神奈川試驗-我妻氏培養基的使用

一、試驗原理

  副溶血性弧菌在普通血平板上不溶血或只產(chǎn)生α溶血。但在特定條件下，某些菌株在含高鹽（7%）的人O型血或兔血以及D-甘露醇做為碳源的我妻氏瓊脂平板上可產(chǎn)生β溶血，稱(chēng)為神奈川現象。

  神奈川試驗結果與副溶血性弧菌的致病性顯著(zhù)相關(guān)，該試驗常用來(lái)判斷菌株的毒力強弱。副溶血性弧菌有845個(gè)血清型，主要通過(guò)十三種耐熱的菌體抗原(即O抗原)鑒定，而七種不耐熱的包膜抗原(即K抗原)可以用來(lái)輔助鑒定。其致病力可用神奈川試驗來(lái)區分。神奈川試驗陽(yáng)性菌的感染能力強，多數毒性菌株為神奈川試驗陽(yáng)性(K+)，多數非毒性菌株為神奈川試驗陰性(Kˉ)。引起食物中毒的副溶血性弧菌90%神奈川試驗陽(yáng)性，通常在12h內出現癥狀。K+菌株能產(chǎn)生一種耐熱型直接溶血素，Kˉ菌株能產(chǎn)生一種熱敏型溶血素，而有些菌株能產(chǎn)生這兩種溶血素。

  培養基中的蛋白胨和酵母粉提供營(yíng)養；磷酸氫二鉀為pH緩沖劑；7%含量的氯化鈉及甘露醇做為碳源，為副溶血性弧菌溶血現象提供條件；結晶紫可抑制部分耐鹽性、β溶血的葡萄球菌的生長(cháng)，瓊脂為凝固劑。

二、培養基成分及使用方法：

1. 培養基成分

2. 使用方法

  稱(chēng)取本品 11.3g，加熱溶解于100ml蒸餾水中。加熱至100℃保持30分鐘（可沸水浴30min）。冷卻至50℃左右時(shí)，按5%的體積加入新鮮兔血球，充分搖勻，傾注無(wú)菌平板備用。

三、質(zhì)控方法

1、按使用方法制備培養基，用接種環(huán)挑取以下質(zhì)控菌株固體培養物點(diǎn)種于表面干燥的平板，于37℃需氧培養18-24小時(shí)。

2、副溶血性弧菌和溶藻弧菌在培養基上的生長(cháng)情況如下圖所示：

副溶血性弧菌菌落周?chē)�有透明的β溶血環(huán)，溶藻弧菌菌落周?chē)鸁o(wú)溶血環(huán)。

四、注意事項

  在制備培養基的過(guò)程中，添加兔血球時(shí)，應先將兔血球溶液預熱至40-50℃左右，再加入至冷卻至50℃左右的培養基中。若二者溫差過(guò)大，易在培養基中產(chǎn)生凝塊；加入兔血球后應輕輕搖勻倒平板，若搖晃幅度過(guò)大易出現大量氣泡，倒出的平板不平整；平板不宜過(guò)厚，2-3mm為宜，方便觀(guān)察溶血環(huán)。

相關(guān)產(chǎn)品： 

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