金黃色葡萄球菌定性檢驗的簡(jiǎn)單介紹

一、操作步驟及結果判斷

  1.1樣品的處理

  稱(chēng)�。ɑ蛄咳。�25g（25mL）樣品至225mL7.5%氯化鈉肉湯中，固體置于無(wú)菌均質(zhì)袋中，液體置于無(wú)菌錐形瓶中，均質(zhì)或振蕩混勻。

  1.2增菌

  將上述勻液置于36℃± 1℃培養18-24h，金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈渾濁生長(cháng)。如圖1-2a、1-2b所示

圖1-2  7.5%氯化鈉肉湯結果

a：金黃色葡萄球菌（ATCC25923），b：金黃色葡萄球菌（ATCC6538），c：大腸埃希氏菌，d：空白對照

  1.3分離及初步鑒定

  將增菌后的培養物，分別劃線(xiàn)接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃± 1℃培養18-24h，Baird-Parker平板36℃± 1℃培養24-48h。

  1.3.1金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上的菌落特征

  表面光滑、凸起、濕潤、菌落直徑為2mm-3mm，顏色呈灰黑色至黑色，有光澤，常有淺色（非白色）邊緣，周?chē)�繞以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰帶，用接種針觸及菌落時(shí)有黃油樣黏稠感，見(jiàn)圖1-3-1e、1-3-1f。有時(shí)可見(jiàn)到不分解脂肪的菌株，除沒(méi)有不透明圈和清晰帶外，其他外觀(guān)基本相同。從長(cháng)期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落，其灰色常較典型菌落淺些。且外觀(guān)可能較粗糙，質(zhì)地較干燥。

圖1-3-1 Baird-Parker平板微生物結果

a:大腸埃希氏菌，b:奇異變形桿菌，c:枯草芽孢桿菌，

d:表皮葡萄球菌，e:金黃色葡萄球菌（ATCC25923），f:金黃色葡萄球菌（ATCC6538）

  1.3.2金黃色葡萄球菌在血平板上的菌落特征

  菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色（有時(shí)為白色），菌落周?chē)�可�?jiàn)完全透明溶血圈，見(jiàn)圖1-3-2b

圖1-3-2血平板微生物結果

a:蠟樣芽孢桿菌，b:金黃色葡萄球菌，c:乙型溶血性鏈球菌

  1.4確證鑒定

  1.4.1染色鏡檢

  金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性球菌，排列成葡萄球狀，無(wú)芽孢，無(wú)莢膜，直徑約為0.5-1μm ，革蘭氏染色結果如圖1-4-1所示。

圖1-4-1金黃色葡萄球菌（ATCC6538）革蘭氏染色結果

  1.4.2血漿凝固酶試驗

  挑取Baird-Parker平板和血平板上至少5個(gè)可疑菌落（小于5個(gè)全選），分別接種到5mLBHI和營(yíng)養瓊脂小斜面，36℃± 1℃培養18-24h。

  取新鮮配置兔血漿0.5mL，放入小試管中再加入BHI培養物0.2mL-0.3mL，振蕩搖勻，置于36℃± 1℃溫箱或水浴箱內，每半小時(shí)觀(guān)察一次，觀(guān)察6h，如果凝固（即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，被判為陽(yáng)性結果，見(jiàn)圖1-4-2。同時(shí)以血漿凝固酶試驗陽(yáng)性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養物作為對照。如結果可疑，挑取斜面上的菌落到5mLBHI，36℃± 1℃培養18-48h，重復試驗。

1-4-2血漿凝固酶試驗結果

a:空白對照，b:金黃色葡萄球菌（ATCC6538），c:金黃色葡萄球菌（ATCC25923）

二、培養基使用及注意事項

  2.1 7.5%氯化鈉肉湯培養基

  7.5%氯化鈉肉湯培養基含較高含量的氯化鈉，提供較高的滲透壓，抑制大多數非葡萄球菌的生長(cháng)。

  2.2 Baird-Parker瓊脂培養基

  含有卵磷脂酶的葡萄球菌降解卵黃使菌落產(chǎn)生透明圈，而脂酶作用則產(chǎn)生不透明的沉淀環(huán)；凝固酶陽(yáng)性的葡萄球菌還能還原亞碲酸鉀而產(chǎn)生黑色菌落。加入亞碲酸鉀卵黃添加劑時(shí)，培養基溫度溫度不應過(guò)高，需冷卻至50℃左右。

  金黃色葡萄球菌的典型菌落狀態(tài)為有沉淀環(huán)和透明圈，但有時(shí)可見(jiàn)到不分解脂肪的菌株，無(wú)沉淀環(huán)和透明圈，從長(cháng)期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落其灰色常較典型菌落淺些，且外觀(guān)可能較粗糙，質(zhì)地較干燥。所以Baird-Parker平板上生長(cháng)的菌落大多可視為可疑菌落，需進(jìn)行進(jìn)一步鑒定。

  2.3 血平板培養基

  金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生溶血素，使菌落周?chē)�產(chǎn)生完全透明溶血環(huán)。

  注：本文以GB 4789.10-2016食品安全國家標準為依據。

  注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。

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