小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗方法及結果分析

一、簡(jiǎn)介

  小腸結腸炎耶爾森氏菌（Yersinia enterocolitica），簡(jiǎn)稱(chēng)小腸耶爾森氏菌，是革蘭氏陰性桿菌或球桿菌，大小為1-3.5×0.5-1.3μm，多單個(gè)散在，有時(shí)排列成短鏈或成堆。本菌不形成芽胞，無(wú)莢膜，有周鞭毛；但其鞭毛在30℃以下培養條件形成，溫度較高時(shí)即喪失，因此表現為30℃以下有動(dòng)力，而35℃以上則無(wú)動(dòng)力。該菌是能在冷藏溫度下生長(cháng)的少數幾種腸道致病菌之一，在4℃條件下能保存和繁殖。小腸耶爾森氏菌在自然界分布很廣。

二、參考標準

  《GB 4789.8-2016 食品安全國家標準 小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗》

三、檢驗方法以及結果分析

  1.分離

  將樣品進(jìn)行梯度稀釋后，選擇合適的稀釋度涂布CIN-1瓊脂平板和改良Y 瓊脂平板，26℃±1℃培養48h±2h。

  小腸耶爾森氏菌典型菌落在CIN-1上為深紅色中心，周?chē)�具有無(wú)色透明圈(紅色牛眼狀菌落)，菌落大小為1mm～2mm，在改良Y瓊脂平板上為無(wú)色透明、不黏稠的菌落。如圖1所示：

A：CIN-1瓊脂平板；B：改良Y瓊脂平板

圖1 

  2.改良克氏雙糖試驗

  分別挑取CIN-1瓊脂平板和改良Y瓊脂平板的可疑菌落3個(gè)～5個(gè)，分別接種于改良克氏雙糖鐵瓊脂，接種時(shí)先在斜面劃線(xiàn)，再于底層穿刺，26℃±1℃培養24h，將斜面和底部皆變黃且不產(chǎn)氣的培養物做進(jìn)一步的生化鑒定。如圖2所示：

小腸耶爾森氏菌改良克氏雙糖試驗結果

圖2 

  3.尿素酶試驗和動(dòng)力觀(guān)察

  用接種環(huán)挑取可疑培養物，接種到尿素培養基中，26℃±1℃培養2h～4h。將尿素酶試驗陽(yáng)性菌落分別接種于兩管半固體培養基中，于26℃±1℃和36℃±1℃培養24h。將在26℃有動(dòng)力而36℃無(wú)動(dòng)力的可疑菌培養物劃線(xiàn)接種營(yíng)養瓊脂平板，進(jìn)行純化培養，用純化物進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢和生化試驗。

  小腸耶爾森氏菌尿素酶試驗陽(yáng)性，培養基變?yōu)槊导t色，如圖3所示：

左：空白對照；右：小腸耶爾森氏菌

圖3

  小腸耶爾森氏菌穿刺接種于半固體瓊脂中，在26℃培養有動(dòng)力而在36℃培養無(wú)動(dòng)力，如圖4所示：

A：空白對照；B：小腸耶爾森氏菌

圖4

  4.生化鑒定

  從營(yíng)養瓊脂平板上挑取單個(gè)菌落接種生化反應管，生化反應在26℃±1℃進(jìn)行。小腸耶爾森氏氏菌的主要生化特征以及與其他相似菌的區別見(jiàn)表1。

表1 小腸耶爾森氏氏菌與其他相似菌的生化性狀鑒別表

  使用海博生化管進(jìn)行生化鑒定，小腸耶爾森氏菌生化反應結果為鳥(niǎo)氨酸脫羧酶陽(yáng)性、蔗糖陽(yáng)性、棉子糖陰性、山梨醇陽(yáng)性、甘露醇陽(yáng)性、鼠李糖陰性和V-P試驗陽(yáng)性（26℃）。如圖5所示：

A：空白對照；B：小腸耶爾森氏菌

圖5

  注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。

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