甲苯胺藍-DNA酶瓊脂的簡(jiǎn)單介紹

一、培養基用途

 用于金黃色葡萄球菌耐熱核酸酶的檢測。金黃色葡萄球菌是引起人、畜患病的常見(jiàn)的病原體之一，同時(shí)也是食品等檢驗標準的重要監測病原體之一。而耐熱核酸酶是產(chǎn)腸毒素金黃色葡萄球菌生長(cháng)的一個(gè)典型特征，是檢測金黃色葡萄球菌污染的標志特征之一。

二、培養基成分及使用方法

 1、培養基成分

 2.使用方法

 稱(chēng)取本品27.58g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，煮沸溶解后冷卻至合適溫度，傾入無(wú)菌平板。

三、實(shí)驗原理

 產(chǎn)腸毒素的金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生胞外熱穩定DNA酶，在沸水中水浴15min后仍可保持活性，水解DNA長(cháng)鏈形成數個(gè)單核苷酸組成的寡核苷酸鏈，使甲苯胺藍由藍色變成粉紅色；氯化鈣提供陽(yáng)離子作為激活劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓；三羥甲基氨基甲烷為緩沖劑；瓊脂為培養基的凝固劑。

四、實(shí)驗方法及結果

 1、按使用方法制備培養基，在瓊脂上打成直徑2mm的小孔，抽出小孔中的瓊脂。

 2、每個(gè)小孔加入約0.01ml水浴處理（在水浴中煮沸15min）后的可疑菌的肉湯培養物。

 3、將平板正置于培養箱中，36℃±0.1培養4小時(shí)。陽(yáng)性反應為在小孔周?chē)�形成至少擴展約1mm的粉紅色的暈圈。

 4、金黃色葡萄球菌有粉紅色暈圈，如圖1-a、1-b所示；大腸埃希氏菌無(wú)粉紅色暈圈，如圖1-c所示。

a:金黃色葡萄球菌ATCC6538，b:金黃色葡萄球菌ATCC25923，c:大腸埃希氏菌ATCC25922 圖1 甲苯胺藍-DNA瓊脂的微生物結果

五、注意事項

 1、配置培養基時(shí)，如不能立即使用可分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，滅菌后的培養基可于室溫存放4個(gè)月無(wú)變化。使用時(shí)加熱融化傾注平板，此培養基經(jīng)數次融化后仍可使用。

 2、每個(gè)平板打孔數量可根據實(shí)際情況增減，但需預留出暈圈范圍，以防打孔位置過(guò)近影響陰陽(yáng)性判斷。 

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