微生物新菌種的分離過(guò)程

  新的微生物菌種需要從自然生態(tài)環(huán)境中混雜的微生物群中挑選出來(lái)，因此必須要有快速而準確的新種分離和篩選方法。分離微生物新種的具體過(guò)程大體可分為采樣、增殖、純化和性能測定等步驟。

1、采樣

  根據篩選的目的、微生物分布情況、菌種的主要特征及其生態(tài)關(guān)系等因素，確定具體的時(shí)間、環(huán)境和目標物進(jìn)行采樣。

  土壤是微生物的大本營(yíng)，菜園和耕作層土壤是有機質(zhì)較多的土層，常以細菌和放線(xiàn)菌為主；果園樹(shù)根土層中，酵母菌含量較高；動(dòng)植物殘體及霉腐土層中，分布著(zhù)較多的霉菌。此外，豆科植物根系土中，往往存在根瘤菌；河流湖泊的淤泥中能分離到產(chǎn)甲烷菌；油田和煉油廠(chǎng)周?chē)�土層中常�?jiàn)分解石油的微生物等。季節、表面的植被、溫濕、通風(fēng)情況、養分、水分、酸堿度和光照等都會(huì )影響土壤中的微生物分布，故在采土樣時(shí)應予以重視。采土樣地點(diǎn)選好后，用小鏟子去除表土，取離地面5~15cm處的土樣幾克，盛于預先滅菌的牛皮紙袋中扎緊，并標明時(shí)間、地點(diǎn)和環(huán)境等情況，以備查考。

  各種水體也是工業(yè)微生物菌種的重要來(lái)源，許多具有光合作用能力的微生物及兼性或專(zhuān)性厭氧微生物都能從各種水體中篩選得到。

2、增殖

  一般采用增殖培養（又稱(chēng)富集培養）的方法，以投其所好和取其所抗的原則在培養基中添加特殊的養分或抗菌物質(zhì)，使所需菌種的數量相對增加。其實(shí)質(zhì)是使天然樣品中的劣勢菌轉變?yōu)槿斯きh(huán)境中的優(yōu)勢菌，便于將它們從樣品中分離。

3、純化

  增殖培養得到的微生物培養物仍是一個(gè)各類(lèi)微生物的混合體。為了獲得某一特定的微生物菌種，必須進(jìn)行微生物的純化即純培養。

  常用的菌種純化方法很多，大體可分為兩個(gè)層次，一個(gè)層次較粗放，一般只能達到“菌落純”的水平，從“種”的水平來(lái)說(shuō)是純的，其方法有劃線(xiàn)分離法，涂布分離法和稀釋分離法。

  ① 劃線(xiàn)分離法，簡(jiǎn)便而快速，即用接種針挑取微生物樣品在固體培養基表面劃線(xiàn)，適當條件下培養后，獲得單菌落。

  ② 涂布分離法，與劃線(xiàn)法類(lèi)似，用涂布棒蘸取培養液，或先將少量培養液滴在固體培養基表面，再用涂布棒在固體培養基表面均勻涂布。

  ③ 稀釋分離法所獲得的單菌落更加分散均勻，獲得純種的概率較大。該法是將降至60℃左右的固體培養基與少量培養液(事先在培養液中加入無(wú)菌的玻璃珠攪拌打散細胞團，再經(jīng)過(guò)濾處理，效果更佳�；靹蚝�，再澆注成平板以獲取單菌落。

  另一層次是較為精細的單細胞或單孢子分離法，它可達到細胞純即“菌株純”的水平。這種方法的具體操作的方法很多，最簡(jiǎn)便的方法是利用培養皿或凹玻片等分離小室進(jìn)行細胞分離。也可以利用復雜的顯微操作裝置進(jìn)行單細胞挑取。如果遇到不長(cháng)孢子的絲狀菌，則可用無(wú)菌小刀切取菌落邊緣稀疏的菌絲尖端進(jìn)行分離移植，也可用無(wú)菌毛細管插入菌絲尖端，以獲取單細胞。在具體的工作中，具體方法，應視微生物的實(shí)際情況和實(shí)驗條件而定。

  為了提高分離篩選工作的效率，除增殖培養時(shí)，應控制增殖條件外，在純種分離時(shí)，也應控制適宜的培養條件，并選用特異的檢出方法和篩選方案。

4、性能鑒定

  菌種性能測定包括菌株的毒性試驗和生產(chǎn)性能測定。若毒性大而且無(wú)法排除者應予以淘汰。盡管在菌種純化中能獲得大量的目標菌株，它們都具備一些共性，但只有經(jīng)過(guò)進(jìn)一步生產(chǎn)性能測定，才能確定哪些菌株更符合生產(chǎn)要求。

  直接從自然界分離得到的菌株為野生型菌株。事實(shí)上，從自然界直接獲得的野生型菌種往往低產(chǎn)甚至不產(chǎn)所需的產(chǎn)物，只有經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的人工改造才能真正用于工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)。所以，我們常將這些自然界中直接獲得的新菌株稱(chēng)為進(jìn)一步育種工作的原始菌株或出發(fā)菌株

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