實(shí)驗室常用滅菌方式介紹及應用

一、干熱滅菌

  常用于耐熱器皿的滅菌，如移液管、玻璃平皿、玻璃試管或金屬器皿等，可在170℃滅菌2-4h或200℃滅菌0.5-1h。接種環(huán)、接種針、涂布棒等實(shí)驗器材可在酒精燈上直接進(jìn)行灼燒滅菌。

  滅菌效果：滅菌效果強，可殺滅包括芽孢在內的所有微生物。

  注意事項：

  1.干熱滅菌過(guò)程的熱穿透效果差且比較慢，因此在烘箱內進(jìn)行干熱滅菌時(shí)，不可擺放過(guò)滿(mǎn)；

  2.塑料、橡膠等不耐熱材質(zhì)不可采用此方法滅菌；

  3.紙張、棉花滅菌溫度不能超過(guò)170℃；制備好的培養基不可采用此方法滅菌。

二、高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）

  常用于實(shí)驗室多數培養基滅菌，也可用于玻璃器皿、金屬器皿的滅菌。一般采用121℃高壓滅菌15-20min或116℃高壓滅菌30min，根據培養基不同可對滅菌參數進(jìn)行調整。

  滅菌效果：可殺滅包括芽孢在內的所有微生物。

  注意事項：

  1.滅菌鍋效力不達標、滅菌過(guò)程冷空氣未排凈、培養基本身含芽孢過(guò)多、滅菌方式不正確、滅菌鍋內物品擺放過(guò)滿(mǎn)都有可能導致滅菌失��；

  2.在進(jìn)行容器滅菌時(shí)，容器不可密封，需與滅菌鍋內空氣流通。

三、水浴/加熱/流動(dòng)蒸汽滅菌

  常用于含不耐熱成分的培養基滅菌，如XLD瓊脂、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液、亞硫酸鉍瓊脂等。采用流動(dòng)蒸汽方式滅菌的培養基，如沒(méi)有相應的流動(dòng)蒸汽滅菌設備，可采用水浴加熱方式或“蒸”的方式滅菌。

  滅菌效果：可殺滅微生物繁殖體，不能殺滅芽孢體，采用此類(lèi)方式滅菌的培養基通常具有強抑菌性，或要求短時(shí)間內使用。

  注意事項：

  1.不同培養基成分耐熱性有差別，加熱時(shí)應當注意，如含亞硒酸鹽的培養基（SC、SBG等）加熱至90℃左右即可，加熱過(guò)度會(huì )使亞硒酸氫鈉分解，培養基變紅，含瓊脂的培養基可加熱煮沸4-6次或沸水浴20-30min使瓊脂完全溶解即可；

  2.采用加熱滅菌方式的培養基，通常含有不穩定成分，建議現配現用或按標準規定的期限使用，如不立即使用，可置于低溫或陰涼（2-8℃或10-20℃）處避光保存。

四、過(guò)濾除菌

  常用于抗生素或含不耐熱成分培養基的滅菌，一般使用0.22μm孔徑的微孔濾膜或濾芯進(jìn)行過(guò)濾除菌。實(shí)驗室制取無(wú)菌空氣也可采用此方法，使用特殊濾芯或濾網(wǎng)對空氣進(jìn)行過(guò)濾除菌。

  滅菌效果：可除去普通細菌、真菌及芽孢體，但不能除去支原體、病毒等體積微小生物。

  注意事項：

  1.使用前通常需按照說(shuō)明書(shū)使濾膜或濾芯浸濕；

  2.注意過(guò)濾速度和體積，需嚴格按照過(guò)濾器或濾膜說(shuō)明使用，速度過(guò)快或過(guò)濾體積超標都有可能導致濾膜破損，除菌失��；

  3.黏度較大或有沉淀的培養基不適合用此方式除菌。

五、輻照滅菌

  微波、紫外線(xiàn)、X射線(xiàn)和γ射線(xiàn)等均可用于滅菌。γ射線(xiàn)穿透力強，滅菌效果好，被廣泛應用于食品、藥品行業(yè)產(chǎn)品滅菌，也常用于微生物培養基、實(shí)驗器材滅菌。一些特殊培養基或添加劑成分因不適合高溫蒸汽滅菌、過(guò)濾除菌等方法，可采用γ射線(xiàn)輻照滅菌。紫外線(xiàn)殺菌效果較弱，幾乎沒(méi)有穿透力，通常僅用于實(shí)驗室空氣或物體表面殺菌。

  滅菌效果：γ射線(xiàn)滅菌效果好，穿透力強，可殺死包括芽孢體在內的所有微生物。

  注意事項：

  1.并非所有培養基都可以采用γ射線(xiàn)輻照滅菌方式，一些染料或不穩定成分經(jīng)輻照后會(huì )發(fā)生變化；

  2.γ射線(xiàn)會(huì )對瓊脂造成一定程度破壞，因此在進(jìn)行固體培養基滅菌時(shí)，需對輻照劑量和瓊脂添加量進(jìn)行適當調整；

  3.玻璃制品、金屬制品一般不可采用此方法滅菌。

六、化學(xué)試劑滅菌

  常用環(huán)氧乙烷滅菌，以及各類(lèi)消毒劑浸泡滅菌。環(huán)氧乙烷曾廣泛用于平皿、一次性醫療產(chǎn)品的滅菌，但由于對環(huán)境污染較大，滅過(guò)菌的產(chǎn)品需長(cháng)時(shí)間放置使環(huán)氧乙烷消散，現已逐步被其他滅菌方式取代。

  滅菌效果：不同消毒劑殺滅效果存在差異，大致上可分為低效消毒劑、中效消毒劑和高效消毒劑。環(huán)氧乙烷屬于高效消毒劑，可殺滅包含芽孢在內的所有微生物。

  注意事項：

  1.此類(lèi)滅菌方式通常會(huì )有殘留，且對環(huán)境有污染，因此一般不適合用于直接進(jìn)行微生物培養相關(guān)器皿滅菌；

  2.殺菌能力越強的消毒劑，刺激性、腐蝕性、毒性往往越大，使用時(shí)需注意防護。

  注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。                                                 

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