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一、試驗原理：
丁酸梭菌又叫酪酸梭菌，是一種嚴格厭氧的革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌，菌體呈桿狀或稍有彎曲，周身鞭毛，能運動(dòng)。酪酸梭菌是人的正常腸道菌群之一，有氧條件不生長(cháng)，革蘭氏染色為陽(yáng)性，能夠發(fā)酵乳糖、麥芽糖、棉籽糖、甘露醇等碳水化合物產(chǎn)酸，不發(fā)酵山梨醇，硝酸鹽還原試驗為陰性。
二、試驗步驟及結果
1、將1小包丁酸梭菌活菌散溶解于含9mL無(wú)菌生理鹽水的試管內，取1mL菌液加入至厭氧皰肉培養基內，置于35℃恒溫箱內培養。
圖1皰肉培養基
培養24h后，皰肉培養基渾濁，并產(chǎn)生大量氣泡。
2.用接種環(huán)挑取皰肉培養基菌液劃線(xiàn)接種于TSA平板，放入厭氧袋內，并放入厭氧產(chǎn)氣包，置于35℃恒溫箱內進(jìn)行厭氧培養，另劃線(xiàn)接種TSA平板，置于有氧條件下35℃恒溫箱進(jìn)行培養。
圖2 TSA平板上的菌落形態(tài)
培養24h后，有氧條件培養下的TSA平板上無(wú)任何菌落生長(cháng)，厭氧條件培養下的TSA平板細菌生長(cháng)良好，菌落為白色且形狀不規則，沿接種線(xiàn)向周?chē)鷶U散生長(cháng)，表明該菌生長(cháng)條件為嚴格厭氧，且具有較強動(dòng)力。
3.從純培養后的TSA平板上挑取菌落進(jìn)行革蘭氏染色，在油鏡下觀(guān)察菌體形態(tài)。
圖3 油鏡下的菌落革蘭氏染色
該菌的革蘭氏染色為陽(yáng)性，顯微鏡下菌體為紫色桿狀，兩端鈍圓，部分菌體稍有彎曲。
4.挑取TSA上純培養的單菌落至9mL無(wú)菌生理鹽水試管內，分別接種于乳糖、麥芽糖、棉籽糖、甘露醇、山梨醇和硝酸鹽還原生化管，置于35℃恒溫培養箱內厭氧培養。
圖4 生化反應鑒定
培養24h后，該菌生化反應結果為乳糖陽(yáng)性（變黃）、麥芽糖陽(yáng)性（變黃）、棉籽糖陽(yáng)性（變黃）、甘露醇陽(yáng)性（變黃）、山梨醇陰性（顏色不變）、硝酸鹽還原陰性（加試劑不變色，加鋅粒后變紅），該結果符合丁酸梭菌的典型生化反應特征。
三、注意事項
本培養基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。
注:本文屬海博生物原創(chuàng ),未經(jīng)允許不得轉載。
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