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【原理】
梅毒感染后，一般經(jīng)過(guò)2~4周的潛伏期在侵入部位出現第1個(gè)臨床癥狀-硬下疳，此時(shí)體內多已產(chǎn)生可以檢出的特異抗體，首先是IgM型，同時(shí)伴有IgG型，隨著(zhù)病程的進(jìn)展，IgG型抗體逐漸升高，至第2期達頂點(diǎn)，以后稍有下降，但一直保持。而且，只要感染過(guò)程存在，體內即有 IgM抗體產(chǎn)生，當治療后感染過(guò)程終止，IgM型抗體即消失。因此，檢測病人特異IgG型和IgM型抗體，可以確定是否梅毒感染，而在梅毒治療過(guò)程中，IgM型抗體從陽(yáng)性轉為陰性，則是梅毒治愈的標志，但治療后IgG型抗體可終身保持，并能被FTA-ABS法檢出。FTA-ABS試驗，是國際上公認的檢出梅毒特異抗體的首選方法，其敏感性和特異性均高于其它方法。如對一期梅毒、晚期潛伏和三期復發(fā)梅毒的檢出敏感性均高于VDRL法。本法以完整的梅毒密螺旋體（Nichols標準毒株）作為抗原，涂于載玻片上，然后加病人血清與之反應，如血清中有特異抗梅毒螺旋體抗體，則必與玻片上的梅毒螺旋體結合，再加上抗人免疫球蛋白熒光抗體，梅毒螺旋體就會(huì )被此熒光抗體包被，于熒光顯微鏡下即可見(jiàn)發(fā)特異熒光的形態(tài)典型的梅毒螺旋體。
由于人體內（如口腔、陰道）棲居有其它密螺旋體，它們有時(shí)也可引起局部感染，使體內產(chǎn)生相應的抗體，其中部分與梅毒螺旋體有交叉反應。因此，當血清稀釋度不高時(shí)（如1:5~1:50)，�？墒姑范緹晒饪贵w試驗（FTA）出現一定比例的假陽(yáng)性，而當血清稀釋至1:100~1:200時(shí)，又可將部分真的梅毒感染漏檢。于是，自1969年開(kāi)始，采用無(wú)毒密螺旋體Re-iter株培養液吸收血清中群交叉抗體，使血清在1:5稀釋時(shí)不會(huì )產(chǎn)生交叉反應，從而既提高了方法的特異性，又不降低敏感性。此法即FTA -ABS (Fluorescent Treponemal antibody-absorption)。經(jīng)過(guò)國際上約20年的廣泛應用，證明它是血清學(xué)方法中一種最成功的方法。僅在美國，每年用此法檢驗的血清標本數達數千萬(wàn)份之多。根據美國疾病控制中心（CDC）的研究，FTA-ABS的敏感性對一期梅毒為98%，二期為100%，潛伏期為100%，三期（晚期）為96%，對各期的特異性則達98%(95%~99%)。
【成分及制法】
1.FTA抗原：為從感染梅毒螺旋體標準毒株(Nichols)的家兔睪丸中提取的純螺旋體，或直接涂于特制載玻片上（此載玻片為10眼、6眼、4眼等型號），經(jīng)丙酮固定后保存備用；其螺旋體密度為高倍視野20~30條，并襯有羊紅血球作背景，或凍于瓶中，低溫保存。由使用者自己涂制抗原片方法如下：將干燥抗原加滅菌蒸餾水1ml，振蕩至完全溶解，以吸管吸打8~10次，使螺旋體凝團均勻分散，然后涂制抗原基片；用特制或自己用鉆石筆刻劃的限圈載玻片，每圈涂1白金耳抗原，室溫干燥15分鐘以上，隨即浸入優(yōu)級丙酮中10分鐘以固定螺旋體（每200ml丙酮固定的玻片不應多于50張）；水溶后此抗原應當全部涂制玻片固定后干燥保存于低溫下備用（可置于小干燥器中或密封于塑料袋內置冰箱）。
2.FTA陽(yáng)性對照血清：為標準化的凍干的已經(jīng)1:5稀釋的梅毒病人FTA- ABS陽(yáng)性血清，在試劑盒啟用初期可與待測的血清同時(shí)染色，其螺旋體的熒光亮度應達“++”以上（即螺旋體形態(tài)清晰，黃綠色熒光明顯）。凍干血清根據瓶簽說(shuō)明稀釋。
3.FTA吸收劑：為特制的用以抑制非特異交叉反應的非致病性密螺旋體培養浸液，以0.2ml加待測熱滅活血清0.05ml，成1:5稀釋。
4.羊抗人或兔抗人IgG和／或IgM熒光抗體：為FITC標記的球蛋白，凍干制品0.5ml包裝。用時(shí)以雙蒸水重溶，然后小量（0.2ml）分裝凍存備用�？谷�IgGFA可用于各期梅毒的檢測，指示抗梅毒螺旋體IgG抗體的存在，抗人IgMFA 可用于早期及未治療的活動(dòng)性梅毒的檢測，抗梅毒螺旋體IgM抗體的存在，表明體內有梅毒螺旋體活動(dòng)。
熒光抗體水化后，取0.1ml按瓶簽指示稀釋?zhuān)瑢﹃?yáng)性血清染色，用自己的熒光顯微鏡觀(guān)察熒光強度，如強度不足，可降低稀釋度，如強度很高，則可加大稀釋度。用時(shí)設FA直接染抗原的陰性對照。
5.吐溫80：用以制備熒光抗體稀釋液。將吐溫與9.8ml磷酸鹽緩沖液分別于水浴加溫至56℃，然后吸0.2ml吐溫至緩沖液中，充分沖洗吸管，混勻，pH應為7.0~7.2，置冰箱中可長(cháng)期保存，如pH改變或產(chǎn)生沉淀則棄之。
6.封片劑：為純甘油與pH8.6緩沖鹽水按9:1混合而成。熒光抗體染色完成后，用毛細管吸取滴加在抗原涂區，量不必過(guò)多，以能擴散至蓋片全區又不使蓋片漂動(dòng)為宜。此封片劑也可用作鏡油。
7.磷酸鹽緩沖液（PBS)：將30g干粉溶于2670ml蒸餾水中，加入1.5ml預熱的吐溫80用作試驗血清的稀釋和染色玻片的浸泡。
8.FTA吸收劑對照：為與梅毒螺旋體有交叉反應的非梅毒病人血清，以PBS1:5稀釋?zhuān)墒孤菪w染成陽(yáng)性，而用吸收劑稀釋?zhuān)瑒t為陰性，本對照可證明吸收劑的可靠性。
【用途】
(1)檢出各期（從早期到晚期）梅毒病人體液（血、腦脊液等）中的抗梅毒螺旋體的特異IgG和IgM抗體，用以確定梅毒感染診斷和監測療效。
(2)供血者檢查。
(3)各種健康査體和婚前檢査。
【注意事項】
1.本試驗的標本為病人或被檢查者的血清。試驗前血清須56℃滅活30分鐘，已滅活過(guò)的血清也須于試驗當天再滅活10分鐘。
2.試驗程序：
(1)抗原片質(zhì)量檢查：利用試劑盒提供的瓶裝干燥抗原自已涂制的抗原片，染色前應用暗視野顯微術(shù)觀(guān)察一下螺旋體的密度和分布情況，如密度太低或螺旋體成團塊者，應重新用吸管或注射器反復抽吸，使螺旋體充分散開(kāi)，涂制的抗原每高倍視野應不少于10條。
如直接用試劑盒提供的抗原片，則不須檢查，可直接進(jìn)行染色，但從冰凍中取出的抗原片，必須徹底干燥。并緩慢通過(guò)酒精燈火焰2次（以不燙手為度）。
(2)將已滅活的待測血清以吸收劑1:5稀釋?zhuān)?/span>0.05ml血清加0.2ml吸收劑），充分混合后于37℃下放置20分鐘，使非特異性交叉反應抗體被充分吸收，即取20~30μl加于抗原涂膜上，使涂膜完全覆蓋。
陽(yáng)性和陰性對照血清均分別以PBS和吸收劑同上作1:5稀釋處理，然后加于抗原膜上。
熒光抗體對照則于抗原膜上加PBS或吸收劑。
(3)將以上涂片置于濕盒內，密蓋，于35~37℃下孵育30分鐘。
(4)置涂片于玻片架上，以流動(dòng)PBS沖洗去除已經(jīng)反應的血清或對照液，然后浸于PBS中5分鐘，提拉10次，再換水重復浸洗1次。
(5)以蒸餾水沖洗5秒鐘，吸干。
(6)以2％吐溫緩沖液稀釋抗人熒光抗體至工作濃度，每涂膜加10~20μl覆蓋。
(7)重復3、4步驟。
(8)以封片劑封片，防止壓入氣泡。
(9)熒光顯微鏡檢查，宜盡早完成，不能及時(shí)鏡檢的涂片須放置于冰盒內。
(10)如結果全為陰性，應以暗視野顯微術(shù)或普通顯微術(shù)檢查一下是否有螺旋體存在。
3.報告結果：鏡檢熒光抗體染色的熒光發(fā)射強度，是一個(gè)相對值，與熒光顯微鏡的光學(xué)系統密切相關(guān)，熒光強度的比較，只能在同一裝置內進(jìn)行才有意義，因此，相對熒光強度的判定應以所用熒光顯微鏡對已知陽(yáng)性標本的染色情況來(lái)加以標化，觀(guān)察結果一般分3種：
(1)陽(yáng)性：螺旋體的熒光強度在1+～4+之間，1+指熒光足以使螺旋形態(tài)典型，邊界清晰可見(jiàn)。2+以上的熒光強度則有很強的隨意性，其差別并無(wú)本質(zhì)上的意義。
(2)邊界：熒光強度＜1+，即弱但肯定。
(3)陰性：可見(jiàn)背景發(fā)紅色熒光的血球但見(jiàn)不到螺旋體，或僅有模糊影像。1＋和＜1+的標本宜重試1次（陰性標本不必重試），如重試時(shí)為1+或更強，則報告為：“ FTA-ABS陽(yáng)性”；如不足1＋則報告為：“FTA-ABS陰性”。
如有必要，強陽(yáng)性標本可做稀釋度測定。熒光抗體可用抗人IgG或抗人IgM，根據診斷要求而定。
（軍事醫學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所黃策編 第二軍醫大學(xué) 謝正旸審）
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