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一、培養基用途
用于生活飲用水及其水源水中糞大腸菌群測定。
二、試驗原理
胰蛋白胨、多價(jià)蛋白胨和酵母粉提供氮源、維生素和生長(cháng)因子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；乳糖為可發(fā)酵糖類(lèi)；3號膽鹽抑制革蘭氏陽(yáng)性菌；瓊脂是培養基的凝固劑；苯胺藍和玫紅酸為pH指示劑。
糞大腸菌群可在44.5℃條件下分解乳糖產(chǎn)酸，使培養基pH下降，菌落為亮藍色，其他不發(fā)酵乳糖的腸道菌菌落為無(wú)色、灰色或淡紅色。
三、培養基配方（g/L）
|
多價(jià)蛋白胨 |
5.0 |
|
胰蛋白胨 |
10.0 |
|
乳糖 |
12.5 |
|
酵母粉 |
3.0 |
|
三號膽鹽 |
1.5 |
|
氯化鈉 |
5.0 |
|
苯胺藍 |
0.2 |
|
瓊脂 |
15.0 |
|
玫紅酸 |
0.1 |
| pH值7.4±0.2 | 25℃ |
四、試驗方法
1.稱(chēng)取本品52.3g，加熱煮沸溶解于1000ml蒸餾水中，冷卻至45-50℃左右時(shí)，傾入無(wú)菌平皿，備用。無(wú)需高壓滅菌。
2.制備好的平板保存于2-8℃，應避免光線(xiàn)直接照射。干燥培養基應放置于陰暗干燥處，室溫保存。
3.使用前，把制備好的平板放置室溫10-20分鐘。
4.制備質(zhì)控菌液。選擇合適稀釋度的質(zhì)控菌液0.1ml，均勻涂布于待測平板以及參比平板上，每一稀釋度接種兩個(gè)平板。
5.用1μL接種環(huán)取非目標菌質(zhì)控菌液1環(huán)，將接種環(huán)接觸容器邊緣3次，去除多余液體，在平板表面劃六條平行直線(xiàn)，同時(shí)接種兩個(gè)平板。
6.44.5℃倒置培養基培養24±2小時(shí)，記錄實(shí)驗結果。
五、結果觀(guān)察與解釋
接種以下質(zhì)控菌株，44.5℃倒置培養基培養24±2小時(shí)：
|
質(zhì)控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
參比或計數培養基 |
方法 |
質(zhì)控評定標準 |
其他特征 |
|
大腸埃希氏菌 |
ATCC25922 |
20-200 |
TSA |
定量 |
PR≥0.7 |
藍色菌落 |
|
鼠傷寒沙門(mén)氏菌 |
ATCC14028 |
20-200 |
PR≥0.7 |
無(wú)色菌落 |
||
|
福氏志賀氏菌 |
ATCC12022 |
20-200 |
PR≥0.7 |
無(wú)色菌落 |
||
|
產(chǎn)氣腸桿菌 |
ATCC13048 |
20-200 |
PR≥0.7 |
灰色菌落 |
||
|
金黃色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
MFC瓊脂微生物質(zhì)控結果：
 |
|
|
|
 |
|
大腸埃希氏菌 藍色菌落 |
|
|
|
鼠傷寒沙門(mén)氏菌 無(wú)色菌落 |
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|
|
|
|
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|
 |
|
福氏志賀氏菌 無(wú)色菌落 |
|
|
|
產(chǎn)氣腸桿菌 灰色菌落 |
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金黃色葡萄球菌 抑制 |
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六、注意事項
本培養基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。
注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。
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