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一、產(chǎn)品介紹：
本系統由青島高科園海博生物技術(shù)有限公司聯(lián)合山東省出入境檢驗檢疫局共同研發(fā)設計，篩選21項生化反應，歷經(jīng)兩年多的不斷改良，現可鑒定一百多種常見(jiàn)革蘭氏陰性細菌，鑒定結果接近100%，可廣泛用于革蘭氏陰性細菌的快速鑒定。
二、使用方法：
1、挑取新培養的待檢測菌單菌落于9mL生理鹽水中制成菌懸液，用酒精棉擦拭打孔器和蓋子消毒，將生化鑒定條打孔后，每孔接種100μL菌液，氨基酸需覆蓋約300μL無(wú)菌石蠟，蓋上蓋子至于37℃培養24h后，觀(guān)察實(shí)驗結果。
2、滴加1-2滴無(wú)菌水將氧化酶試紙潤濕，使用玻璃棒挑去新鮮菌落涂抹于氧化酶試紙，觀(guān)察試驗結果。
3、每三孔記為1組，共7組（氧化酶為最后一位），第一孔若陽(yáng)性記為1，第二孔若陽(yáng)性記為2，第三孔若陽(yáng)性記為4，若為陰性則記為0，將每組三孔數值相加，便可得到7個(gè)數組成的編碼，將此編碼輸入數據庫（如有反應不確定可在前面打對號），讀取鑒定結果。
三、原理及結果判斷：
不同種屬的細菌具有不完全相同的生化特征。本系統選取21種典型生化試驗（20孔生化鑒定條和一個(gè)氧化酶試紙），并把生化反應的結果轉換為一個(gè)8進(jìn)制數，通過(guò)提供的標準數據庫查詢(xún)系統可得到實(shí)驗菌株歸屬的相對概率、T值和R值，對菌株的歸屬進(jìn)行一定程度的鑒定。
1孔為ONPG試驗，有些細菌有β-半乳糖苷酶，可水解ONPG，釋放出黃色的鄰位硝基苯酚，因此溶液變黃為陽(yáng)性反應，無(wú)色為陰性反應。
注意事項：ONPG反應較快，接種菌量大時(shí)數小時(shí)即可獲得陽(yáng)性結果，該試驗亦可鑒別遲緩發(fā)酵乳糖和不發(fā)酵乳糖細菌，如宋內志賀氏菌遲緩發(fā)酵乳糖變黃，ONPG可24h內陽(yáng)性。
2、3、4孔分別為精氨酸、賴(lài)氨酸和鳥(niǎo)氨酸脫羧酶試驗，有些細菌可產(chǎn)生某種氨基酸脫羧酶，使該種氨基酸脫去羧基生成胺，使培養基呈堿性，此反應需在厭氧、酸性環(huán)境中進(jìn)行，培養基中含有葡萄糖，前期細菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，繼續培養時(shí)，氨基酸脫羧產(chǎn)胺使培養基變堿，溴甲酚紫為酸堿指示劑，因此溶液呈紫色為陽(yáng)性反應，黃色為陰性反應。
乳糖發(fā)酵管
ONPG
注意事項：
①由于有些菌分解胨類(lèi)產(chǎn)堿較快，出現灰紫色或灰白色（如肺炎克雷伯氏菌在鳥(niǎo)氨酸中培養18h時(shí)為黃色，24h變?yōu)榛野咨�，判定為陰性�?/span>
②培養時(shí)間不宜超過(guò)24h，有些菌分解胨類(lèi)產(chǎn)堿較多會(huì )導致24h后陰性反應變?yōu)樽仙�，形成假�?yáng)性，如產(chǎn)氣腸桿菌和陰溝腸桿菌等。
③觀(guān)察結果前需注意試驗管是否混濁長(cháng)菌，若未長(cháng)菌則需重新接種試驗，除少數專(zhuān)性需氧菌如銅綠假單胞菌等。
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8孔及12-20孔為糖醇類(lèi)發(fā)酵試驗，若細菌能發(fā)酵利用某種糖或醇，則會(huì )產(chǎn)酸使培養基pH下降，溴麝香草酚藍為酸堿指示劑，因此溶液變黃為陽(yáng)性，顏色不變或變藍為陰性；(下圖以棉子糖為例）
注意事項：
①有些菌像阪崎腸桿菌、肺炎克雷伯菌等利用糖產(chǎn)酸較快，且繼續生長(cháng)產(chǎn)堿也較快。所以觀(guān)察結果需較早，從18h開(kāi)始觀(guān)察，變黃則記為陽(yáng)性；最好每隔一段時(shí)間觀(guān)察一次直至48h，期間若變黃則記為陽(yáng)性。
②有些菌發(fā)酵糖類(lèi)為弱陽(yáng)性可能出現淺綠色、黃綠色等不好判斷的結果，可在系統中勾選此項反應。
③有些菌為遲緩發(fā)酵型，很難在博檢條孔中產(chǎn)酸，需根據判定結果調整或補做試驗。
9孔為吲哚試驗，有些細菌可分解色氨酸形成吲哚，加入二甲基苯甲醛（靛基質(zhì)試劑盒）后反應生成玫瑰紅色吲哚環(huán)，則為陽(yáng)性反應，加入試劑后若顏色不變，則為陰性反應；
10孔為V-P試驗，有些細菌分解葡萄糖過(guò)程中會(huì )產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，在堿性溶液中乙酰甲基甲醇被氧化后可與胍基反應生成紅色化合物，因此加入VP試劑（V-P試劑盒）后變紅為陽(yáng)性反應，顏色不變或棕黃色為陰性反應；
注意事項：建議培養24-48h，滴加V-P試劑后輕輕混勻，陽(yáng)性反應可立刻或于數分鐘內出現紅色，如為陰性，應放在36℃±1 ℃繼續培養0.5-4 h 再進(jìn)行觀(guān)察。
11孔為明膠分解試驗，明膠溶液在低溫下呈固態(tài)，某些細菌可將明膠水解為多肽和氨基酸，使明膠失去凝膠性質(zhì)，因此最終明膠不凝固為陽(yáng)性，凝固為陰性；（下圖所示為明膠陽(yáng)性與陰性對照）
注意事項：有些菌水解明膠較慢，所以必要時(shí)需延長(cháng)培養3-7天。
氧化酶試紙：某些細菌具有氧化酶，可氧化四甲基對苯二胺生成紅色的醌類(lèi)氧化物，因此試紙呈現藍色至藍紫色為陽(yáng)性，顏色不變?yōu)殛幮�。（下圖為氧化酶陽(yáng)性實(shí)驗結果）
注意事項：挑取菌落時(shí)不能用鎳鉻絲等金屬制品，以防產(chǎn)生假陽(yáng)性結果。
四、使用方法：
1、挑取新培養的待檢測菌單菌落于9mL生理鹽水中制成菌懸液，用酒精棉擦拭打孔器和蓋子消毒，將生化鑒定條打孔后，每孔接種100μL菌液，氨基酸需覆蓋約300μL無(wú)菌石蠟，蓋上蓋子至于37℃培養18-24h后，觀(guān)察實(shí)驗結果。
2、滴加1-2滴無(wú)菌水將氧化酶試紙潤濕，使用玻璃棒挑去新鮮菌落涂抹于氧化酶試紙，觀(guān)察試驗結果。
3、每三孔記為1組，共7組（氧化酶為最后一位），第一孔若陽(yáng)性記為1，第二孔若陽(yáng)性記為2，第三孔若陽(yáng)性記為4，若為陰性則記為0，將每組三孔數值相加，便可得到7個(gè)數組成的編碼，將此編碼輸入數據庫（如有反應不確定可在前面打對號），讀取鑒定結果。
五、實(shí)驗舉例：
現選取常見(jiàn)17株革蘭氏陰性細菌進(jìn)行試驗，試驗及鑒定結果如下：
1、沙門(mén)氏菌
沙門(mén)氏菌ATCC14028的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
2、甲型副傷寒沙門(mén)氏菌
甲型副傷寒沙門(mén)氏菌CMCC50093的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
3、大腸埃希氏菌
大腸埃希氏菌ATCC25922的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
4、奇異變形桿菌
奇異變形桿菌CMCC49005的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
5、普通變形桿菌
普通變形桿菌ATCC13315的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
6、陰溝腸桿菌
陰溝腸桿菌ATCC23355的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
7、產(chǎn)氣腸桿菌
產(chǎn)氣腸桿菌CMCC45103的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
8、弗氏檸檬酸桿菌
弗氏檸檬酸桿菌ATCC43864的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
9、產(chǎn)酸克雷伯氏菌
產(chǎn)酸克雷伯氏菌CICC22913的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
10、粘質(zhì)沙雷氏菌
粘質(zhì)沙雷氏菌ATCC13880的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
11、福氏志賀氏菌
福氏志賀氏菌ATCC12022的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
12、宋內志賀氏菌
宋內志賀氏菌ATCC25931的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
13、小腸耶爾森氏菌
小腸結腸炎耶爾森氏菌CMCC52004的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
14、副溶血性弧菌
副溶血性弧菌ATCC17802的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
15、霍亂弧菌
霍亂弧菌非O1的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
16、創(chuàng )傷弧菌
創(chuàng )傷弧菌ATCC27562的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
17、溶藻弧菌
溶藻弧菌ATCC33787的試驗結果如下圖所示：
系統鑒定結果如下圖所示：
綜上所述，博檢革蘭氏陰性細菌鑒定系統適用范圍廣、準確率高，是革蘭氏陰性細菌鑒定的極佳選擇。
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注:本文屬海博生物原創(chuàng ),未經(jīng)允許不得轉載。
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