華農2號培養基

【原理】

  培養基中的牛肉浸汁，胰蛋白胨、䏡及䏡蛋白胨供給豬痢疾密螺旋體(T. I)營(yíng)養，半胱氨酸為還原劑，可降低培養基的氧化還原電位，使適于T. I生長(cháng)，刃天青(resazurin)為氧化還原指示劑，對T.I無(wú)毒性。它有-51mv的氧化還原電位(E′o)，當E′o低至-110mv或更低時(shí)，其顏色由藍到粉紅色到完全無(wú)色，再氧化時(shí)刃天青變成粉紅色而不轉變成藍色。

【成分】

  取經(jīng)濾紙過(guò)濾并于-20℃保存的牛肉浸汁，置溫水浴融化，懸浮上述各成分(除半胱氨酸及胎牛血清外)于1L牛肉浸汁內，加溫使完全溶解，然后煮沸直至指示劑退色，再稍快通入CO₂遍于整個(gè)培養液中使發(fā)生氣泡，以排除培養液中的氧氣，再加入半胱氨酸，待溶解后，調至pH7.0±0.2，然后分裝于中試管中，每支9ml，塞上棉塞后，118℃滅菌15分鐘，取出后待冷至45℃左右，無(wú)菌加入除菌滅活胎牛血清1ml混勻后，馬上供接種用。

【用途】

  作豬痢疾密螺旋體和無(wú)害密螺旋體的液體培養及生化鑒定用。

【注意事項】

  1.本培養基于滅菌待冷并經(jīng)加入胎牛血清后，應迅速接種密螺旋體并置厭氧罐中培養。以免放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，空氣中的氧氣侵入培養基中(可由指示劑的顏色變化觀(guān)察到，當液體表面出現粉紅色層并逐漸增厚時(shí)，說(shuō)明侵入培養液中的氧逐漸増多)而影響厭氧性密螺旋體的生長(cháng)。

  2.一次用不完的培養基，則不加胎牛血清，并于滅菌后換上滅菌橡皮塞塞緊后保存。使用前再換上滅菌棉塞。如有一定量的氧氣侵入，則重新置水浴中煮沸，再通入除菌無(wú)氧二氧化碳于培養基中，使產(chǎn)生氣泡以排除培養基中的溶解氧后，再加入胎牛血清后使用。

  3.每支培養基接種密螺旋體時(shí)，需用鉑耳刮取大量的菌苔接種3~4次，才能保證接種成功并能生長(cháng)，且于接種后迅速置于含冷鈀催化劑“105”及CO₂ : H₂=50:50的厭氧罐中培養。

  4.亦可將接種密螺旋體的試管培養基換以滅菌橡皮塞，并用帶針頭的大注射器迅速抽出其中空氣經(jīng)密封后，置普通溫箱培養。

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