葉氏快速檢測細菌尿素酶人尿培養基

【原理】

  人尿含有約2%尿素、適量的NaCI及緩沖鹽等,又有少許有機物及某些微量元素, pH微酸性至中性,本培養基適于一般細菌生長(cháng),如再加少量葡萄糖及蛋白胨提供營(yíng)養的碳源及氮源,則可促進(jìn)細菌加快繁殖。其中產(chǎn)生尿素酶的細菌,即迅速分解尿中的尿素產(chǎn)生氨,使附加的酚紅指示劑由淡黃色(pH6.8)變呈鮮紅色(pH>8.1),可在10分鐘至4小時(shí)內看出結果,比一般尿素培養基反應快。雖然許多種細菌也分解葡萄糖產(chǎn)酸,但量少,不影響結果,且使陰性反應更明顯。又因尿液緩沖力弱, pH變色敏感。

【成分】

【制法】

  (1)先用酒精擦拭消毒男人尿道口周?chē)?/span>,最先排棄第1段的尿,留取排出的中段尿盛于無(wú)菌容器內,然后排棄剩余的尿;

  (2)以無(wú)菌量筒或大吸管取90ml新鮮中段尿盛于瓶?jì)?/span>,稱(chēng)蛋白胨及葡萄糖各0.1g溶于10ml水中,煮沸滅菌5分鐘后,加于尿液內,再加0.2%酚紅水溶液0.5~1ml ,分裝于無(wú)菌試管內約3ml,即可使用。如尿液混濁有沉淀,可放在50℃的溫水浴中加熱溶解片刻即清澄。

【用途】

  用于鑒定能分解尿素的細菌(尿素酶陽(yáng)性),以與其它菌類(lèi)區別。分解尿素的細菌計有下列各種。

  主要是大多數變形桿菌,各種布魯氏菌,未分類(lèi)的第Ⅳ組產(chǎn)堿桿菌,不產(chǎn)色桿菌屬(Achromobacter)中生物1型及2型菌,假單胞樣桿菌(Pseudomonaslike bacteria)中若干組、型細菌,變黑歐文氏菌(Erwinia nigrifluens),尿素巴斯德桿菌(Pasteurellaurease),支氣管敗血鮑德氏桿菌(Bordetella bronchiseptica),肺炎克雷伯桿菌(kledsiella pneumoniae)苯基丙酮摩納克斯氏菌(Moraxella phenylpyruvica)等。

【注意事項】

  1、尿液培基快速檢測時(shí)應將細菌較多量接種上述液體人尿培養基中,在37℃孵箱或水浴箱中孵育,隔10、30、60分種及小時(shí)各觀(guān)察1次,如培養基不變,呈紅色,則繼續孵育12~24小時(shí)后再觀(guān)察。培養基由橘黃色行呈鮮紅色者,表明尿素已被細菌產(chǎn)生的尿素酶分解,產(chǎn)生堿(PH>8.1)。注意初次接種菌量不宜太少,且需取純菌接種。

  2、用人尿瓊脂基檢測時(shí)，取高壓蒸汽滅菌過(guò)的15%~20%瓊脂加熱溶化,待冷至50℃溶融時(shí),以10ml加入于上記人尿液培養基90ml中(注意須先將人尿液培養基放在水浴中臨時(shí)加溫至50℃,以防加入瓊脂培養基時(shí)遇冷立即凝固),混勻后,趁溫熱分注于無(wú)菌試管內,每管3~5ml,斜置于臺上,待凝固成有2cm底層和3cm斜面,使用時(shí)只接種細菌于斜面上,不穿刺接種于底層,37℃培養4~6小時(shí),如為快速分解尿素的細菌,則在斜面上產(chǎn)生大量的堿性反應,并滲透入全部底層中,故呈鮮紅色,若是緩慢分解尿素的細菌,則先在斜面呈紅色,需培養數日后始見(jiàn)底層逐漸全呈紅色;不分解尿素的細菌,始終不產(chǎn)堿變色。

  3、對于營(yíng)養要求較高的細菌,需在上述人尿液培養基中加酵母膏至0.3%~0.5%(先配成10%浸液滅菌后加入),加無(wú)菌未滅能的牛血清或馬血清1%。有時(shí)還可加氯高鐵血紅素(hemin)或羥高鐵血紅素(hematin)0.5mg/100ml培基。

  4、對于檢測厭氧菌尿素酶反應,可在人尿液體培養基或人尿瓊脂固體培養基中添加巰基乙酸鈉0.1%~0.2%(水溶,煮沸滅菌后加入)。接種細菌后在37℃中培養。

(第二軍醫大學(xué) 葉天星供稿)

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