抗小鼠免疫球蛋白熒光抗體

【原理】

  小白鼠(包括BALB/C小鼠)是制備病原微生物單克隆抗體最常用的實(shí)驗動(dòng)物,以小鼠免疫球蛋白（IgM、IgA、IgG或全球蛋白)作免疫原免疫家兔或其它合適動(dòng)物,可產(chǎn)生抗小鼠IgG、IgM、IgA和全球蛋白的抗血清。從這些抗血清中提取免疫球蛋白G(IgG)標記上熒光素,即成為抗小鼠IgG的熒光抗體,它們可以和小鼠對任何抗原刺激所產(chǎn)生的抗體特異結合而指示某抗原對應抗體的存在。

【制法】

  (1)分別制備小鼠免疫球蛋白G、M、A(IgG、IgM、IgA)和全γ球蛋白,作為免疫原;

  (2)以上述免疫原分別免疫家兔或其他合適動(dòng)物,制取抗小白鼠IgG、IgM、IgA和γ球蛋白的抗血清;

  (3)從上述抗血清中提取IgG;

  (4)以熒光素(FITC或TMRITC)標記IgG,經(jīng)分離純化鑒定后即可制成4種抗小鼠免疫球蛋白熒光抗體。

【用途】

  主要有兩種:

  (1)抗小鼠γ球蛋白熒光抗體用以檢測微生物體或其抗原成分免疫小白鼠的抗體滴度變化,觀(guān)察抗原體液免疫效果,或選擇合適的制備單克隆抗體的細胞融合時(shí)間。

  (2)抗小白鼠IgG、IgM、IgA和γ球蛋白熒光抗體可用來(lái)篩選分泌抗體的融合細胞。一般是先用抗γ球蛋白熒光抗體篩選陽(yáng)性細胞克隆,形成單克隆抗體后再用抗IgG、IgM和IgA標記抗體確定單克隆抗體的免疫球蛋白類(lèi)型。此法尤適于顆粒性抗原(如細菌、病毒、立克次體),對于可溶性抗原,一般需將其吸附或結合在固相載體上以作為染色基質(zhì)。

【注意事項】

  小鼠免疫球蛋白的提取條件與兔、羊等動(dòng)物不完全相同。尤其要注意鹽析用硫酸銨的濃度。

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