管為約3mL。
4.38.3 用途
尿素酶試驗用。
4.39 氯化鈉結晶紫增菌液
4.39.1 成分
蛋白胨 20g
氯化鈉 40g
0.01%結晶紫溶液 5mL
蒸餾水 1000mL
pH9.0
4.39.2 制法
胨晶晶紫外，其他按上述成分配好，加熱溶解。約加30%氫氧化鉀溶液4.5mL，校正pH。加熱煮沸，過(guò)濾。再加入結晶紫溶液，混合后分裝試管。121℃高壓滅菌15min。
4.40 氯化鈉蔗糖瓊脂
4.40.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 10g
氯化鈉 50g
蔗糖 10g
瓊脂 18g
0.2%溴麝香草酚藍溶液 20mL
蒸餾水 1000mL
pH7.8
4.40.2 制法
將牛肉膏、蛋白胨及氯化鈉溶解于蒸餾水中，校正pH。加入瓊脂，加熱溶解，過(guò)濾。加入指示劑，分裝燒瓶100mL。121℃高壓滅菌15min備用。臨用前在100mL培養基內加入蔗糖1g，加熱溶化并冷至50℃，傾注平板。
4.41 嗜鹽菌選擇性瓊脂
4.41.1 成分
蛋白胨 20g
氯化鈉 40g
瓊脂 17g
0.01%結晶紫溶液 5mL
蒸餾水 1000mL
pH8.7
4.41.2 制法
除結晶紫和瓊脂外，其他按上述成分配好，校正pH。加入瓊脂，加熱溶解。再加入結晶紫溶液，分裝燒瓶，每瓶100mL。
4.42 3.5%氯化鈉三糖鐵瓊脂
4.42.1 成分
三糖鐵瓊脂 1000mL
氯化鈉 30g
4.42.2 制法
按4.26或4.27配制三糖鐵瓊脂，再加入氯化鈉30g，分裝試管，121℃高壓滅菌15min。放置高層斜面備用。
4.43 氯化鈉血瓊脂
4.43.1 成分
酵母膏 3g
蛋白胨 10g
氯化鈉 70g
磷酸氫二鈉 5g
甘露醇 10g
結晶紫 0.001g
瓊脂 15g
蒸餾水 1000mL
4.43.2 制法
調pH8.0加熱30min(不必高壓)，待冷至45℃左右時(shí)，加入新鮮人或兔血(5%～10%)混合均勻，傾注平皿。
4.44 嗜鹽性試驗培養基
4.44.1 成分
蛋白胨 2g
氯化鈉 按不同量加
蒸餾水 100mL
pH7.7
4.44.2 制法
配制2%蛋白胨水，校正pH，共配制5瓶，每瓶100mL。每瓶分別加入不同量的氯化鈉：(1)不加；(2)3g；(3)7g；(4)9g；(5)11g。待溶解后分裝試管。121℃高壓滅菌15min。
4.45 3.5%氯化鈉生化試驗培養基
4.45.1 成分及制法
根據所需糖的種類(lèi)按3.2配制。只是將氯化鈉含量改為3.5%，pH為7.7。
4.46 改良磷酸鹽緩沖液(小腸結腸炎耶爾森氏菌專(zhuān)用)
4.46.1 成分
磷酸氫二鈉(Na2HPO4 8.23g
磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O) 1.2g
氯化鈉(NaCl) 5.0g
三號膽鹽 1.5g
山梨醇 20g
4.46.2 制法
將磷酸鹽及氯化鈉溶于蒸餾水中，再加入三號膽鹽及山梨醇，溶解后校正pH為7.6，分裝試管，于121℃高壓滅菌15min，備用。
4.47 CIN－1培養基
4.47.1 基礎培養基
胰胨 20.0g
酵母浸膏 2.0g
甘露醇 20.0g
氯化鈉 1.0g
去氧膽酸鈉 2.0g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.01g
瓊脂 12.0g
蒸餾水 950mL
pH7.5±0.1
將基礎培養基高壓滅菌。
4.47.2 Irgasan：以95%的乙醇作溶劑，溶解二苯醚，配成0.4%的溶液，待基礎液冷至80℃時(shí)，加入1mL混勻。
4.47.3 冷至50℃時(shí)，加入：
中性紅(3mg/mL) 10.0mL
結晶紫(0.1mg/mL) 10.0mL
頭孢菌素(1.5mg/mL) 10.0mL
新生霉素(0.25mg/mL) 10.0mL
最后不斷攪拌著(zhù)加入10.0mL的10%氯化鍶，倒平皿。
4.48 改良Y培養基
4.48.1 成分
蛋白胨 15.0g
氯化鈉 5.0g
乳糖 10.0g
草酸鈉 2.0g
去氧膽酸鈉 6.0g
三號膽鹽 5.0g
丙酮酸鈉 2.0g
孟加拉紅 40mg
水解酪蛋白 5.0g
瓊脂 17.0g
蒸餾水 1000mL
4.48.2 制法
將上述成分混合，于121℃高壓滅菌15min，待冷至45℃左右時(shí)，傾注平皿。最終pH7.4±0.1。
4.49 改良克氏雙糖
4.49.1 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
山梨醇 20g
葡萄糖 1g
氯化鈉 5g
檸檬酸鐵銨 0.5g
硫代硫酸鈉 0.5g
瓊脂 12g
酚紅 0.025g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
4.49.2 制法
將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH。加入0.02%酚紅水溶液12.5mL，搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到比較高的底層。121℃高壓滅菌15min，放置高層斜面備用。
4.50 快速硫化氫(H2S)試驗瓊脂
4.50.1 制法
A液：布氏桿菌肉湯 970mL
無(wú)水磷酸氫二鈉 1.18g
無(wú)水磷酸二氫鉀 0.23g
瓊脂 2g
加熱溶解，高壓滅菌，121℃ 15min。加入B液10%硫酸亞鐵(含7H2O)，C液10%偏亞硫酸氫鈉，D液10%丙酮酸鈉。
4.50.2 上述B、C、D溶液均新鮮配制，用除菌濾膜過(guò)濾。將此除菌溶液各1mL混合后再入A液中，無(wú)菌調pH到7.3，無(wú)菌分裝，每管3mL，塞緊備用。
4.51 DNA酶甲基綠瓊脂(DTA)
4.51.1 成分
DNA 2.0g
植物蛋白胨 5.0g
胰蛋白胨 15.0g
氯化鈉 5.0g
瓊脂(1.5%) 15.0g
蒸餾水 1000mL
pH7.3
4.51.2 制法
稱(chēng)取各成分后，加水徐徐加熱，避免形成餅溶性絲狀物，121℃ 15min高壓。
4.51.3 甲基綠配制(MG)
配制0.5%的甲基綠水溶液。用等體積氯仿作5～7次抽提，直到氯仿層無(wú)色為止。過(guò)濾除菌，置4℃保存。
4.51.4 每100mL滅菌溶化的DTA培養基加1mL(MG)染料液，甲基綠最終濃度為0.005%。
4.52 Cary－Blair氏運送培養基
4.52.1 成分
硫乙醇酸鈉 1.5g
磷酸氫二鈉 1.1g
氯化鈉 5g
瓊脂 5g
蒸餾水 1000mL
1%氯化鈣溶液 9mL
pH8.4
4.52.2 制法
除氯化鈣外，其他均按上述成分配制，加熱溶解。冷至50℃，加入氯化鈣溶液，校正pH到8.4。分裝試管，每支5mL，或注入具有膠塞的瓶?jì)取?21℃高壓滅菌15min。
4.52.3 用途
作空腸彎曲桿菌、霍亂弧菌、沙門(mén)氏菌、志賀氏菌采樣時(shí)用。
注：在該采樣管中的標本，只能保存72h。
4.53 改良Camp－BAP培養基
4.53.1 成分
胰蛋白胨 10.0g
蛋白胨 10.0g
葡萄糖 1.0g
酵母浸膏 2.0g
氯化鈉 5.0g
焦亞硫酸鈉 0.1g
瓊脂 15.0g
蒸餾水 1000mL
硫乙醇酸鈉 1.5g
萬(wàn)古霉素 10mg
多粘菌素B 2500 國際單位
兩性霉素B(Amphotericin B) 2mg
頭孢霉素(Cephalosporin，亦可用ceporan) 15mg
脫纖維羊血 50mL
4.53.2 制法
4.53.2.1 除抗生素和羊血外，將其他成分混合，加熱溶解，校正pH到7.0±0.2。裝瓶，每瓶100mL。121℃高壓滅菌15min，備用。此為布氏瓊脂基礎培養基。
4.53.2.2 臨用前，加熱溶解基礎瓊脂，冷至60℃。每100mL基礎瓊脂中，加入脫纖維羊血5mL、抗生素混合液0.5mL及兩性霉素B。頭孢霉素混合液0.5mL，搖勻，傾注平板。
4.53.3 說(shuō)明
4.53.3.1 兩性霉素B、頭孢霉素混合液配法：稱(chēng)兩性霉素B2mg和頭孢霉素15mg與無(wú)菌蒸餾水5mL混合即成。
4.53.3.2 稱(chēng)量抗生素必須正確，操作必須小心慎重。
4.54 Skirrow氏培養基
4.54.1 成分
蛋白胨 15.0g
胰蛋白胨(tryptone) 2.5g
酵母浸膏 5.0g
氯化鈉 5.0g
瓊脂 15.0g
蒸餾水 1000.0mL
甲氧芐氨嘧啶(trimethoprim，TMP) 5.0mg
萬(wàn)古霉素(vancomycin) 10.0mg
多粘菌素B(polymyxin) 2500.0國際單位
凍溶馬血 70.0mL
4.54.2 制法
4.54.2.1 除甲氧芐氨嘧啶、抗生素和凍溶馬血外，將其他成分混合溶解。校正pH7.4，裝瓶100mL。121℃高壓滅菌15min，備用。此即血瓊脂基礎培養基。
4.54.2.2 臨用前，加熱溶解基礎培養基，冷至60℃。每100mL基礎培養基中，加入凍溶兩次的馬血7mL及TMP、抗生素混合液0.5mL，搖勻，傾注無(wú)菌平板。
4.54.3 用途
分離空腸彎曲菌之用。
4.54.4 說(shuō)明
4.54.4.1 TMP、抗生素混合液配法：先配成乳酸TMP溶液，以乳酸62mg(約1～2滴)混合于100mL滅菌蒸餾水中，然后再加入TMP溶液。
取乳酸TMP溶液5mL，再加入萬(wàn)古霉素及多粘菌素B，搖勻后，即成TMP抗生素混合液。
4.54.4.2 TMP、抗生素的作用
4.54.4.2.1 TMP(甲氧芐氨嘧啶，又稱(chēng)磺胺增效劑或抗菌增效劑)：為廣譜抗菌劑，其抗菌譜與磺胺嘧啶相似，但對鏈球菌及大多數革蘭氏陰性菌的抗菌作用較磺胺嘧啶強，與抗生素合用有協(xié)同作用，能增加殺菌和抑菌作用。
4.54.4.2.2 萬(wàn)古霉素：是窄譜抗菌素，僅對革蘭氏陽(yáng)性菌有較強的殺菌和抑菌作用，如溶血性鏈球菌、草綠色鏈球菌、腸球菌、金黃色葡萄球菌等。
4.54.4.2.3 多粘菌素B：僅限于對革蘭氏陰性菌，如對產(chǎn)氣桿菌、流感桿菌、痢疾桿菌等。
4.54.4.2.4 TMP和抗生素稱(chēng)量必須正確，操作必須慎重小心。
4.55 TTC瓊脂
4.55.1 成分
胰蛋白胨(tryptone) 17.0g
大豆胨 3.0g
葡萄糖 6.0g
氯化鈉 2.5g
硫乙醇酸鈉 0.5g
瓊脂 15.0g
L－胱氨酸－鹽酸(L－Cys·HCl) 0.25g
亞硫酸鈉 0.1g
1%氯化血紅素溶液 0.5mL
1%維生素K1溶液 0.1mL
2，3，5－氯化三苯四氮唑(TTC) 0.4g
蒸餾水 1000mL
4.55.2 制法
4.55.2.1 除1%氯化血紅素、維生素K1和TTC外，將其他成分混合，加熱溶解。L－胱氨酸先用少量氫氧化鈉溶解后加入，校正pH7.2，然后加入預先配成的氯化血紅素和維生素K1，充分搖勻。裝瓶，每瓶100mL。121℃高壓滅菌15min，備用。
4.55.2.2 臨用前，溶解基礎瓊脂，每100mL基礎培養基中，加入TTC40mg，充分搖勻，傾注無(wú)菌平板。
4.55.3 說(shuō)明
4.55.3.1 將可疑空腸彎曲菌接種于平板上，在微氧環(huán)境下，于43℃培養48h。陽(yáng)性菌落呈紫紅色，空腸彎曲菌呈陽(yáng)性反應；胎兒和腸道彎曲菌呈陰性反應。
4.55.3.2 1%氯化血紅素溶液和1%維生素K1溶液配法：稱(chēng)取氯化血紅素1g和1mol/L氫氧化鈉5mL混合。再用蒸餾水稀釋到100mL，即為1%氯化血紅素溶液。
稱(chēng)取維生素K11g和純乙醇99mL混合，或用維生素K1針劑。
4.56 甘氨酸培養基
4.56.1 成分
布氏(Brucella)肉湯 1000mL
瓊脂 1.6g
甘氨酸(glycine)(又稱(chēng)氨基乙酸aminoacetic acid) 10.0g
4.56.2 制法
將以上成分混合，加熱溶解，校正pH7.0±0.2，分裝13mm×100mm試管，每支約4mL左右，121℃高壓滅菌15min，備用。
4.56.3 說(shuō)明
空腸彎曲菌對甘氨酸有耐受性，穿刺接種于甘氨酸培養基中，置于微需氧環(huán)境下，在43℃培養48h。在培養基表面出現云霧狀現象為陽(yáng)性，胎兒彎曲菌空腸亞種為陽(yáng)性結果。
4.57 改良磷酸鹽緩沖液
4.57.1 成分
磷酸氫二鈉(Na2HPO4) 8.23g
磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O) 1.20g
氯化鈉(NaCl) 5.0g
蒸餾水 1000.0mL
山梨醇 10.0g
膽鹽 1.5g
4.57.2 制法
將磷酸鹽及氯化鈉溶于蒸餾水中，再加入山梨醇及膽鹽，溶解后，校正pH為7.6，分裝試管。于121℃高壓滅菌15min，備用。
4.58 氯化鎂孔雀綠肉湯
4.58.1 成分
1%胰胨水(高壓滅菌) 156mL
1/15mo1/L磷酸氫二鈉(Na2HPO4)溶液(高壓滅菌) 40mL
40%(m/V)氯化鎂(MgCl2·6H2O)水溶液(100℃煮沸數分鐘) 53mL
0.2%孔雀綠溶液 1.6mL
4.58.2 制法
將上述幾種溶液按列出的容量混合，即成氯化鎂孔雀綠肉湯。分裝試管，每管10mL，于4℃可保存10個(gè)月。如若配氯化鎂孔雀綠羧節青霉素肉湯，除上述幾種溶液外，再配制羧節青霉素(carpenicillin)溶液(溶解1mg于1mL水中)，將此溶液與其他溶液混合，即成。
4.59 胰酪胨大豆肉湯
4.59.1 成分
胰酪胨(或胰蛋白胨) 17g
植物蛋白胨(或大豆蛋白胨) 3g
氯化鈉 100g
磷酸氫二鉀 2.5g
葡萄糖 2.5g
蒸餾水 1000mL
4.59.2 制法
將上述成分混合，加熱并輕輕攪拌并溶解，分裝后，121℃高壓滅菌15min，最終pH7.3±0.2。
4.60 Baird－Parker氏培養基
4.60.1 成分
胰蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
酵母膏 1g
丙酮酸鈉 10g
甘氨酸 12g
氯化鋰(LiCl·6H2O) 5g
瓊脂 20g
蒸餾水 950mL
PH7.5
4.60.2 增菌劑的配法
30%卵黃鹽水50mL與除菌過(guò)濾的1%亞蹄酸鉀溶液10mL混合，保存于冰箱內。
4.60.3 制法
將各成分加到蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解。冷至25℃，校正pH。分裝每瓶95mL，121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)加熱溶化瓊脂，冷至50℃，每95mL加入預熱至50℃的卵黃亞蹄酸鉀增菌劑5mL，搖勻后傾注平板。培養基應是致密不透明的。使用前在冰箱儲存不得超過(guò)48h。
4.61 7.5%氯化鈉肉湯
4.61.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化鈉 75g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
4.61.2 制法
將上述成分加熱溶解，校正pH，分裝試管，121℃高壓滅菌15min。
4.62 匹克氏肉湯
4.62.1 成分
含1%胰蛋白胨的牛心浸液 200mL
1：25000結晶紫鹽水溶液 10mL
1：800三氮化鈉溶液 10mL
脫纖維兔血(或羊血) 10mL
4.62.2 制法
將上述已滅菌的各種成分，用無(wú)菌手續依次混合，分裝于無(wú)菌試管內，每管約2mL，保存于冰箱內備用。
4.63 3.8%檸檬酸鈉溶液
4.63.1 成分
檸檬酸鈉 3.8g
蒸餾水 100mL
4.63.2 制法
取檸檬酸鈉3.8g，加蒸餾水到100mL，溶解后過(guò)濾，裝瓶，121℃高壓滅菌15min。
注：兔(人)血漿制備：取3.8%檸檬酸鈉溶液一份加兔(或人)全血四份，混好靜置之，則血球下降，即可得血漿進(jìn)行試驗。
4.64 甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂
4.64.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 1g
甘露醇 10g
氯化鈉 10g
瓊脂 15g
蒸餾水 1000mL
0.2%酚紅溶液 13mL
50%卵黃液 50mL
多粘菌素B 100 國際單位/mL
pH7.4
4.64.2 制法
將前面五種成分加入于蒸餾水中，加熱溶解，校正pH，加入酚紅溶液。分裝燒瓶，每瓶100mL，121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)加熱溶化瓊脂，冷至50℃，每瓶加入50%卵黃液5mL及多粘菌素B10000國際單位，混勻后傾注平板。
4.65 酪蛋白瓊脂
4.65.1 成分
酪蛋白 10g
牛肉膏 3g
磷酸氫二鈉 2g
氯化鈉 5g
瓊脂 15g
蒸餾水 1000mL
0.4%溴麝香草酚藍溶液 12.5mL
pH7.4
4.65.2 制法
將除指示劑外的各成分混合，加熱溶解(但酪蛋白不溶解)，校正pH。加入指示劑，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)加熱溶化瓊脂，冷至50℃，傾注平板。
注：將菌株劃線(xiàn)接種于平板上，如沿菌落周?chē)型该魅π纬�，即為能水解酪蛋白�?br> 4.66 木糖－明膠培養基
4.66.1 成分
胰胨 10g
酵母膏 10g
木糖 10g
磷酸氫二鈉 5g
明膠 120g
蒸餾水 1000mL
0.2%酚紅溶液 25mL
pH7.6
4.66.2 制法
將除酚紅以外的各成分混合，加熱溶解，校正pH。加入酚紅溶液，分裝試管，121℃高壓滅菌15min，迅速冷卻。
4.67 庖肉培養基
4.67.1 成分
牛肉浸液 1000mL
蛋白胨 30g
酵母膏 5g
磷酸二氫鈉 5g
葡萄糖 3g
可溶性淀粉 2g
碎肉渣適量
pH7.8
4.67.2 制法
4.67.2.1 稱(chēng)取新鮮除脂肪和筋膜的碎牛肉500g，加蒸餾水1000mL和1mol/L氫氧化鈉溶液25mL，攪拌煮沸15min，充分冷卻，除去表層脂肪，澄清，過(guò)濾，加水補足至1000mL。加入除碎肉渣外的各種成分，校正pH。
4.67.2.2 碎肉渣經(jīng)水洗后晾至半干，分裝15mm×150mm試管約2～3cm高，每管加入還原鐵粉0.1～0.2g或鐵屑少許。將上述液體培養基分裝至每管內超過(guò)肉渣表面約1cm。上面覆蓋溶化的凡士林或液體石蠟0.3～0.4cm。121℃高壓滅菌15min。
4.68 卵黃瓊脂培養基
4.68.1 成分
4.68.1.1 基礎培養基
肉浸液 1000mL
蛋白胨 15g
氯化鈉 5g
瓊脂 25～30g
pH7.5
4.68.1.2 50%葡萄糖水溶液。
4.68.1.3 50%卵黃鹽水懸液。
4.68.2 制法
制備基礎培養基，分裝每瓶100mL。121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)加熱溶化瓊脂，冷至50℃，每瓶?jì)燃尤?0%葡萄糖水溶液2mL和50%卵黃鹽水懸液10～15mL，搖勻，傾注平板。
4.69 亞硫酸鹽－多粘菌素－磺胺嘧啶瓊脂(SPS)
4.69.1 成分
胰酶消化酪蛋白胨 15g
酵母膏 10g
檸檬酸鐵 0.5g
瓊脂 15g
蒸餾水 1000mL
10%亞硫酸鈉水溶液(新配) 5mL
0.12%多粘菌素B硫酸鹽水溶液 10mL
1.2%磺胺嘧啶鈉水溶液 10mL
pH7.0
4.69.2 制法：前面五種成分配合后加熱溶解，校正pH。分裝每瓶100mL，121C高壓滅菌15min。臨
用時(shí)加熱溶化瓊脂，冷至50℃。按比例加入后3種溶液，搖勻，傾注平板。
4.70 液體硫乙醇酸鹽培養基(FT)
4.70.1 成分
胰酶消化酪蛋白胨 15g
L－胱氨酸 0.5g
葡萄糖 5g
酵母膏 5g
氯化鈉 2.5g
硫乙醇酸鈉 0.5g
刃天青(Resazurin) 0.001g
瓊脂 0.75g
蒸餾水 1000mL
pH7.1
4.70.2 制法
煮沸溶解，冷卻后校正pH，分裝試管，每管10mL，121℃高壓滅菌15min。臨用前隔水煮沸10min，以驅除培養基中溶解的氧氣，迅速冷卻。
4.71 含鐵牛奶培養基
4.71.1 成分
新鮮全脂年奶 1000mL
硫酸亞鐵 1g
蒸餾水 50mL
4.71.2 制法
將硫酸亞鐵溶解于蒸餾水中，不斷攪拌，緩慢地加入于1000mL牛奶中，混勻。分裝試管，每管10mL，121℃高壓滅菌15min。本培養基必須新鮮設備。
4.72 動(dòng)力-硝酸鹽培養基（A法）
4.72.1 成分
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
硝酸鉀 1g
瓊脂 3g
蒸餾水 1000mL
pH7.0
4.72.2 制法
加熱溶解，校正pH。分裝試管，每管10mL，121℃高壓滅菌15min。
4.73 動(dòng)力－硝酸鹽培養基(B法)
4.73.1 成分
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
銷(xiāo)酸鉀 5g
磷酸氫二鈉 2.5g
半乳糖 5g
甘油 5g
瓊脂 3g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
4.73.2 制法
將以上各成分混合，加熱溶解，校正pH。分裝試管，121℃高壓滅菌15min。
4.74 血清肉湯
在肉浸液肉湯(3.1)中按10∶1以無(wú)菌操作加馬(或羊、兔)血清即為血清肉湯。
4.75 馬丁氏肉湯
4.75.1 成分
蛋白胨液 500mL
肉浸液 500mL
冰乙酸 6g
葡萄糖 10g
4.75.2 制法
4.75.2.1 將蛋白胨液500mL與肉浸液500mL混合，加熱至80℃，加冰乙酸1mL，搖勻，再煮沸5min。
4.75.2.2 加15%氫氧化鈉溶液約20mL，校正pH至7.2。
4.75.2.3 加乙酸鈉6g，再校正pH至7.2。
4.75.2.4 繼續煮沸10min，用濾紙過(guò)濾。在每1000mL肉湯內，再加葡萄糖10g。然后裝瓶，每瓶500mL。放置高壓滅菌器內經(jīng)121℃滅菌15min，備用。
注：蛋白胨液的制備：取新鮮豬胃，去脂絞碎。稱(chēng)取350g加50℃左右蒸餾水1000mL，充分搖勻。再加鹽酸(化學(xué)純，比重1.19)10mL，經(jīng)充分混合后，置56℃溫箱中消化24h(每小時(shí)攪拌1～2次)，消化完畢后，加熱，用濾紙過(guò)濾，備用。
4.76 明膠培養基
4.76.1 成分
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
明膠 120g
蒸餾水 1000mL
4.76.2 制法
將上述成分混合，置流動(dòng)蒸氣滅菌器內，加熱溶解，校正pH至7.0～7.2，用絨布過(guò)濾。分裝試管，121℃滅菌15min，備用。
4.77 察氏培養基
4.77.1 成分
硝酸鈉 3g
磷酸氫二鉀 1g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.5g
氯化鉀 0.5g
硫酸亞鐵 0.01g
蔗糖 30g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
4.77.2 制法
加熱溶解，分裝后121℃滅菌20min。
4.77.3 用途
青霉、曲霉鑒定及保存菌種用。
4.78 高鹽察氏培養基
4.78.1 成分
硝酸鈉 2g
磷酸二氫鉀 1g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.5g
氯化鉀 0.5g
硫酸亞鐵 0.01g
氯化鈉 60g
蔗糖 30g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
4.78.2 制法
加熱溶解，分裝后，115℃高壓滅菌30min。必要時(shí)，可酌量增加瓊脂。
4.78.3 用途
分離霉菌用。
4.79 馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)
4.79.1 成分
馬鈴薯(去皮切塊) 300g
葡萄糖 20g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
4.79.2 制法
將馬鈴薯去皮切塊，加1000mL蒸餾水，煮沸10～20min。用紗布過(guò)濾，補加蒸餾水至1000mL。加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝，121℃高壓滅菌20min。
4.79.3 用途
分離培養霉菌。
4.80 馬鈴薯瓊脂
4.80.1 成分
馬鈴薯(去皮切塊) 200g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
4.80.2 制法
同馬鈴薯葡萄糖瓊脂。
4.80.3 用途
鑒定霉菌用。
4.81 孟加拉紅培養基
4.81.1 成分
蛋白胨 5g
葡萄糖 10g
磷酸二氫鉀 1g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.5g
瓊脂 20g
1/3000孟加拉紅溶液 100mL
蒸餾水 1000mL
氯霉素 0.1g
4.81.2 制法
上述各成分加入蒸餾水中溶解后，再加孟加拉紅溶液。另用少量乙醇溶解氯霉素，加入培養基中，分裝后，121℃滅菌20min。
4.81.3 用途
分離霉菌及酵母。
4.82 玉米粉瓊脂
4.82.1 成分
玉米粉 60g
瓊脂 15～18g
蒸餾水 1000mL
4.82.2 制法
將玉米粉加入蒸餾水中，攪勻，文火煮沸1h，紗布過(guò)濾，加瓊脂后加熱溶化，補足水量至1000mL。分裝，121℃滅菌20min。
4.82.3 用途
鑒定假絲酵母及霉菌。
4.83 大米粉培養基
4.83.1 制法
將不含熒光物質(zhì)的秈米挑去雜質(zhì)和變質(zhì)米粒，磨成粗粉，分裝后121℃高壓滅菌20min。
4.83.2 用途
霉菌產(chǎn)毒用。
4.84 亞硒酸鹽煌綠增菌液
4.84.1 成分
蛋白胨 5g
酵母浸膏 5g
甘露醇 5g
�；悄懰徕c 1g
20%亞硒酸氫鈉溶液 20mL
0.25mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0) 100mL
2%煌綠溶液 0.25mL
蒸餾水 900mL
4.84.2 制法
4.84.2.1 將前面四種成分溶解于蒸餾水中。
4.84.2.2 校正pH，當用于干雞蛋白樣品時(shí)，pH8.2±0.1；用于其他干蛋品時(shí)，pH7.2±0.1；用于冰蛋品時(shí)pH7.0±0.1；121℃高壓滅菌15min，放冷備用。
4.84.2.3 臨用前加入滅菌的20%亞硒酸氫鈉溶液及磷酸鹽緩沖液，復查混合液的pH，必要時(shí)進(jìn)行校正。
4.84.2.4 加入煌綠溶液定量分裝于滅菌的燒瓶?jì)�，每�?50mL，于1～5d內使用。
注：①20%亞硒酸氫鈉溶液121℃高壓滅菌15min。
�、�0.25mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)配法：
磷酸氫二鉀(無(wú)水) 21.8g
磷酸二氫鉀(無(wú)水) 17.1g
蒸餾水 1000mL
121℃高壓滅菌15min后備用。
4.85 煌綠肉湯增菌液
4.85.1 成分
肉浸液肉湯(或牛肉膏湯) 1000mL
磷酸氫二鉀 1g
2%煌綠溶液 0.5～10mL
4.85.2 制法
4.85.2.1 將肉浸液肉湯加入磷酸氫二鉀(原已有磷酸氫二鉀者可不加)，校正pH，分裝燒瓶，每瓶100mL，121℃高壓滅菌20min。
4.85.2.2 2%煌綠水溶液于臨用前配制。
4.85.2.3 按比例［見(jiàn)GB 4789.19—94《食品衛生微生物學(xué)檢驗蛋與蛋制品檢驗》］于肉湯內加入煌綠溶液，搖勻，備用。
注：①加入煌綠溶液時(shí)，肉湯溫度不宜過(guò)高，一般以放冷為宜。
�、诨途G的純度不應低于93%。
4.86 0.1%蛋白胨水稀釋劑
4.86.1 成分
蛋白胨 1g
蒸餾水 1000mL
4.86.2 制法
溶解蛋白胨于蒸餾水中，校正pH至7.0，121℃滅菌15min。
4.87 腸毒素產(chǎn)毒培養基
4.87.1 成分
蛋白胨 20g
胰消化酪蛋白 200mg(氨基酸)
氯化鈉 5g
磷酸氫二鉀 1g
磷酸二氫鉀 1g
氯化鈣 0.1g
硫酸鎂 0.2g
芋酸 0.01g
蒸餾水 1000mL
瓊脂 10～12g(固體透析培養用)
pH7.2～7.4
4.87.2 制法
除瓊脂外將所有成分混于水中，溶解后調pH7.2～7.4，如用固體透析培養法再加入瓊脂，121℃高壓滅菌30min。
附加說(shuō)明：
本標準由衛生部衛生監督司提出。
本標準由衛生部食品衛生監督檢驗所負責起草。
本標準主要起草人周桂蓮、劉宏道。
本標準由衛生部委托技術(shù)歸口單位衛生部食品衛生監督檢驗所負責解釋。
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