食品微生物檢驗中樣品的稱(chēng)量與稀釋

(1)試料和初始懸浮液(首次稀釋液)的制備

  按重量或體積稱(chēng)取或量取試料,放入滅菌容器或塑料袋中,允許誤差為±5%。一定量的試料(至少10g或10mL,或標準方法另有規定)應能代表用于檢測的實(shí)驗室樣品。需指出,使用大于最低要求重量或體積的試料可提高定量檢測結果的可靠性。

  加入9倍于試料重量或體積的稀釋液,以制成10倍稀釋樣液。稀釋液最好按質(zhì)量計量,也可按體積計量,允許誤差不得超過(guò)±2%。針對某些特定的檢測項目,可酌情降低或增加稀釋液比率,允許誤差亦為±2%。為避免因溫度的驟然變化而損傷目標微牛物,除非對特定產(chǎn)品的特殊規定,所有稀釋液的溫度應與實(shí)驗室室溫大致相同、按標準要求均質(zhì)樣品和稀釋液的混合物,如有必要,可靜止不超過(guò)15min,以讓大顆粒物質(zhì)沉淀,或采用濾過(guò)系統去除此類(lèi)物質(zhì),例如使用帶濾膜的塑料樣品袋。

  某些種類(lèi)的產(chǎn)品若按1∶10稀釋制備可能形成較為黏稠或濃厚的懸浮液,影響后續操作,這些情況下可按1:20、1:50及1:100等稀釋比率添加稀釋液，直至形成適用于后續試驗的懸浮液。這些非標準化的稀釋比率應換算到后續操作中,尤其是進(jìn)行計算和結果表述時(shí)。另一些情況下,當檢測樣品中較低數量的微生物,且受試樣品可制成適宜的初懸液時(shí)，可能需要制備1:2或1 :5等較低的稀釋比率。然而需注意的是,使用低稀釋比率的初始懸浮液,在后續轉種至液體培養基或固體培養基時(shí)可能造成樣品基質(zhì)與培養基比例的不平衡(如食品組分濃度的相應增高會(huì )抑制目標微生物的生長(cháng)),因此低稀釋液比率需謹慎使用,并需按具體的案例逐個(gè)進(jìn)行驗證。

進(jìn)行芽孢計數時(shí),應在初始懸浮液制備后立即進(jìn)行熱處理,如在80℃±5℃,維持10min±1min,然后迅速使用流動(dòng)冷水浴等冷卻懸浮液,以盡量減少對目標微生物芽孢的損耗。

(2）操作持續時(shí)間

  從初始懸浮液制備完成到整體接種操作完成,其間不得超過(guò)45min。從制備懸浮液到制備后續稀釋液間不得超過(guò)30min。若實(shí)驗室環(huán)境溫度偏高,超過(guò)了建議范圍(>27℃),則稀釋操作的持續時(shí)間應相應縮減,盡量避免可能因微生物的增殖導致計數檢測結果偏高。

  某些標準方法中要求稀釋時(shí)有一個(gè)復蘇期,以盡量修復受損傷的微生物,此復蘇期應從初始懸浮液制備完成開(kāi)始計算,結束后應立即開(kāi)展后續稀釋步驟。

(3）常用稀釋液的相關(guān)要求

  為提高微生物檢測結果的再現性,建議使用商品化的即用稀釋液或干粉培養基,并嚴格按使用說(shuō)明進(jìn)行配制和使用。培養基的化學(xué)成分應為分析純并適用于微生物檢測﹐配制用水應符合要求。各種稀釋液應符合再現性要求,標準為添加一定數量的指定微生物(如大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌),在實(shí)驗室環(huán)境溫度(18℃~27℃)下培養45min~1h后,菌落計數結果應不超過(guò)初始計數結果的±30%。

  用于計數檢測的初始懸浮液,經(jīng)分裝滅菌后的最終液量與標準規定的允許誤差不得超過(guò)士2%。為確保達到此允許誤差,宜將大體積的稀釋液滅菌后再精確地無(wú)菌分裝。

  ISO 6887-1中規定的通用稀釋液有以下幾種:

  ① 蛋白胨鹽溶液(酶消化酪蛋白1.0g,NaCl 8.5g,水1000mL。在水中溶解各組分,分裝,滅菌,pH7.0±0.2);

  ② 緩沖蛋白胨水(蛋白胨10.0g,NaCl 5.0g,Na2HPO4·12H2O 9.0g,KH2PO41.5g，水1000mL。在水中溶解各組分,分裝,滅菌,pH7.0±0.2);

  ③ 雙料緩沖蛋白胨水,用于高酸性產(chǎn)品(將雙份緩沖蛋白胨水的成分溶解于1000mL水中,分裝,滅菌,pH7.0±0.2)。

  GB 4789《食品安全國家標準食品微生物學(xué)檢驗》系列標準中規定的稀釋液為以下兩種:

  ① 生理鹽水(稱(chēng)取8.5g NaCl溶于1000mL蒸餾水中,121℃高壓滅菌15min);

  ② 磷酸鹽緩沖液(貯存液:稱(chēng)取34.0g的KH2PO4溶于500mL蒸餾水中,用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至7.2,用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液:取貯存液1.25mL,用蒸餾水稀釋至1000ml,分裝于適宜容器中,121℃高壓滅菌15min)。

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