抗生素檢定培養基I號（低pH）實(shí)驗及注意事項

一、用途

 本產(chǎn)品符合中國藥典標準，用于磺芐青霉素效價(jià)測定。

二、檢驗原理

 本法是利用抗生素在瓊脂培養基內的擴散作用，抑菌圈直徑與抗生素的濃度或活性相關(guān)；比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測定供試品效價(jià)的一種方法。

三、培養基配方（g/L）

此配方可以進(jìn)行改良或增加營(yíng)養成分以獲得最佳的結果

四、操作步驟

 1、稱(chēng)取本品26.0g，加熱攪拌溶解于1000ml純化水中，116℃高壓滅菌20分鐘，備用；

 2、菌懸液的制備。枯草芽孢桿菌（CMCC(B)63501）：取枯草芽孢桿菌（CMCC(B)63501）的營(yíng)養瓊脂斜面培養物，接種于盛有營(yíng)養瓊脂培養基的培養瓶中，在35-37℃培養7日，用革蘭氏染色法涂片鏡檢，應有芽孢85%以上。用滅菌水將芽孢洗下，在65℃加熱30分鐘，備用；

 3、取平板分別注入加熱融化的培養基20ml，放置水平臺面上使凝固，作為底層。另取培養基適量培養基，放冷至48-50℃加入規定的試驗菌懸液適量，搖勻。在平板中分別加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層，放置在水平臺上冷卻凝固。

 4、在平板中放置牛津杯。用無(wú)菌鑷子夾住HB四連式牛津杯正面的凸點(diǎn)，將其放置在菌層培養基表面上，如圖1；將壓杯板蓋上，壓住牛津杯5秒左右，使4個(gè)小杯與培養基表面緊密接觸，防止出現縫隙導致漏液，然后小心拿走壓杯板。如圖2。

圖1	圖2

 5、在每一平板中小管中分別滴加標準品溶液，如圖3；轉移至培養箱35-37℃培養14-16小時(shí)，記錄實(shí)驗結果。如圖4。

圖3	圖4

五、微生物試驗

 接種以下質(zhì)控菌株，在36±1℃培養14-16小時(shí)：

  抗生素檢定培養基I號（低pH）質(zhì)控結果：

六、注意事項

 1、注入培養基總量不大于20ml，否則放置牛津杯后平皿蓋無(wú)法蓋緊。

 2、菌量濃度適宜，若菌量濃度過(guò)小，則菌層生長(cháng)弱做不出抑菌圈。

 3、菌層培養基表面一定要平整，否則會(huì )導致牛津杯漏液。

 4、HB四連式牛津杯中央有凸點(diǎn)且平衡翼上標有“海博生物”字體的為產(chǎn)品正面。

 5、壓杯板已經(jīng)輻照滅菌，可以直接使用；多次使用，可用酒精棉擦拭即可。

 6、將平皿轉移至培養箱培養過(guò)程中輕拿輕放，避免劇烈震動(dòng)，不要堆置培養，以免影響實(shí)驗效果。

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 注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。

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