肺炎克雷伯菌檢驗標準操作程序

1 方法來(lái)源

  ChinaPIN-2022-TZFX019《國家致病菌識別網(wǎng)技術(shù)手冊肺炎克雷伯菌》

2 適用范圍

  本程序規定了食品中肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）的檢驗方法。

3 培養基和試劑

  3.1 磷酸鹽緩沖液（PBS）點(diǎn)擊查看

  3.2 麥康凱培養基 點(diǎn)擊查看

  3.3 血平板 點(diǎn)擊查看

第一法 定性檢驗

4 檢驗程序

  肺炎克雷伯菌檢驗程序見(jiàn)圖1。

圖1 肺炎克雷伯菌檢驗程序

5 操作步驟

  5.1 增菌

  以無(wú)菌操作取樣品25g（mL）加入到含有225mL PBS緩沖液 的均質(zhì)袋中，在拍擊式均質(zhì)器上連續均質(zhì)1min～2min；或放入盛有225mL PBS緩沖液的均質(zhì)杯中，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min。于36℃±1℃培養8h~18h。

  5.2 分離

  取PBS增菌液劃線(xiàn)接種于麥康凱平板上，于36℃±1℃培養24h～48h，觀(guān)察各個(gè)平板上生長(cháng)的菌落。肺炎克雷伯菌在麥康凱培養基上形成淡粉色菌落，大而隆起，光滑濕潤，呈粘液狀（圖2），48小時(shí)候相鄰菌落易融和成膿汁樣（圖3）。

圖2 肺炎克雷伯菌在麥康凱培養基上培養24小時(shí)	圖3 肺炎克雷伯菌在麥康凱培養基上培養48小時(shí)

  自麥康凱平板上分別挑取3個(gè)～5個(gè)典型或可疑菌落，分別接種在血平板上純化，于36℃±1℃培養24h～48h。肺炎克雷伯菌在血平板形成白色或略透明大菌落（圖4），48h后易融合成片，形成膠水樣菌苔（圖5），不溶血，無(wú)特殊氣味產(chǎn)生。

圖4 肺炎克雷伯菌在血平板上培養24小時(shí)	圖5 肺炎克雷伯菌在血平板上培養48小時(shí)

  肺炎克雷伯菌經(jīng)革蘭氏染色后在鏡下呈現較短粗的革蘭氏陰性桿菌，單獨、成雙或短鏈狀排列，大小約為0.3μm～1.5μm×0.6μm～6μm。無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛（圖6）。

圖6 肺炎克雷伯菌的鏡下形態(tài)特征（革蘭染色×1000）

  5.5 鑒定

  5.5.1 生化鑒定：常見(jiàn)的微生物生化鑒定系統，如VITEK 2（用GN卡）、BD-Phoenix100生化儀、生物梅里埃公司生產(chǎn)的API生化鑒定試劑條等均可鑒定肺炎克雷伯菌。

  5.5.2 微生物質(zhì)譜鑒定：目前常見(jiàn)的微生物質(zhì)譜儀均能很好地鑒定肺炎克雷伯菌。

相關(guān)產(chǎn)品：

磷酸鹽緩沖液 （PBS pH7.2）-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情

麥康凱瓊脂(MAC)(含結晶紫)-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情

血平皿（9cm）-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情

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