飲用天然礦泉水中銅綠假單胞菌檢驗方法的改進(jìn)

一、標準簡(jiǎn)介

  在飲用天然礦泉水檢驗方法（GB 8538）中，銅綠假單胞菌的檢驗一直是一個(gè)必檢項目。新版《GB 8538-2022 食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法》已于2022.6.30發(fā)布，2022.12.30正式實(shí)施。與舊版本相比，新版標準中，增加了對銅綠假單胞菌進(jìn)一步確證相關(guān)的內容（如圖1），并對菌數計算方法做了相應調整。本文主要闡述這些增加的內容。

圖1 飲用天然礦泉水中銅綠假單胞菌的檢驗程序

二、綠膿菌素生長(cháng)試驗

  舊版標準《GB 8538-2016 食品安全國家標準  飲用天然礦泉水檢驗方法》中，在CN瓊脂培養基上培養出的藍色或綠色菌落直接判為銅綠假單胞菌；但在新標準中，對于這種藍色或綠色菌落，需要通過(guò)綠膿菌素試驗進(jìn)行確認，結果陽(yáng)性（產(chǎn)綠膿菌素）者，方可判為銅綠假單胞菌。

  有關(guān)綠膿菌素試驗，具體操作如下：

  將在CN瓊脂上呈藍色或綠色菌落的純培養物分別接種在綠膿菌素測定培養基上，36℃±1℃培養24h±2h，加入三氯甲烷3mL～5mL，可搗碎培養基并充分振蕩使培養物中的綠膿菌素溶解于三氯甲烷，待三氯甲烷提取液呈藍色時(shí)，用吸管將三氯甲烷移到另一試管中，并加入1mol/L的鹽酸1mL，振蕩后，靜置片刻。如上層鹽酸液內出現粉紅色到紫紅色時(shí)為陽(yáng)性，表示被檢物中有綠膿菌素存在。

  具體操作結果判別，可參考文章：綠膿菌素測定（PDP）實(shí)驗文章 點(diǎn)擊查看 視頻：綠膿菌素（PDP）測定實(shí)驗 點(diǎn)擊查看視頻

三、42℃生長(cháng)試驗

  舊版標準《GB 8538-2016 食品安全國家標準  飲用天然礦泉水檢驗方法》中，在CN瓊脂培養基上培養出的發(fā)熒光、非藍色且非綠色的菌落，只需進(jìn)行產(chǎn)氨試驗確證，結果為陽(yáng)性的即可判為銅綠假單胞菌；但在新版標準中，除了要做產(chǎn)氨試驗外，還要進(jìn)行42℃生長(cháng)試驗，結果也為陽(yáng)性的，才能確認為銅綠假單胞菌。

  這個(gè)試驗的引入，可以有效避免其它假單胞菌（如熒光假單胞菌）對檢驗結果的干擾。熒光假單胞菌也能產(chǎn)生熒光，但其生長(cháng)的溫度范圍為4℃-37℃，在42℃條件下培養，完全不能生長(cháng)（如圖2）。通過(guò)這個(gè)試驗，可以有效減少銅綠假單胞菌的假陽(yáng)性結果，更加客觀(guān)地反應出樣品的真實(shí)情況。

圖2 42℃條件下培養，銅綠假單胞菌和熒光假單胞菌的生長(cháng)狀態(tài)

  綜合比較，新版本標準對于CN瓊脂上培養出的藍色或綠色菌落及發(fā)熒光、非藍色且非綠色的菌落，需要分別增加綠膿菌素試驗和42℃生長(cháng)試驗進(jìn)一步確證；而對于不發(fā)熒光的紅褐色或其它顏色的菌落，則保持舊版標準的判定方法（如表1）。

  表1 銅綠假單胞菌的確證試驗

四、計數方法

  （1）由于上述確認方法的引入，舊版標準中的菌數計算方法明顯存在不足（如圖3）；

圖3 舊版標準中銅綠假單胞菌菌數的計算方法

  從而在新版標準中，也一并做了相應的修改（如圖4）

圖4 新版標準中銅綠假單胞菌菌數的計算方法

五、討論

  除了上述確證方法有所改變之外，對于可疑菌落數的挑選和陰性對照菌等方面，都有調整，相關(guān)檢測人員在實(shí)際工作中，要加以區分，盡量按照新標準的要求進(jìn)行相關(guān)檢驗操作。

相關(guān)標準：

GB 8538-2022 食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法 -點(diǎn)擊標準下載

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