生化鑒定條使用注意事項及討論

  生化鑒定條作為成套生化管的升級產(chǎn)品，以其快速、簡(jiǎn)單、操作方便的優(yōu)勢，受到廣大用戶(hù)的好評。我公司目前有各種生化鑒定條出售，滿(mǎn)足不同客戶(hù)的需求（產(chǎn)品目錄和信息參考：HBI微生物生化鑒定條 ）。但在實(shí)際使用過(guò)程中，經(jīng)常會(huì )碰到一些疑問(wèn)或問(wèn)題，本文將對有關(guān)問(wèn)題進(jìn)行解釋和討論。

1、做生化鑒定前一定要進(jìn)行純化嗎？

  對單一菌種進(jìn)行鑒定，不需要進(jìn)行純化操作，只需要保證菌體新鮮就行。但對于在選擇性培養基上分離出的菌，最好進(jìn)行純化后在進(jìn)行鑒定。原因如下：

  （1）選擇性培養基上初步分離的菌落，不一定是單一菌種形成的，若有其它菌種，會(huì )干擾試驗結果，造成誤判；

  （2）選擇性培養基成分復雜，挑菌時(shí)若沾取了少量培養基，有可能會(huì )對鑒定結果造成干擾；

  （3）選擇性培養基中通常含有一些抑制成分，平板上長(cháng)出的菌落會(huì )受到不同程度的抑制或損傷，活力不好，不利于生化結果的觀(guān)察和判定；

  （4）選擇些平板上長(cháng)出的菌落通常較小，若需要做很多生化試驗，有可能出現菌體不夠用的情況（通常每挑一下接種后，要進(jìn)行燒環(huán)滅菌再進(jìn)行下一次挑菌，浪費較多）。

  上面兩種情況，無(wú)論是為了得到新鮮菌體，還是為了得到較純的菌落，都需要在營(yíng)養瓊脂平板上進(jìn)行劃線(xiàn)培養。所以這是菌種生化鑒定前首先要做的準備工作，直接使用初篩菌，試驗結果可能會(huì )有一些差異，造成誤判（如圖1）。

圖1 使用純化菌（左）和初篩菌（右）接種鑒定條培養結果的差異

2、接種鑒定條時(shí)，一定要用菌懸液來(lái)接種嗎？

  鑒定條說(shuō)明書(shū)中要求“取一內盛2mL無(wú)菌水或無(wú)菌生理鹽水試管，用接種針挑取純化菌落至無(wú)菌水中仔細研磨制成0.5麥氏濁度的均一細菌懸液，每孔滴入100mL菌懸液，其中固體和半固體生化管采用穿剌接種（參考：HBI微生物生化鑒定條 ）”。也就是說(shuō)要用均勻的菌懸液進(jìn)行接種。這樣要求，是為了盡量使每個(gè)孔中接入的菌量相當，使各生化反應趨于同步。如果使用接種針或接種環(huán)直接挑菌進(jìn)行接種，會(huì )導致各個(gè)孔中接菌量差別很大，從而導致培養結果有所差異（如圖2-a、圖2-b）。

圖2-a  用菌懸液接種的試驗結果（氨基酸對照管變黃，正確）

圖2-b  用接種環(huán)挑菌接種的試驗結果（氨基酸對照管紫色，異常）

3、需要每個(gè)孔都換槍頭嗎？

  接種過(guò)程中，如果能保證每次往培養基孔中滴加菌液時(shí)，不會(huì )沾染槍頭，則從頭到尾用一個(gè)槍頭即可；如果中間出現沾染，則需及時(shí)更換槍頭；對于氨基酸和氨基酸對照孔，盡量不用同一個(gè)槍頭，以免少量的沾染，影響試驗結果。有的人會(huì )執意用接種針挑取菌體進(jìn)行接種，這時(shí)候更要注意，每接種一個(gè)孔，都要進(jìn)行燒環(huán)滅菌，主要是為了清除接種針或接種環(huán)上沾附的少量培養基，以免對后面孔的試驗結果造成干擾。堅決不能用一個(gè)針挑取菌苔后，連續往鑒定條的每個(gè)孔中一次性接種完成。這樣很可能造成生化結果的混亂或者試驗失敗。

4、討論：

  對于菌種純化，有些標準中也有描述，可以從選擇性培養基平板上挑菌進(jìn)行某項生化試驗，如《GB 4789.4  食品安全國家標準  食品微生物學(xué)檢驗  沙門(mén)氏菌檢驗》中相關(guān)內容是這樣描述的：

  但是為了保險，少走彎路，本人還是建議先進(jìn)行純化后，制成菌懸液再進(jìn)行接種、培養。這樣也不會(huì )因為某一兩個(gè)孔的結果不好，而再重新使用一整套生化鑒定條，造成浪費。文中所列的幾種異常情況，不一定每次都能碰到，但是如果不按正常操作進(jìn)行試驗，試驗過(guò)程中出現各種這樣或那樣異�，F象的幾率會(huì )更大，阻礙試驗進(jìn)程。

  另外，為了保證結果的一致性和實(shí)效性，可以將菌液制備得盡量濃一些，也就是說(shuō)每個(gè)孔中接菌量可適當加大。

HBI微生物生化鑒定條 

http://hopebiol.com/asphtml/HBIjd.htm

GB 4789.4-2016 沙門(mén)氏菌檢驗 -標準下載

http://10759.cn/biaozhun-download.asp?id=59

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