微生物檢測的各種培養基

   
 　　　　　　　　　　　　　　微生物檢測的各種培養基 
 
名稱(chēng) 用途 
1 革蘭氏染色液 微生物染色 
2 營(yíng)養瓊脂 細菌培養和細菌總數測定 
3 孟加拉紅培養基 霉菌、酵母菌計數 
4 乳糖膽鹽發(fā)酵管 大腸菌群，糞大腸菌群及大腸桿菌的測定 
5 乳糖發(fā)酵管 供大腸菌群證實(shí)試驗用 
6 三糖鐵瓊脂 腸桿菌科細菌的生化反應篩選 
7 伊紅美蘭瓊脂 分離腸道致病菌 
8 緩沖蛋白胨水 沙門(mén)氏菌檢驗中的前增菌 
9 四硫酸鈉煌(TTB)綠增菌液 沙門(mén)氏菌檢驗中的前增菌 
10 GN增菌液 志賀氏菌的前增菌 
11 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液 沙門(mén)氏菌選擇性增菌培養 
12 SS瓊脂 沙門(mén)氏菌、志賀氏菌的分離 
13 V-P半固體瓊脂 細菌檢驗的V-P試驗 
14 7.5%氯化鈉肉湯 金黃色葡萄球菌的增菌培養 
15 Baird-Parker培養基 金黃色葡萄球菌的檢驗 
16 酸性肉湯 酸性罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢驗 
17 尿素瓊脂基礎 細菌檢驗中的尿素酶試驗 
18 賴(lài)氨酸脫羧酶培養基 細菌檢驗中的賴(lài)氨酸脫羧酶試驗 
19 吲哚培養基 細菌靛基質(zhì)試驗，亦稱(chēng)色氨酸肉湯 
20 硝酸鹽氰化鉀培養基 細菌檢驗中的硝酸鹽還原試驗和氰化鉀試驗 
21 生理鹽水 檢樣的溶解與稀釋 
1革蘭氏染色法 
1.1革蘭氏染色液
1.1.1結晶紫染色液
成份： 結晶紫 1.0g
95%乙醇 20.0ml
1%草酸銨水溶液 80.0ml
1.1.2革蘭氏碘液
成份： 碘 1.0g
碘化鉀 2.0g
蒸餾水 300.0ml
1.1.3 95%乙醇
1.1.4沙黃復染液 
成份： 沙黃 0.25g
95%乙醇 10.0ml
蒸餾水 90.0ml 
1.2染色法
1.2.1將涂片在火焰上固定。
1.2.2初染：滴加結晶紫染色液，染1min，水洗。
1.2.3媒染：滴加革蘭氏碘液，作用1 min，水洗。
1.2.4脫色：滴加95%乙醇脫色，水洗；或將乙醇滴滿(mǎn)整個(gè)涂片，立即傾去，再用乙醇滴滿(mǎn)整個(gè)涂片，脫色10s，水洗。
1.2.5復染：滴加沙黃復染液，染1min，水洗，待干，鏡檢。
1.2.6結果判定：革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色；革蘭氏陰性菌呈紅色。
2一般培養基和專(zhuān)用培養基
2.1營(yíng)養瓊脂
2.1.1用途：用于一般細菌培養及細菌總數測定。
2.2.2成份（g/L）：
蛋白胨 10.0
牛肉粉 3.0
氯化鈉 5.0
瓊脂 15.0
PH7.3±0.1
5.2.2.3制法: 稱(chēng)取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝，121℃15 min高壓滅菌備用。
5.2.2.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。

2.2孟加拉紅培養基
2.2.1用途：用于糧食、食品、飲料中霉菌、酵母菌計數。
2.2.2成份（g/L）：
蛋白胨 5.0
葡萄糖 10.0
磷酸二氫鉀 1.0
硫酸鎂 0.5
孟加拉紅 0.03
氯霉菌 0.1
瓊脂 15.0
2.2.3制法: 稱(chēng)取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝，121℃20 min高壓滅菌備用。
2.2.4注意事項：保存于陰涼干燥處；密封、避光。
2.3乳糖膽鹽發(fā)酵管
2.3.1用途：用于大腸菌群，糞大腸菌群及大腸桿菌的測定。
2.3.2成份（g/L）：
蛋白胨 20.0
膽鹽 3.0
乳糖 5.0
溴甲酚紫 0.01
PH7.4±0.1
2.3.3制法: 稱(chēng)取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝于有倒立發(fā)酵管的試管中，115℃15min高壓滅菌，雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除純水外，其它成份加倍。
2.3.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。
2.4乳糖復發(fā)酵管
2.4.1用途：供大腸菌群證實(shí)試驗用。
2.4.2成份（g/L）：
蛋白胨 20.0
乳糖 10.0
溴甲酚紫 0.01
PH7.4±0.1
2.4.3制法: 稱(chēng)取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝10ml于有倒立發(fā)酵管的試管中，115℃15min高壓滅菌備用。
2.4.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。
2.5三糖鐵瓊脂
2.5.1用途：主要用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選。
2.5.2成份（g/L）：
蛋白胨 20.0 酚紅 0.025
牛肉膏 3.0 氯化鈉 5.0 
乳糖 10.0 硫酸亞鐵銨(6H2O) 0.5
蔗糖 10.0 硫代硫酸鈉 0.5
瓊脂 12.0 葡萄糖 1.0
PH7.4±0.1
2.5.3制法: 稱(chēng)取各成份溶于純水中，加熱煮沸至溶解，分裝試管，115℃15min高壓滅菌制成高層斜面備用。
2.5.4注意事項：保存于陰涼干燥處，密封、避光。
2.6伊紅美蘭瓊脂
2.6.1用途：弱選擇性培養基，用于分離腸道致病菌。
2.6.2成份（g/L）：
蛋白胨 10.0
乳糖 10.0
磷酸氫二鉀 2.0
瓊脂 15.0
伊紅 0.4
美蘭 0.065
PH7.1±0.2
2.6.3制法: 稱(chēng)取各成份溶于純水中，加熱溶解，121℃15min高壓滅菌，冷至55℃傾注平板備用。
2.6.4注意事項：保存于陰涼干燥處，密封、避光。
實(shí)施糾正措施
2.7緩沖蛋白胨水
2.7.1用途：用于沙門(mén)氏菌檢驗中的前增菌。
2.7.2成份（g/L）：
蛋白胨 10.0
氯化鈉 5.0
Na2HPO4(12H2O) 9.0
KH2PO4 1.5
最終PH7.2±0.1
2.7.3制法: 稱(chēng)取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝，每瓶225ml，121℃15min高壓滅菌備用。
2.7.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。
2.8四硫酸鈉煌(TTB)綠增菌液
2.8.1用途：用于沙門(mén)氏菌檢驗中前增菌。
2.8.2成份（g/L）：
A基礎培養基
多胨或胨 5.0g
膽鹽 1.0g
碳酸鈣 10.0g
硫代硫酸鈉 30.0g
蒸餾水 1000ml
B碘溶液
碘 5.0g
碘化鉀 6.0g
蒸餾水 20ml
2.8.3制法：將基礎培養基的各成分加入蒸餾水中，加熱溶解，分裝每瓶100 ml。分裝時(shí)應隨時(shí)震蕩，使其中的碳酸鈣混勻。121℃高壓滅菌15min備用，臨用時(shí)每100 ml基礎培養基中加入碘溶液2 ml、0.1%煌綠溶液1 ml。
5.2.8.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。
2.9GN增菌液 
2.9.1用途：用于志賀氏菌的前增菌液
2.9.2成份（g/L）：
胰蛋白胨 20.0 g
葡萄糖 1.0 g
甘露醇 2.0 g
檸檬酸鈉 5.0 g
去氧膽酸鈉 0.5 g
磷酸氫二鉀 4.0 g
磷酸二氫鉀 1.5 g
氯化鈉 5.0 g
蒸餾水 1000ml
2.9.3制法:按上述成分配好，加熱使溶解，校正pH。分裝每瓶225 ml，115℃高壓滅菌15min。
2.9.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。
2.10亞硒酸鹽胱氨酸增菌液
2.10.1用途：用于沙門(mén)氏菌選擇性增菌培養。
2.10.2成份（g/L）：
蛋白胨 5.0
乳糖 4.0
磷酸氫二鈉 10.0
亞硒酸氫鈉 4.0
L-胱氨酸 0.1
PH7.0±0.1
2.10.3制法: 稱(chēng)取各成份溶于滅菌純水中，在無(wú)菌容器中溶解，分裝，每瓶100ml，備用。
2.10.4注意事項：于4℃冰箱中密封保存。

2.11 SS瓊脂
2.11.1用途：用于沙門(mén)氏菌、志賀氏菌的分離。 2.11.2成份（g/L）：
蛋白胨 5.0 牛肉粉 5.0
乳糖 10.0 三號膽鹽 3.5 
檸檬酸鐵 10.0 檸檬酸鈉 8.5 
中性紅 0.025 硫代硫酸鈉 8.5
瓊脂 15.0 煌綠 0.00033
PH7.0±0.1
2.11.3制法: 稱(chēng)取各成份溶于純水中，加熱煮沸溶解，冷至55℃，傾注平板備用。
2.11.4注意事項：A保存于陰涼干燥處，密封、避光。
B勿高壓滅菌。
2.12V-P半固體瓊脂
2.12.1用途：用于細菌檢驗的V-P試驗。
2.12.2成份（g/L）：
蛋白胨 12.0 
酵母膏 1.0 
葡萄糖 10.0
氯化鈉 5.0 
瓊脂 3.0 
PH7.3±0.1
2.12.3制法: 稱(chēng)取各成份于純水中，加熱煮沸至溶解，分裝試管，每管1～1.5ml，121℃10min高壓滅菌，立即取出冷卻備用。
2.12.4配制試劑：
甲液： α-萘酚 6.0g
無(wú)水乙醇溶液 100.0ml
乙液： 氫氧化鉀 40.0g
肌酸 0.3g
蒸餾水 100.0ml
先將氫氧化鉀溶于水中，再加入肌酸。
甲液和乙液保存于4℃冰箱內，可使用2個(gè)月。
2.12.5試驗方法：挑取瓊脂培養物接種V-P培養基中，于36±1℃培養24h±2h，將甲液0.2ml（約6滴）加入試管中，搖混均勻，再加入乙酸0.1ml（約3滴），再搖混均勻。
陽(yáng)性反應立即或15min內呈現紅色，陰性反應為銅色。陰性結果在1h后再做一次檢查。有些試管在數小時(shí)后紅色會(huì )逐漸消失，此仍作陽(yáng)性反應。
2.12.6注意事項：保存于陰涼干燥處，密封、避光。
2.13 7.5%氯化鈉肉湯
2.13.1用途：用于金黃色葡萄球菌的增菌培養。
2.13.2成份（g/L）： 蛋白胨 10.0 
牛肉粉 3.0 
氯化鈉 75.0 
PH7.4±0.1
2.13.3制法: 稱(chēng)取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝，每瓶50ml，121℃15min高壓滅菌備用。
5.2.13.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。
2.14 Baird-Parker培養基
2.14.1用途：用于食品中金黃色葡萄球菌的檢驗。
2.14.2成份（g/L）：
胰蛋白胨 10.0 丙酮酸鈉 10.0
牛肉膏 5.0 甘氨酸 12.0
酵母膏 1.0 氯化鋰(6H2O) 5.0 
瓊脂 20.0 PH7.4±0.1
2.14.3用法: 稱(chēng)取各成份于純水中，加熱煮沸至溶解，分裝每瓶95ml，121℃15min高壓滅菌，冷至50℃時(shí)，每95ml加入5ml亞碲酸鉀卵黃增菌液。
5.2.14.4注意事項：A保存于陰涼干燥處，密封、避光。
B平板冰箱貯存不超過(guò)48小時(shí)。
2.15酸性肉湯
2.15.1用途：用于酸性罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢驗。
2.15.2成份（g/L）：
多價(jià)蛋白胨 5.0
酵母粉 5.0 
葡萄糖 5.0
磷酸氫二鉀 4.0
PH5.0±0.2 
2.15.3制法: 稱(chēng)取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝，121℃20 min高壓滅菌備用。
2.15.4注意事項：保存于陰涼干燥處；密封、避光。
3生化試驗培養基和試劑
3.1尿素瓊脂基礎 
3.1.1用途：用于細菌檢驗中的尿素酶試驗。
3.1.2成份（g/L）：
蛋白胨 1.0
葡萄糖 1.0
氯化鈉 5.0
磷酸二氫鉀 2.0
酚紅 0.012
瓊脂 15.0
PH6.8±0.1
3.1.3制法: 稱(chēng)取各成份于純水中，加熱煮沸至完全溶解，121℃15min高壓滅菌，冷至55℃以無(wú)菌技術(shù)每95ml溶液加入40%尿素水溶液5ml，混勻后制成斜面備用。 3.1.4試驗方法：挑取瓊脂培養物接種，在36±1℃培養24h，觀(guān)察結果。尿素酶陽(yáng)性者出于產(chǎn)堿而使培養基變?yōu)榧t色。
3.1.5注意事項：保存于陰涼干燥處；密封、避光。
3.2賴(lài)氨酸脫羧酶培養基
3.2.1用途：用于細菌檢驗中的賴(lài)氨酸脫羧酶試驗。
3.2.2成份（g/L）：
酵母膏 3.0
葡萄糖 1.0
L-賴(lài)氨酸 5.0
溴甲酚紫 0.016
PH6.7±0.1
3.2.3制法: 稱(chēng)取各成份于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝試管，每管1-1.5ml，121℃15min高壓滅菌備用。 3.2.4試驗方法：從瓊脂斜面上挑取瓊脂培養物接種，在36±1℃培養18-24h，觀(guān)察結果。賴(lài)氨酸脫羧酶陽(yáng)性者出于產(chǎn)堿而使培養基變?yōu)樽仙�。陰性者無(wú)堿性產(chǎn)物，但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養基變黃色。對照管應為黃色。
3.2.5注意事項：保存于陰涼干燥處；密封、避光。
3.3吲哚培養基
3.3.1用途：用于細菌靛基質(zhì)試驗，亦稱(chēng)色氨酸肉湯。
3.3.2成份（g/L）：
蛋白胨 10.0
氯化鈉 5.0
DL-色氨酸 1.0
PH7.4±0.1
3.3.3用法: 稱(chēng)取各成份于純水中，加熱煮沸至完全溶解，121℃15min高壓滅菌備用。
3.3.4配制柯凡克試劑：對二甲氨基苯甲醛 10.0g
戊醇 150.0ml
濃鹽酸 50.0ml
將色澤鮮明干燥的對二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中，緩慢攪拌加入鹽酸，加熱至60℃，呈深黃色，靜置6-7h，變成黃色即可使用。試劑宜少量配制，不用時(shí)保存于4℃冰箱內。久存后試液變成褐色不可使用。
3.3.5試驗方法：挑取瓊脂培養物接種，在36±1℃培養24h，滴加柯凡克試劑0.1ml。陽(yáng)性反應出現紅色環(huán)；陰性反應為黃色環(huán)。
5.3.3.6注意事項：保存于陰涼干燥處；密封、避光。
3.4硝酸鹽氰化鉀培養基
3.4.1用途：用于細菌檢驗中的硝酸鹽還原試驗和氰化鉀試驗。 3.4.2成份（g/L）：
蛋白胨 10.0
氯化鈉 5.0
磷酸二氫鉀 0.225
磷酸氫二鈉 5.64
硝酸鉀（無(wú)亞硝酸鹽）1.0
5g/L氰化鉀溶液 10.0
PH6.8±0.1
3.4.3用法: 稱(chēng)取各成份于純水中，加熱煮沸至完全溶解，121℃15min高壓滅菌，每100ml無(wú)菌加入0.5%氰化鉀溶液1ml，分裝無(wú)菌試管備用；同時(shí)將不加氰化鉀的培養基作為對照培養基，分裝試管備用。
3.4.4試驗方法：挑取瓊脂培養物接種，先接種于吲哚培養基中，混勻，然后灼燒接種環(huán)，再沾取吲哚培養基少許接種于氰化鉀培養基中，于36±1℃培養24h，觀(guān)察培養液有無(wú)混濁，培養液出現混濁，即有細菌生長(cháng)，為陽(yáng)性反應（不抑制）；經(jīng)2天培養，細菌不生長(cháng)為陰性反應（抑制）。
3.4.5注意事項：保存于陰涼干燥處；密封、避光。
3.5生理鹽水
3.5.1用途：用于檢樣的溶解與稀釋。
3.5.2成份：（g/L）：
氯化鈉 8.5g
純水 1000.0ml
3.5.3制法：稱(chēng)取氯化鈉于純水中，至完全溶解，分裝，121℃高壓滅菌15min。
 

 

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