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一、盲樣考核簡(jiǎn)介
盲樣考核，是指將未知詳細樣品信息的待測樣品發(fā)放給相關(guān)檢測機構，要求檢測員在指定時(shí)間內、完成特定樣品檢測項目并提供相應報告的一種考核形式。盲樣考核作為實(shí)驗室質(zhì)量控制的重要環(huán)節，可直接、客觀(guān)地反映實(shí)驗室檢測能力，也是實(shí)驗室水平的重要體現。
對從事檢驗檢測的行業(yè)同仁來(lái)說(shuō)，盲樣檢測是必須掌握的專(zhuān)業(yè)技能之一。尤其對于CMA或CNAS認證的實(shí)驗室，每年更是要面臨各類(lèi)盲樣考核，其中能力驗證是盲樣考核最重要且最主要的來(lái)源。
能力驗證是對實(shí)驗室的技術(shù)能力的證明，在一個(gè)評審周期內若能多次參加能力驗證，既可提升實(shí)驗室的檢測、技術(shù)能力，同時(shí)也是自身技術(shù)水平的彰顯。本文主要就微生物盲樣檢測過(guò)程中需要注意的事項進(jìn)行詳細闡述。
二、物品準備
1、合理保存、及時(shí)檢測
與一般樣品檢測不同的是，微生物盲樣的檢測，具有很強的時(shí)效性。因為盲樣中的菌體是活菌體，隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng)，樣品中菌體的含量會(huì )有所下降，尤其對含定量菌的盲樣來(lái)說(shuō)，拿到樣品進(jìn)行第一時(shí)間檢測尤為重要。如果不能及時(shí)檢測，或者對檢測時(shí)間有特殊規定時(shí)，要將樣品進(jìn)行合理保存，避免條件不當，造成樣品中菌數發(fā)生較大變化。
2、周密的準備工作
（1）操作人員：無(wú)論是否需要做盲樣考核，都要加強日常管理，按照實(shí)驗操作標準規范來(lái)做，熟悉方法原理和操作流程，如果平時(shí)嚴格按照操作規范來(lái)做，盲樣考核一定沒(méi)問(wèn)題。
（2）試劑溶液的準備：需根據檢測指標的不同配備對應且充足的試劑溶液，并進(jìn)行校準以保證實(shí)驗試劑的準確性。
（3）標準容器：即量具和存放溶液的容器，諸如各個(gè)規格的大肚移液管、刻度吸管、容量瓶、錐形瓶等等，都要在進(jìn)行盲樣考核之前清洗干凈，必要時(shí)可以泡酸處理。同時(shí)實(shí)驗用水、試劑等物質(zhì)也要提前確定在有效期內且數量充足。
3、仔細閱讀作業(yè)指導書(shū)
對于盲樣考核來(lái)說(shuō)，作業(yè)指導書(shū)就是方向標，會(huì )告訴你大量關(guān)鍵信息，尤其對微生物檢測來(lái)說(shuō)，仔細研讀作業(yè)指導書(shū)，嚴格按照要求來(lái)做，顯得尤為重要。
三、操作要點(diǎn)
1、準確性：所用容器盡量與作業(yè)指導書(shū)中所述一致。在對凍干菌株盲樣進(jìn)行檢測時(shí)，雖然大多數步驟都是相似的，但仔細對比，還是有很多不同。比方說(shuō)容器，樣品處理階段，有的實(shí)驗室喜歡用錐形瓶，有的喜歡用廣口瓶，還有的喜歡用均質(zhì)袋，并且即使同種容器，規格不同，也會(huì )使檢驗結果差異較大（圖1）。
錐形瓶與廣口瓶：
均質(zhì)袋：
圖1 試驗中常用的稀釋容器
2、有關(guān)振蕩混勻：通常樣品的混勻需要用到旋渦振蕩器或者拍打式均質(zhì)器，但有些操作人員也會(huì )用手工進(jìn)行晃動(dòng)混勻。旋渦振蕩20s的效果，如果用手工拍打，需要80多下才能等同，但通常來(lái)講，人工拍打，一般不會(huì )拍打那么多次，尤其對于一些無(wú)色液體（比如水樣）樣品，可能會(huì )簡(jiǎn)單搖晃幾下就認為已經(jīng)混勻。而實(shí)際上，樣品中的菌體并未被均勻分散開(kāi)，這就造成吸取樣品液的時(shí)候，吸取的菌數不均勻，并進(jìn)一步影響后續的稀釋過(guò)程，直接導致檢測結果的誤差。所以，在微生物盲樣檢測過(guò)程中，應盡量使用振蕩器進(jìn)行混勻，而非手工搖勻。
3、有關(guān)泡沫：樣品經(jīng)過(guò)振蕩混勻之后，通常上面會(huì )產(chǎn)生大量泡沫（圖2）。此時(shí)，一定不能直接吸取樣液進(jìn)行稀釋?zhuān)鴳撿o置一段時(shí)間，等泡沫消失之后再進(jìn)行吸取、稀釋和計數。如果不這樣操作，就會(huì )導致大量菌體漂浮在上層泡沫中，造成檢測的結果菌數偏低。
圖2 旋渦振蕩器震蕩后樣品液體表面的泡沫狀態(tài)
4、操作：有時(shí)候為了試驗需要，需要將少量的樣品進(jìn)行轉移到較大的容器中，一定要保證所有的樣品盡量全部轉移。比如說(shuō)，用1mL稀釋液溶化樣品后，如果只吸取1mL進(jìn)行轉移，就會(huì )漏掉很多菌體。正確的做法應該是多吸幾次，保證樣品盡量全部轉移。
5、培養條件：對于微生物計數的培養基的溫度控制，尤為重要。有的作業(yè)指導書(shū)中明確要求是46℃進(jìn)行傾注，這個(gè)必須是經(jīng)過(guò)恒溫水浴鍋水浴之后才能確定的，有的人通常只憑經(jīng)驗，用手摸著(zhù)不燙就進(jìn)行傾注，這樣也會(huì )導致結果的差異。對于有些菌種48℃的培養基傾注計出的菌數和46℃傾注培養出的數目是會(huì )有很大的差別的。
規范操作檢測結果：
不規范操作檢測結果：
圖3 同一瓶樣品規范操作和不規范操作的檢驗結果差異
綜上所述，微生物檢測過(guò)程的每個(gè)環(huán)節，都會(huì )造成結果不同程度的差異。而這些差異疊加起來(lái)，誤差就會(huì )越來(lái)越大，造成最終結果的偏離（圖3）。尤其當樣品中菌數本身就偏低的情況下，這種誤差更會(huì )逐級放大，最后甚至造成有菌也檢測不出來(lái)的情況。所以，提醒每一位參與盲樣檢測的人員，都應該嚴格試驗操作，格外注意試驗過(guò)程的細節。
注:本文屬海博生物原創(chuàng ),未經(jīng)允許不得轉載。
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