金黃色葡萄球菌檢驗方法-化妝品安全技術(shù)規范(2022年版)

1.范圍

  本規范規定了化妝品中金黃金色葡萄球菌的檢驗方法。

  本規范適用于化妝品中金黃色葡萄球菌的檢驗。

2.定義

  2.1 金黃色葡萄球菌 Staphylococcus aureus

  為革蘭氏陽(yáng)性球菌，呈葡萄狀排列，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽(yáng)性。

3.儀器和設備

  3.1 顯微鏡。

  3.2 恒溫培養箱:36℃±1℃。

  3.3 離心機。

  3.4 滅菌刻度吸管:10mL、 1mL。

  3.5 試管:18 mm×150mm。

  3.6 載玻片。

  3.7 酒精燈。

  3.8 三角瓶:250mL。

  3.9 高壓滅菌器。

  3.10 恒溫水浴箱。

4.培養基和試劑

  4.1 SCDLP 液體培養基

  見(jiàn)總則中 3.2。

  4.2 營(yíng)養肉湯

  4.3 7.5%氯化鈉肉湯

  4.4 Baird Parker平板

  制法:將各成分加到蒸餾水中，加熱煮沸完全溶解，冷至25℃±1℃，調節pH。分裝每瓶95mL，121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)加熱溶化瓊脂，冷至50℃，每95mL加入預熱至50℃左右的卵黃亞碲酸鉀增菌劑5mL，搖勻后傾注平板。培養基應是致密不透明的。使用前在冰箱貯存不得超過(guò)48h±2h。

  4.5 血瓊脂平板

  4.6 甘露醇發(fā)酵培養基

  4.7 滅菌液體石蠟

  見(jiàn)總則中3.3。

  4.8 兔（人）血漿制備

  取3.8%檸檬酸鈉溶液，121℃高壓滅菌30min，1份加兔（人）全血4份，混勻靜置;2000rpm～3000rpm離心3min~5min。血球下沉，取上面血漿。

5.操作步驟

  5.1 增菌:取1:10稀釋的檢液10mL接種到90mL SCDLP液體培養基中，置36℃±1℃培養箱，培養24h±2h。

  注:如無(wú)此培養基也可用7.5%氯化鈉肉湯。

  5.2 分離:自上述增菌培養液中，取1～2接種環(huán)，劃線(xiàn)接種到Baird Parker平板上，如無(wú)此培養基也可劃線(xiàn)接種到血瓊脂平板上，置.36℃±1℃培養48h±2h。在血瓊脂平板上菌落呈金黃色，圓形，不透明，表面光滑，周?chē)�有溶血圈。�?/span>Baird Parker平板培養基上為圓形，光滑，凸起，濕潤，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周?chē)鸀橐换鞚釒�，在其外層有一透明帶。用接種針接觸菌落似有奶油樹(shù)膠的軟度。偶然會(huì )遇到非脂肪溶解的類(lèi)似菌落，但無(wú)混濁帶及透明帶。挑取單個(gè)菌落分純在血瓊脂平板上，置36℃±1℃培養24h±2h。

  5.3 染色鏡檢:挑取血瓊脂平板上分純后的菌落，涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，排列成葡萄狀，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，致病性葡萄球菌，菌體較小，直徑約為0.5um~1um。

  5.4 甘露醇發(fā)酵試驗:取血瓊脂平板上分純后的菌落接種到甘露醇發(fā)酵培養基中，在培養基液面上加入高度為2mm~3mm 的滅菌液體石蠟，置36℃±1℃培養24h±2h，金黃色葡萄球菌應能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸。

  5.5 血漿凝固酶試驗:吸取1:4新鮮血漿0.5mL，置于滅菌小試管中，加入待檢菌24h±2h營(yíng)養肉湯培養物0.5mL，混勻，置36℃±1℃恒溫箱或恒溫水浴中，每半小時(shí)觀(guān)察一次，6h之內如呈現凝塊即為陽(yáng)性。同時(shí)將已知血漿凝固酶陽(yáng)性和陰性菌株的營(yíng)養肉湯培養物及營(yíng)養肉湯培養基各0.5mL，分別加入無(wú)菌1:4血漿0.5mL，混勻，作為對照。也可使用商品化試劑，按照說(shuō)明書(shū)操作，進(jìn)行血漿凝固酶試驗。

6.檢驗結果報告

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