平皿快速檢測法

  平皿快速檢測法是利用菌體在特定固體培養基平板上的生理生化反應，將肉眼觀(guān)察不到的產(chǎn)量性狀轉化成可見(jiàn)的“形態(tài)”變化。具體的有紙片培養顯色法、變色圈法、透明圈法、生長(cháng)圈法和抑制圈法等，這些方法較粗放，一般只能定性或半定量用，常只用于菌種初篩，可以大大提高篩選的效率，缺點(diǎn)是由于培養平皿上的種種條件與搖瓶培養，尤其是發(fā)酵罐深層液體培養時(shí)的條件有很大的差別，有時(shí)會(huì )造成兩者的結果不一致。

  平皿快速檢測法操作時(shí)應將培養的菌體充分分散，形成單菌落，以避免多菌落混雜一起，引起“形態(tài)”大小測定的偏差。

  (1) 紙片培養顯色法

  將飽浸含某種指示劑的固體培養基的濾紙片擱于培養皿中，用牛津杯架空，下放小團浸有3%甘油的脫脂棉以保濕，將待篩選的菌懸液稀釋后接種到濾紙上，保溫培養形成分散的單菌落，菌落周?chē)鷮��?huì )產(chǎn)生對應的顏色變化。從指示劑變色圈與菌落直徑之比可以了解菌株的相對產(chǎn)量性狀。指示劑可以是酸堿指示劑也可以是能與特定產(chǎn)物反應產(chǎn)生顏色的化合物。

  (2) 變色圈法 

  將指示劑直接摻入固體培養基中，進(jìn)行待篩選菌懸液的單菌落培養，或噴灑在已培養成分散單菌落的固體培養基表面，在菌落周?chē)�形成變色圈。如在含淀粉的平皿中涂布一定濃度的產(chǎn)淀粉酶菌株的菌懸液，使其呈單菌落，然后噴上稀碘液，發(fā)生顯色反應。變色圈越大，說(shuō)明菌落產(chǎn)酶的能力越強。而從變色圈的顏色又可粗略判斷水解產(chǎn)物的情況。

  (3) 透明圈法

  在固體培養基中滲入溶解性差、可被特定菌利用的營(yíng)養成分，造成渾濁、不透明的培養基背景。在待篩選菌落周?chē)�就�?huì )形成透明圈，透明圈的大小反映了菌落利用此物質(zhì)的能力。

在培養基中摻入可溶性淀粉、酪素或CaCO3可以分別用于檢測菌株產(chǎn)淀粉酶、產(chǎn)蛋白酶或產(chǎn)酸能力的大小。

  (4) 生長(cháng)圈法 

  利用一些有特別營(yíng)養要求的微生物作為工具菌，若待分離的菌在缺乏上述營(yíng)養物的條件下，能合成該營(yíng)養物，或能分泌酶將該營(yíng)養物的前體轉化成營(yíng)養物，那么在這些菌的周?chē)�就�?huì )有工具菌生長(cháng)，形成環(huán)繞菌落生長(cháng)的生長(cháng)圈。

  該法常用來(lái)選育氨基酸、核苷酸和維生素的生產(chǎn)菌。工具菌往往都是對應的營(yíng)養缺陷型菌株。

  (5) 抑制圈法 

  待篩選的菌株能分泌產(chǎn)生某些能抑制工具菌生長(cháng)的物質(zhì)，或能分泌某種酶并將無(wú)毒的物質(zhì)水解成對工具菌有毒的物質(zhì)，從而在該菌落周?chē)�形成工具菌不能生長(cháng)的抑菌圈。該法常用于抗生素產(chǎn)生菌的篩選，工具菌常是抗生素敏感菌。由于抗生素分泌處于微生物生長(cháng)后期，取出瓊脂塊可以避免各菌落所產(chǎn)生抗生素的相互干擾。典型的例子是春雷霉素生產(chǎn)菌的篩選。

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