瓊脂的軟硬度對培養基性能的影響

一、瓊脂的作用

  瓊脂是由植物中提取的一種多糖，在冷水中不溶解，加熱至90℃左右開(kāi)始溶解，溶解后的瓊脂在冷卻至40℃左右時(shí)開(kāi)始凝固，性狀穩定，在培養基中做為優(yōu)良的凝固劑使用。

  由于生產(chǎn)瓊脂的工藝、原材料等因素的影響，不同的瓊脂在外觀(guān)、顏色、軟硬度上有差別，特別是軟硬度對培養基的影響至關(guān)重要。

二、瓊脂的軟硬度對不同培養基的影響

  在一些標準中規定的培養基配方中，通常寫(xiě)明了培養基中使用的瓊脂具體用量，也有些配方寫(xiě)的瓊脂用量是一個(gè)范圍。

  雖然瓊脂在培養基中不提供營(yíng)養，一般也不能被微生物利用，但瓊脂的軟硬度會(huì )對微生物的生長(cháng)以及某些擴散性試驗（如藥敏試驗、抗生素效價(jià)測定等）的效果產(chǎn)生間接的影響。因此在GB4789.28中規定，允許根據瓊脂的實(shí)際軟硬度調整使用量，在配制培養基時(shí)，并不一定要完全按照標準中的配方進(jìn)行配制，應當根據瓊脂的軟硬度選擇合適的用量。

  在觀(guān)察動(dòng)力的半固體培養基中，瓊脂的用量通常為0.4%左右，一些有動(dòng)力的細菌可以在半固體瓊脂中游動(dòng)擴散生長(cháng)，若培養基硬度偏大，會(huì )導致細菌難以擴散生長(cháng)，觀(guān)察不到動(dòng)力試驗結果。因此，若瓊脂的凝膠強度偏大，應適當降低用量，使培養基的軟硬度在合適的范圍內，可以較好的觀(guān)察細菌的動(dòng)力現象。

  在平板培養基中，培養基的軟硬度與細菌的菌落大小、遷移現象有關(guān)。若培養基軟硬度較小，培養基內的營(yíng)養物質(zhì)容易擴散，有動(dòng)力的細菌更容易向周?chē)鷶U散，這樣的培養基上細菌的菌落直徑會(huì )更大一些。若培養基的軟硬度較大，細菌的菌落通常會(huì )偏小一點(diǎn)。在進(jìn)行同種培養基比對時(shí)，看到菌落大小不同，許多人會(huì )誤認為菌落較大是因為培養基的營(yíng)養高，質(zhì)量好，這種觀(guān)點(diǎn)是片面的。雖然培養基軟硬度較低時(shí)菌落更容易長(cháng)大，但缺點(diǎn)是新手劃線(xiàn)接種容易劃破，不好操作。對于計數類(lèi)培養基（如TSA、營(yíng)養瓊脂等），若培養基軟硬度偏低，很容易在進(jìn)行計數培養時(shí)由于菌落生長(cháng)過(guò)大出現蔓延或融合遮蓋現象，導致計數結果不準確，反而培養基稍硬一些，菌落略微偏小不容易融合蔓延，更容易計數。因此，在進(jìn)行配制培養基時(shí)，應將軟硬度控制在一定范圍內，一般瓊脂的用量在10-15g之間即可。

注：左側平板含瓊脂0.9%，右側平板含瓊脂3%，測試菌株為金黃色葡萄球菌。

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