免疫標記技術(shù)——熒光抗體技術(shù)

   
   熒光物質(zhì)在紫外線(xiàn)照射下，能夠發(fā)出可見(jiàn)的熒光。某些熒光物質(zhì)在一定條件下，能與抗體發(fā)生結合，形成熒光標記抗體，熒光標記抗體再與抗原結合后，在熒光顯微鏡下觀(guān)察，抗原抗體復合物呈現熒光而明顯可見(jiàn)，稱(chēng)為熒光抗體技術(shù)。 
   目前常用的熒光物質(zhì)有異硫氰酸熒光素（發(fā)綠色熒光）和羅丹明（發(fā)橙黃色熒光）。 
    熒光抗體染色方法主要有直接法和間接法兩種。 
（1）直接法 
    將待測抗原制成顯微鏡標本，在其上滴加已知熒光標記抗體。一定時(shí)間后，用緩沖液沖洗，再放在熒光顯微鏡下觀(guān)察，若有相應的抗原存在，則會(huì )發(fā)出熒光。 
    此法可用于鑒定組織、細胞中的蛋白質(zhì)和微生物，方法較簡(jiǎn)便。缺點(diǎn)是每檢查一種抗原，必須制備與其相應的熒光標記抗體。
（2）間接法 
    先用未標記的特異性抗體處理涂片標本。如有相應抗原存在，則會(huì )與抗體形成復合物。然后再滴加熒光標記的抗免疫球蛋 白抗體（或稱(chēng)抗抗體），則熒光標記抗抗體與復合物中的抗體結合，從而顯出熒光，為陽(yáng)性反應。由于熒光物質(zhì)不是直接標記抗體， 而是標記抗免疫球蛋 白的抗體，所以稱(chēng)為間接法。 
    間接法用一種熒光標記抗抗體，可以研究某種動(dòng)物的各種免疫血清，靈敏度也比直接法高。

 

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