一般培養基制作流程及估計時(shí)間

   
   一般培養基制作流程及估計時(shí)間
培養皿或試管清洗,烘乾:
以清水或洗潔劑以容器清洗乾凈,再以烘箱烘乾,若時(shí)間充裕,亦可以自然晾乾.一般30個(gè)培養皿清洗約需15~30分鐘,烘乾約需半小時(shí)至一小時(shí).
棉花塞制作(使用培養皿者此步驟省略):
取適量棉花揉成團大小適合試管口,長(cháng)度需達管口直徑兩倍以上,再以紗布包好.時(shí)間難以計算,一個(gè)大致可以1分鐘計算.
培養皿或試管滅菌:
將培養皿或試管放入160℃以上烘箱2小時(shí)以上加以滅菌.等升溫約需半小時(shí),滅菌完后,需降至80℃以下方可拿出,降溫時(shí)間約為1~2小時(shí),降溫速度不可過(guò)快,避免玻璃破裂.
培養液配置:
依培養基配方配置溶液,一般一盆培養皿或一管試管,約需10~15ml溶液.
總量少時(shí),為避免水分過(guò)度蒸發(fā)或沾黏於滅菌容器上,需斟酌加量.
此步驟時(shí)間,僅與秤藥技術(shù)有關(guān),粉末放入水中,只要稍微搖散,不要有結塊現象即可.
以高壓滅菌釜將培養液滅菌:
將配好之溶液置入高壓滅菌釜滅菌,以121℃,1.2kg/cm2 放置20~30分鐘左右即可.自開(kāi)機起至壓力降至0約需1小時(shí)以上.
培養液倒入容器:
滅菌完畢,尚不能直接倒入容器,一方面高溫時(shí),我們很難以手拿著(zhù)操作,一方面怕試管或培養皿在快速溫度變化時(shí)會(huì )破裂.一般約等到40~50℃才將培養液倒入我們所需的容器,最好能在10分鐘內全部倒好.倒入后培養皿很快即會(huì )凝固,但試管需等待久一點(diǎn).
冷卻固化后,進(jìn)行實(shí)驗或放入冰箱暫存:
培養皿培養基需倒置,以避免凝結之水氣污染.
試管培養基則塞好棉花塞保存,必要時(shí)以鋁箔紙包裹.
實(shí)驗:
操作前半小時(shí)需先以70%酒精擦拭無(wú)菌操作臺內部,然后開(kāi)啟送風(fēng)開(kāi)關(guān),此時(shí)可同時(shí)以紫外光燈加強滅菌,但請放置告示牌,避免傷及他人.
【培養基成分】本室目前備有LB固態(tài)培養基及LB液態(tài)培養基粉末成分如下:
1.LB固態(tài)培養基:
Tryptose 10g/L,Yeast Extract 5g/L,Sodium Chloride 10g/L,Agar 15g/L
2.LB液態(tài)培養基:
Tryptose 10g/L,Yeast Extract 5g/L,Sodium Chloride 10g/L

 

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