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【原理】
甲烷細菌是一類(lèi)嚴格厭氧細菌。其可利用CO2，和H2，或乙酸、甲醇等作碳源和能源，可利用無(wú)機銨鹽作氮源，還需要若干微量元素等。據此，配制本培養基時(shí)要將培養基中氧氣排除，并將甲烷細菌的這些營(yíng)養成分分裝在無(wú)氧試管中，滅菌后用。
【成分】
【制法】
a．液磷酸氫二鉀
348mg
磷酸二氫鉀
227mg
氯化銨
500mg
硫酸鎂
500mg
硫酸鐵(FeSO4·7H20)
2mg
氯化鈣(CaCl2·2H20)
250mg
H2/CO2(80/20)0.2Pa
0.2Pa(20℃）或
乙酸鈉
100mmol
甲醇
200mmol
三甲氨
100mmol
瓊脂（液體培養基不加）
20g
氯化鈉
2.25g
刃天青
1mg
碳酸氫鈉
850mg
蒸留水
1000ml
微量元素溶液(b液）
3ml
維生素溶液(c液）
10ml
b．半胱氨酸
300mg/L
c.Na2S.nH2O(n=7-9)
300mg/L
按照配方a準確秤量，磁力攪拌溶解混勻，倒入燒瓶中加熱沸騰使刃青天褪色后，將燒瓶置于冰浴冷卻，同時(shí)將無(wú)氧的CO2/N2(20/80）充入燒內的培養液中，排除其中剩余的氧15分鐘，然后用26%NaOH溶液調至pH7.0，接著(zhù)將培養液分裝于無(wú)氧小試管中，每管5ml，并在試管氣相部分充人H2/CO2(80/20)，立即用膠塞密封，121℃滅菌30分鐘備用。
b、c液配制：先量取若干蒸餾水分別放入二只玻璃中，然后分別充入無(wú)氧N210分鐘，再將預先秤好的b、c溶質(zhì)分別加入玻璃中，立即用膠塞塞緊，并用鋁蓋固定，121℃滅菌30分鐘備用。
【用途】
分離培養和鑒定甲烷細菌。
【注意事項】
液體培養基在使用之前，要用無(wú)菌注射器先經(jīng)無(wú)氧N2沖洗，然后取一定量的b、c溶液注入培養液a中，
充分搖勻后再接種。固體滾管培養基，加熱溶化后冷卻至55℃左右，加入一定量的b、c溶液，充分搖勻后，立即在冰屑上迅速滾動(dòng)，使培養基在管壁均勻凝固，然后用無(wú)菌接種環(huán)取少量菌體，在滾管壁培養基上劃線(xiàn)，同時(shí)充入無(wú)氧的N2/CO2,或H2/CO2(80/20)，接種完畢立即塞緊膠塞培養。
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