飲用天然礦泉水:糞鏈球菌檢驗方法及結果分析

  糞腸球菌作為一種益生菌，在醫學(xué)和食品工程領(lǐng)域得到廣泛應用。另外，腸球菌為消化道內正常存在的一類(lèi)微生物，在腸黏膜具有較強的耐受和定植能力，并且是一種兼性厭氧的乳酸菌，與厭氧、培養保存條件苛刻的雙歧桿菌相比，更適合于生產(chǎn)和應用。

  《GB8538-2016 飲用天然礦泉水：糞鏈球菌檢驗》

  采用濾膜法，將250mL水樣用孔徑為0.45μm的濾膜過(guò)濾，并將濾膜移至KF鏈球菌瓊脂培養基上，于36℃±1℃恒溫箱中培養48h，如果有紅色或粉紅色菌落生長(cháng)，需將菌落接種于腦-心浸萃瓊脂培養基上做進(jìn)一步的確證試驗，如過(guò)氧化氫酶反應為陰性，并能在腦-心浸萃瓊脂培養基上于45℃培養后生成菌落，則證實(shí)糞鏈球菌的存在，其檢測結果為陽(yáng)性。

  糞鏈球菌檢驗程序見(jiàn)圖1。

 圖1 糞鏈球菌檢驗程序

  使用方法：稱(chēng)取本品69.4g，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，煮沸至完全溶解，冷卻至50-60℃時(shí)，加入無(wú)菌1% TTC溶液10mL，混勻，傾入無(wú)菌平皿，備用。

  4.1.2 培養：

  將培養皿倒置，在36℃±1℃培養48h。

  4.1.3 計數：

  糞鏈球菌菌落在濾膜上呈現大小不等的紅色或粉紅色菌落。挑取不少于5個(gè)（不足5個(gè)則全挑）可疑菌落，進(jìn)行革蘭氏染色。鏡檢觀(guān)察，糞鏈球菌應為革蘭氏染色陽(yáng)性球菌，常排列成短鏈狀。根據菌落特征符合情況計數每250mL水樣中的典型菌落數。

  糞鏈球菌接種到KF鏈球菌瓊脂平板，培養結果如下圖所示：

 圖2 糞鏈球菌在KF鏈球菌瓊脂平板上的菌落特征

  糞鏈球菌接種到腦-心浸萃瓊脂培養基斜面，培養結果如下圖所示：

  4.2.2 用接種環(huán)從腦-心浸萃瓊脂培養基斜面上挑取典型培養物到一片清潔的載玻片上，加幾滴新鮮配制的3%過(guò)氧化氫到載玻片的涂抹菌苔上，如果沒(méi)有氣泡發(fā)生，則顯示過(guò)氧化氫酶反應為陰性，則菌落可視為可疑糞鏈球菌，需繼續如下的確信過(guò)程。如果有氣泡發(fā)生，則過(guò)氧化氫酶反應為陽(yáng)性，因此菌落不屬于糞鏈球菌，確信試驗到此即可停止。

  糞鏈球菌接種到腦-心浸萃液態(tài)培養基和膽汁液態(tài)培養基中，培養結果如下圖所示：

圖5 糞鏈球菌在腦-心浸萃液態(tài)培養基和膽汁液態(tài)培養基中的生長(cháng)情況 左：腦-心浸萃液態(tài)培養基；右：膽汁液態(tài)培養基； A：糞鏈球菌；B：空白對照；

  4.2.4 轉移到上述培養基后，若能夠生長(cháng)繁殖，則結果表示為陽(yáng)性，證實(shí)為糞鏈球菌。

  根據上述典型菌落的計數（4.1.3）和確證性試驗為陽(yáng)性的結果（4.2），計算每250mL水樣中的糞鏈球菌數量，結果以CFU/250mL計。

相關(guān)產(chǎn)品：

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相關(guān)標準：

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