華農3號培養基

【原理】

  本培養基在華農1號培養基基礎上又加入新鮮制備的腦心浸液及新鮮骨膠酶消化液制成，在此培養基上豬痢疾密螺旋體生長(cháng)成較厚的菌苔，適于制備抗原或菌苗之用。

【成分】

  1.濃縮(1.6倍)牛肉浸汁制備:取絞碎新鮮牛肉500g加蒸餾水625ml，冷浸過(guò)液，次日煮沸1小時(shí)并用蒸餾水補充至原量后，用紗布棉花過(guò)濾，滅菌冷卻后，貯存于-20℃備用。

  2.濃縮(2.5倍)腦心浸液制備:取切碎牛腦（或絞碎牛心）200g，加蒸餾水160ml，置4~6℃冷浸過(guò)夜，次日置45℃水浴1小時(shí)，再煮沸30分鐘，用蒸餾水補充至原量，以洗凈玻璃棉過(guò)濾（牛心浸液可用濾紙過(guò)濾），再取上述腦浸液40ml,加心浸液50ml即成濃縮2.5倍腦心浸液。經(jīng)121℃滅菌15分鐘，冷卻后，貯存于-20℃備用。

  3.濃縮(2.5倍)骨膠消化液制備:取牛的管骨（切斷使露出骨髓），軟骨和腱（切斷）1000g，加蒸餾水800ml,40℃冷浸24小時(shí)，高壓滅菌（121℃,30分鐘～1小時(shí)），然后棄骨頭，再煮開(kāi)并用雙層紗布過(guò)濾去渣，濾液經(jīng)冷卻后，用虹吸法除去油脂，然后置40℃24小時(shí)后，再次去脂即成濃縮骨膠液。消化方法如下：將胰酶溶液（結晶胰酶0.5g, NaHCO₃2g，蔗糖0.5g,溫蒸餾水74ml，置37℃水浴溶解即成）加入到預熱至37℃的400ml骨膠液中，置37℃溫箱消化16~48小時(shí)（其間振蕩數次），再置4℃冰箱過(guò)液（此時(shí)消化液已不結凍成膠狀），然后任沸水浴中煮沸15~20分鐘，以停止酶的作用。此消化液經(jīng)煮沸后顯示出在微帶淡黃的清亮液體中有白色絮狀沉淀，再濾紙過(guò)濾后得到微黃色透明清亮的骨膠汁消化液，滅菌待冷后置-20℃貯存備用。

  4.華農3號培養基的配制:將上述各成分（除蒸餾水Spectam牛血外）加溫溶解后，以蒸餾水補足至1000ml，調整至pH7.3±0.5,121℃滅菌15分鐘后，置溫水浴中冷卻至50℃左右，加入 Spectam 溶液及無(wú)菌脫纖牛血，混勻后，傾注平皿制成5~7mm的平皿培養基備用。

【用途】

  用于大量培養豬痢疾密螺旋體作抗原或生產(chǎn)菌苗。

【注意事項】

  1.本培養基應傾注成5~7mm的瓊脂平皿基，在這種較厚的瓊脂平皿上豬痢疾密螺旋體生長(cháng)成較厚菌苔。

  2.如用純菌種大量制備抗原，培養基中可不加 Spectam 。

  3.用鉑耳釣取菌種時(shí)，宜在生長(cháng)豐厚處刮取較多菌種在本培養基上劃密線(xiàn)于整個(gè)培養基表面，然后置含有冷鈀催化劑“105”及 CO₂:H₂=20:80的厭氧罐中培養4~5天，可得到大量的密螺旋體培養物。

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