普通變形桿菌和奇異變形桿菌的檢驗

一、參考標準

  《SN/T 2552.8-2010 乳及乳制品衛生微生物學(xué)檢驗方法 第8部分：普通變形桿菌和奇異變形桿菌檢驗》

二、生物學(xué)特性

  變形桿菌為能活潑運動(dòng)而又極為多形性的一群腸道菌，有球形和絲狀形，具有鞭毛、無(wú)莢膜、無(wú)芽胞、革蘭氏陰性，運動(dòng)活潑。在固體培養基上呈擴散生長(cháng)，形成遷徙生長(cháng)現象。

三、檢驗程序

圖1 普通變形桿菌和奇異變形桿菌檢驗程序

四、檢驗方法和結果

  1、選擇性增菌

  普通變形桿菌和奇異變形桿菌在GN增菌液中36℃±1℃培養18-24h后生長(cháng)渾濁，如圖2所示：

a:空白對照；b:普通變形桿菌；c:奇異變形桿菌

圖2 GN增菌液的培養結果

  2、初步生化鑒定

  ①SS瓊脂試驗

  取增菌液1環(huán)，劃線(xiàn)接種于SS平板上，于36℃±1℃培養18-24h，普通變形桿菌和奇異變形桿菌在SS平板上的典型菌落為：1mm-2mm大小、無(wú)色半透明或有黑色中心，邊緣整齊，表面光滑的圓形菌落，如下圖所示：

a:奇異變形桿菌	b:普通變形桿菌

  ②克氏雙糖培養基試驗

  挑取SS平板上的可疑菌落，穿刺接種混合克氏雙糖鐵斜面，接種時(shí)先在斜面劃線(xiàn)，然后再穿刺到底層放入培養箱36℃±1℃培養18-24h，普通變形桿菌和奇異變形桿菌的試驗現象為：斜面紅/底層黃（部分區域黑色），發(fā)酵葡萄糖但不發(fā)酵乳糖同時(shí)產(chǎn)生硫化氫和產(chǎn)氣，如圖3所示。

  注意：能產(chǎn)生硫化氫的菌應及時(shí)觀(guān)察試驗結果，以免生成的硫化鐵形成黑色區域，遮蓋斜面與底層的顏色影響判斷結果。

a:空白對照；b:普通變形桿菌；c:奇異變形桿菌

圖3 克氏雙糖的培養結果

  ③尿素瓊脂試驗

  挑取SS平板上的可疑菌落，穿刺接種尿素瓊脂斜面，接種時(shí)先在斜面劃線(xiàn)，然后再穿刺到底層放入培養箱36℃±1℃培養18-24h，普通變形桿菌和奇異變形桿菌的試驗現象為尿素培養基變玫紅，如圖4所示：

空白對照；b:普通變形桿菌；c:奇異變形桿菌

圖4 尿素培養基的培養結果

  ④苯丙氨酸脫氨酶培養基試驗

  挑取SS平板上的可疑菌落，接種在苯丙氨酸脫氨酶培養基斜面劃線(xiàn)，然后放入培養箱36℃±1℃培養18-24h，培養結束后滴加4-5滴苯丙氨酸指示劑，使其覆蓋培養基表面，1min-5min呈現綠色則為陽(yáng)性，如圖5所示：

a:空白對照；b:普通變形桿菌；c:奇異變形桿菌

圖5 苯丙氨酸脫氨酶培養基的培養結果

  3、進(jìn)一步的生化鑒定

  符合上一步要求的可疑菌落需進(jìn)一步進(jìn)行其他生化試驗。

  ①靛基質(zhì)試驗

  將菌接種于胰蛋白水培養基中，放入培養箱36℃±1℃培養18-24h，滴加Kovacs氏靛基質(zhì)試劑，立即觀(guān)察反應結果。普通變形桿菌為玫紅色環(huán)，為陽(yáng)性；奇異變形桿菌為黃色環(huán)，為陰性，如圖6所示：

a:空白對照；b:奇異變形桿菌；c:普通變形桿菌；

圖6 靛基質(zhì)的培養結果

  ②鳥(niǎo)氨酸脫羧酶試驗

  將菌接種于鳥(niǎo)氨酸脫羧酶生化管中，加無(wú)菌液體石蠟覆蓋培養基液體表面，放入培養箱36℃±1℃培養18-24h，接種普通變形桿菌的培養基呈陰性，培養基變黃；接種奇異變形桿菌的培養基呈陽(yáng)性，培養基為紫色，如圖7所示：

a:空白對照；b:奇異變形桿菌；c:普通變形桿菌

圖7 鳥(niǎo)氨酸脫羧酶的培養結果

  ③甘露醇試驗

  將菌接種于鳥(niǎo)氨酸脫羧酶生化管中，放入培養箱36℃±1℃培養18-24h，接種奇異變形桿菌和普通變形桿菌的培養基都呈陰性，培養基顏色為藍色或藍綠色，如圖8所示：

a:空白對照；b:奇異變形桿菌；c:普通變形桿菌

圖8 甘露醇的培養結果

  ④氧化酶試驗

  變形桿菌氧化酶試驗不變色，為陰性，銅綠假單胞菌為陽(yáng)性變藍，如圖9所示：

a:銅綠假單胞菌10104；b:奇異變形桿菌

圖9 鳥(niǎo)氨酸脫羧酶的培養結果

  注：普通變形桿菌和奇異變形桿菌生化鑒定表如下：

  注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。

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