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一、實(shí)驗目的
為了準確評價(jià)消毒劑對微生物的滅殺作用，消毒劑試驗中要求選擇適當中和劑，所選中和劑不僅能及時(shí)中止消毒劑的殺微生物作用，且中和劑本身及其與消毒劑的反應產(chǎn)物（以下稱(chēng)中和產(chǎn)物）尚需對微生物無(wú)抑制或滅殺作用，對培養基無(wú)不良影響。
二、實(shí)驗方法
1、用接種環(huán)挑取指示菌接入PBS中制成適量濃度的菌懸液；
2、將消毒液用滅菌蒸餾水配制成3種不同濃度，在不加中和劑的情況下，測知消毒劑10min抑殺指示菌的最低有效濃度；
3、取消毒劑10min抑殺指示菌的最低有效濃度與待選擇中和劑進(jìn)行試驗，選出中和劑種類(lèi)并依據等當量中和原則，調整中和劑濃度，選出試驗濃度的消毒劑使用中和劑的濃度；
4、在進(jìn)行中和劑選擇試驗時(shí)，先將消毒劑1ml與中和劑溶液9ml混合，制成中和產(chǎn)物溶液。
加入消毒劑混勻前
左：復方中和劑 右：生理鹽水
加入消毒劑混勻后
左：中和產(chǎn)物 右：生理鹽水
5、現以復方中和劑為例，按照下表所示進(jìn)行試驗：
|
組號 |
0.5ml菌液加于 |
混勻作用10min |
取0.5ml混勻液加入 （加入后總量為5ml） |
作用10min后 取原液或者稀釋液0.5ml接種平板（2個(gè)/樣本） |
|
1 |
消毒液4.5ml |
PBS 4.5ml |
原液*10 |
|
|
2 |
消毒液4.5ml |
中和劑4.5ml |
原液*10 |
|
|
3 |
中和產(chǎn)物4.5ml |
PBS 4.5ml |
*100，*1000 |
|
|
4 |
PBS 4.5ml |
PBS 4.5ml |
*100，*1000 |
|
|
5 |
中和劑4.5ml |
PBS 4.5ml |
*100，*1000 |
|
|
6 |
|
|
PBS 5.0ml |
原液 |
混勻作用前
1：消毒液4.5ml 2：消毒液4.5ml 3：中和產(chǎn)物4.5ml 4：PBS 4.5ml 5：中和劑4.5ml
混勻作用后
1：PBS 4.5ml 2：中和劑4.5ml 3：PBS 4.5ml 4：PBS 4.5ml 5：PBS 4.5ml 6：PBS 5.0ml
6、中和實(shí)驗結果舉例（以復方中和劑為例）：
|
中和劑 |
各組回收菌落數（cfu/ml） |
3、4、5組間誤差率（%） |
|||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
||
|
復方中和劑 |
0 |
708 |
4.67*106 |
4.83*106 |
4.11*106 |
0 |
6.27 |
三、實(shí)驗結論及判定標準
1、根據數據顯示，3、4、5組菌數相似，其誤差率小于等于10%。
2、6組無(wú)菌生長(cháng)。
3、1組不長(cháng)菌或者明顯少于2組。
符合上述標準的中和劑表明可消除消毒劑對指示菌的作用，中和劑及其與消毒劑中和產(chǎn)物對指示菌無(wú)毒害，判定為該消毒劑的中和劑。
四、補充實(shí)驗
使用中消毒液染菌量檢查方法：
1、用移液槍按照無(wú)菌操作方法吸取1ml被檢消毒液，加入9ml中和劑混勻；
2、按照無(wú)菌操作使用移液槍吸取中和產(chǎn)物1ml接種平皿，將冷至40℃-45℃的熔化營(yíng)養瓊脂培養基每皿傾注15ml-20ml，36℃恒溫箱培養72h，計數菌落。
消毒液染菌量（CFU/ml）=平均每皿菌落數*10*稀釋倍數
注意事項：醇類(lèi)與酚類(lèi)消毒劑用普通營(yíng)養肉湯中和，含氯消毒劑、含碘消毒劑和過(guò)氧化物消毒劑用含0.1%硫代硫酸鈉中和劑，洗必泰、季銨鹽類(lèi)消毒劑用含0.3%吐溫80和0.3%卵磷脂中和劑，醛類(lèi)消毒劑用含0.3%甘氨酸中和劑，含有表面活性劑的各種復方消毒劑可以在中和劑中加入吐溫80至3%。
注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。
