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一、引言
單核細胞增生李斯特氏菌是一種人畜共患病的病原菌，李斯特氏菌中毒嚴重的可引起血液和腦組織感染，感染后主要表現為敗血癥、腦膜炎和單核細胞增多。它廣泛存在于自然界中，食品中存在的單增李氏菌對人類(lèi)的安全不利，該菌在4℃的環(huán)境中仍可生長(cháng)繁殖，是冷藏食品威脅人類(lèi)健康的主要病原菌之一，因此，在食品衛生微生物檢驗中，必須加以重視。目前，很多國家已經(jīng)采取措施來(lái)控制食品中的李斯特氏菌，并制定了相應的標準。2001年11月以來(lái)，中國質(zhì)檢部門(mén)多次從美國、加拿大、法國、愛(ài)爾蘭、比利時(shí)、丹麥等二十多家肉類(lèi)加工廠(chǎng)進(jìn)口的豬腰、豬肚、豬耳、小排等三十多批近千噸豬副產(chǎn)品中檢出單增李斯特氏菌。
二、單增李斯特氏菌簡(jiǎn)介
單增李斯特氏菌為革蘭氏陽(yáng)性短桿菌，大小約為0.5μmх1.0-2.0μm，直或稍彎，兩端鈍圓，常呈V字型排列，偶有球狀、雙球狀，兼性厭氧、無(wú)芽孢，一般不形成莢膜，但在營(yíng)養豐富的環(huán)境中可形成莢膜，在陳舊培養基中的菌體可呈絲狀，該菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脫落。
該菌的生長(cháng)范圍為2-42℃（也有報道在0℃能緩慢生長(cháng)），最適培養溫度為35-37℃，在pH中性至弱堿性（pH9.6）的條件下生長(cháng)良好。在固體培養基上，菌落初始很小，透明，邊緣整齊，呈露滴狀，但隨著(zhù)菌落的增大，變得不透明。在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，接種血平板培養后可產(chǎn)生窄小的β-溶血環(huán)。在0.6%酵母浸膏胰酪大豆瓊脂(TSA-YE)上，用450角入射光照射菌落，菌落呈藍色、灰色或蘭灰色。
三、單增李斯特氏菌的控制
該菌對理化因素抵抗力較強，在土壤、糞便、青儲飼料和干草內能長(cháng)期存活，對堿和鹽抵抗力強，60-70℃經(jīng)5-20min可殺死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氫氧化鈉、2.5%福爾馬林20min 可殺死此菌。該菌對青霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素、磺胺均敏感。
單增李斯特氏菌在一般熱加工處理中能存活，熱處理已殺滅了競爭性細菌群，使單增李斯特氏菌在沒(méi)有競爭的環(huán)境條件下更易于存活，所以在食品加工中，中心溫度必須達到70℃持續2分鐘以上。單增李斯特氏菌在自然界中廣泛存在，所以即使產(chǎn)品已經(jīng)過(guò)熱加工處理充分滅活了單增李斯特氏菌，但有可能造成產(chǎn)品的二次污染，因此蒸煮后防止二次污染是極為重要的。由于單增李斯特氏菌在4℃下仍然能生長(cháng)繁殖，所以未加熱的冰箱食品增加了食物中毒的危險，冰箱冷藏的食品需加熱后再食用。
四、單增李斯特氏菌檢測用的PALCAM瓊脂
GB4789.30-2016食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗 中PALCAM瓊脂為必選的選擇性分離培養基，選擇性強，可抑制革蘭氏陰性菌和糞腸球菌。
有關(guān)該培養基的成分及使用方法，請參考：點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情
有關(guān)該培養基的原理和使用注意事項，請參考：點(diǎn)擊查看相關(guān)文章
五、全面試驗情況
為了進(jìn)一步驗證該培養基的有效性，自本實(shí)驗室中選取7株單增李斯特氏菌在TSB肉湯中活化后接種于PALCAM瓊脂平板，36℃±1℃培養24h-48h觀(guān)察不同單增李斯特氏菌的菌落形態(tài)是否典型。
具體選取的單增李斯特氏菌菌株如下：
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菌株編號 |
菌株名稱(chēng) |
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ATCC 19115 |
單增李斯特氏菌 |
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CMCC 54008 |
單增李斯特氏菌 |
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CMCC 54009 |
單增李斯特氏菌 |
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CMCC 54010 |
單增李斯特氏菌 |
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CMCC 54011 |
單增李斯特氏菌 |
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CMCC 54012 |
單增李斯特氏菌 |
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CICC 21583 |
單增李斯特氏菌 |
經(jīng)觀(guān)察，以上7株單增李斯特氏菌培養后為灰綠色圓形菌落，凹陷，有黑色中心，菌落周?chē)屎谏�，直�?-3mm，不同菌株的菌落形態(tài)略有差異，但都呈現出典型特征，回收率均在80%以上
具體單增李斯特氏菌的菌落特征參考下圖：
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本培養基要求抑制大腸埃希氏菌和革蘭氏陽(yáng)性菌-糞腸球菌，避免對李斯特氏菌的檢出產(chǎn)生干擾，故自實(shí)驗室中選取6株大腸埃希氏菌和7株糞腸球菌進(jìn)行驗證。分別取1μL菌液半定量劃六線(xiàn)，36℃培養40h后計數生長(cháng)指數G值，結果如下：
非目標菌株在PALCAM瓊脂培養基上的生長(cháng)情況
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PALCAM瓊脂培養基（產(chǎn)品號：HB4188）平板上生長(cháng)的7株單增李斯特氏菌的菌落形態(tài)呈現典型的菌落特征：灰綠色圓形菌落，凹陷，有黑色中心，菌落周?chē)屎谏�，直�?-3mm，回收率均高于80%，符合標準回收率大于70%的要求，13株非目標菌均被抑制，綜合考慮，本培養基的性能良好，可有效檢出樣品中的目標菌。
六、注意事項
在進(jìn)行李斯特氏菌檢測的過(guò)程中，同時(shí)需要與李斯特氏菌顯色培養基上分離的典型和可疑菌落純化后進(jìn)行后續的生化與血清學(xué)鑒定，綜合分析判斷是否為李斯特氏菌。
參考文獻：
[1]GB 4789.28-2013 食品微生物學(xué)檢驗 培養基和試劑的質(zhì)量要求.
[2]GB 4789.30-2016 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗.
注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。
