用于酵母繁殖和篩選的培養基

   
   用于酵母繁殖和篩選的培養基
　
 
注意：有關(guān)標記<!>符號的材料的恰如其分的操作見(jiàn)附錄12。
重要：在所有配方中使用蒸餾去離子水。除非另有說(shuō)明，培養基和溶液在15 psi(1.05kg／cm2)高壓下蒸汽滅菌15-20min。
 
完全基本培養基（CM）或合成完全培養基（SC）和營(yíng)養缺陷型培養基
為了確定菌株生長(cháng)的必需條件，采用相應的營(yíng)養缺陷型培養基是非常有用的。培養基補料的干粉是各自分開(kāi)保存的，可以方便地配制相應的營(yíng)養缺陷型培養基。CM(或SC)是含有所有生長(cháng)成分的培養基(也就是說(shuō)，沒(méi)有一種營(yíng)養成分缺陷)。
無(wú)氨基酸酵母氮源（市售的無(wú)氨基酸酵母氨源(YNB)分含硫酸胺和不含硫酸胺兩種。此配方所用YNB系含硫酸胺的。如果你手頭的YNB不含硫酸胺，則只加1.7g YNB，另加5g硫酸胺即可。）    6.7g
葡萄糖    20g
瓊脂粉    20g
營(yíng)養缺陷混合物    2g
H2O    to 1000 ml
 
營(yíng)養缺陷混合物(Drop-out Mix)
減去有關(guān)的補料，  混合適當的成分，在密封的容器中混合。來(lái)回倒置轉動(dòng)容器至少15 min；加入幾粒干凈的大理石，以助于固體的混合。
腺嘌呤(Adenine)    0.5g
丙氨酸(Alanine)    2.0g
精氨酸(ArSinine)    2.0g
天冬酰胺(Asparagine)    2.0g
天冬氨酸(AsPanic acid)    2.0g    
半胱氨酸(Cysteine)    2.0g
谷氨酰胺(Glatamine)    2.0g
谷氨酸(Glutsmic acid)    2.0g
甘氨酸(GIycine)    2.0g
組氨組(Histidine)    2.0g
肌醇(Inositol)    2.0g
異亮氨酸(Isoleucine)    2.0g
亮氨酸(Leudne)    10.0g
賴(lài)氨酸(Lysine)        2.0g
甲硫氨酸(Methionine)    2.0g
對氨基苯甲酸(para-Aminobenzoic acid)  0.2g
苯丙氨酸(Phenylalanine)    2.0g
脯氨酸(Proline)    2.0g
絲氨酸(Serine)    2.0g
蘇氨酸(Threonine)    2.0g
色氨酸(Tryptophan)    2.0g
酪氨酸(Tyrosine)    2.0g
尿嘧啶(Uracil)    2.0g
纈氨酸(Valine)    2.0g
摘錄于A(yíng)dams等人(1998)的資料。
 
    表A2.3  補加基本培養基的成分
成分
 貯存液濃度／(g／100ml)
 1L中所加貯存培養基的體積／ml
 培養基中最終濃度／(mg／L)
 涂布在乎板上所需貯存液的體積／ml
 
腺嘌呤硫酸鹽
 0.2a
 10
 20
 0.2
 
尿嘧啶
 0.2a
 10
 20
 0.2
 
L—色氨酸
 1
 2
 20
 0.1
 
l—組氨酸HCl
 1
 2
 20
 0.1
 
L—精氨酸LiCl
 1
 2
 20
 0.1
 
L—甲硫氨酸
 1
 2
 20
 0.1
 
L—酪氨酸
 0.2
 15
 30
 0.2
 
L—亮氨酸
 1
 10
 109
 0.1
 
L—異亮氨酸
 1
 3
 30
 0.1
 
L—賴(lài)氨酸HCl
 1
 3
 30
 0.1
 
L—苯丙氨酸
 1a
 5
 50
 0.1
 
L—谷氨酸
 1a
 10
 100
 0.2
 
L—天冬氨酸
 1a,b
 10
 100
 0.2
 
L—纈氨酸
 3
 5
 150
 0.1
 
L—蘇氨酸
 4a,b
 5
 200
 0.1
 
L—絲氨酸
 8
 5
 400
 0.1
 
注：a:室溫保存；b:培養基高壓滅菌后再加入。
 
補加的基本培養基(SMM)
SMM是加入各種生長(cháng)補料的合成葡萄糖基本培養基(SD)。這些溶液可長(cháng)期存放。某些溶液應在室溫保存以防發(fā)生沉淀，而其他的溶液可能需要冷凍。無(wú)論如何，應優(yōu)先選用氨基酸的鹽酸鹽。 
將適當體積的貯存液加到SD培養基的配料中以配制培養基，而后用蒸餾水調節終體積至1L。高壓滅菌后分別加蘇氨酸和天冬氨酸溶液。
通常方便的配制SMM培養基的替代辦法是，將少量補料涂布在SD平板的表面。補料液在平板上完全干燥后再接種酵母菌。
表A2-3給出了貯存液的濃度，配制1L培養基所需的貯存液的體積，涂在SD平板上所需貯存液的體積以及在SMM中每種成分的最終濃度。
合成的葡萄糖基本培養基（SD）
SD是含有鹽類(lèi)、微量元素、維生素、氮源(不含氨基酸的酵母氮堿)和葡萄糖的合成基本培養基。
不含氨基酸酵母氮源（見(jiàn)CM配方說(shuō)明）    6.7g
葡萄糖    20g
細菌培養用瓊脂    20g
加水    ~1000ml
用于酵母的X-gal指示平板
因為在SD培養基的正常酸性pH條件下，5—溴—4—氯—3—吲哚—p—D—半乳糖苷(X—gal<!>)對酵母菌不起作用，故使用中性pH的培養基。這種選擇完全是一種權宜之計。因為許多酵母菌株在中性pH時(shí)生長(cháng)不好。為配制每升X-gal指示平板，需制備下述溶液。
溶液I
10×磷酸緩沖液貯存液    100ml
1000×無(wú)機鹽貯存液(見(jiàn)下面配方)    1ml
drop-out混合物(見(jiàn)上述)    2g
如果培養基中含有葡萄糖，用蒸餾水調節體積至450ml；若培養基中含有半乳糖，用蒸餾水調節體積400 ml。
l0×磷酸緩沖液貯存液
KH2PO4(1 mol／L)    136.1 g
 (NH4)2SO4(0.15 mol幾)    19.8 g
KOH(0.75mol／L)(!)    42.1 g
加水至1 000ml
調pH值至7.0并高壓滅菌。
1000×無(wú)機鹽貯存液
FeCl3(2mmol／L)    32mg
MgSO4·7H2O(0.8 mol／L)    19.72g    
加水至100ml
高壓滅菌并貯存備用。這種溶液會(huì )出現細小的黃色沉淀，用前應重新懸浮。
 
溶液Ⅱ
在一個(gè)2L的燒瓶中混合：
細菌培養用瓊脂    20g
蒸餾去離子水    500ml
·溶液I和溶液Ⅱ分開(kāi)高壓。
·冷卻至65℃以下時(shí)將下述成分加到溶液I中：
    葡萄糖或其他糖類(lèi)加至終濃度為2％
    X-gal(20mg／ml，  用二甲基甲酰胺<!>溶解)  2ml
    100×維生素貯存液    10ml
.這時(shí)包含任何其他的熱敏感補料。
.將溶液I和溶液Ⅱ混合在一起，每個(gè)平板鋪30ml左右。
    100×維生素貯存液
    維生素B1(硫胺素)(0.04 mg／m1)    4 mg
    生物素(2／ug／ml)    0.2mg
    維生素B6(0.04 mg／ml)    4mg
    肌醇(0.2mg／ml)    20mg
    維生素B3(泛酸)(0.04mg／ml)    4mg
    H2O    100 ml
    用0.22／lm的濾器過(guò)濾除菌。
 
用于在濾膜上裂解酵母細胞的X-gal平板
這些平板是用來(lái)檢測在Whatman 3MM濾紙上裂解和固定的細胞中的β-半乳糖苷
酶的活性。
細菌培養用瓊脂    20g
1 mol／L Na2HPO4  57.7 ml
1 mol/L NaH2PO4 42.3 ml
MgSO4    0.25 g
H2O    900 ml
高壓滅菌后，加6ml X-gal溶液(20mg／ml，用二甲基甲酰胺配置)。
 
YPD(YEPD)培養基
YPD是用于酵母常規生長(cháng)的復合培養基。
酵母提取物    10g
蛋白胨    20 g
葡萄糖    20g
加水至    1000 ml
制備平板時(shí)，在高壓滅菌前加入20 g細菌培養用瓊脂(終濃度為2％)。
 

 

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