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一、孟加拉紅培養基用途
用于食品中霉菌和酵母菌總數的測定。
霉菌（Mould）是非分類(lèi)學(xué)名詞，是對菌絲體發(fā)達，而又不產(chǎn)生大型肉質(zhì)子實(shí)體的絲狀真菌的俗稱(chēng)。按照Smith分類(lèi)系統，霉菌分屬于真菌界、子囊菌綱和半知菌類(lèi)。在自然界分布廣泛，無(wú)所不在，而且種類(lèi)和數量驚人。霉菌的菌落大、疏松、干燥、不透明，有的呈絨毛狀或絮狀或網(wǎng)狀，菌體可沿培養基表面蔓延生長(cháng)，由于不同的真菌孢子含有不同的色素，所以菌落可呈現紅、黃、綠、青綠、青灰、黑、白、灰等多種顏色。
酵母（Yeast）是非分類(lèi)學(xué)術(shù)語(yǔ)，泛指能發(fā)酵各種糖類(lèi)的各種單細胞真菌，不同的酵母菌在進(jìn)化和分類(lèi)地位上有異源性。一些酵母菌能夠通過(guò)出芽的方式進(jìn)行無(wú)性生殖，也可以通過(guò)形成孢子的形式進(jìn)行有性生殖。目前已知有500多種酵母，大部分被分類(lèi)到子囊菌門(mén)。
霉菌和酵母菌可以造成許多食物的腐敗，原因在于霉菌和酵母菌寬泛的環(huán)境適應力。大多數霉菌和酵母菌是專(zhuān)性需氧菌，需要游離氧氣進(jìn)行生長(cháng)。對酸堿度要求較低，從pH值2.0到高于pH值9.0均可生長(cháng)。生長(cháng)溫度范圍10℃～35℃，最適生長(cháng)溫度25℃～28℃。
二、培養基配方（g/L）：
|
蛋白胨 |
5.0 |
|
葡萄糖 |
10.0 |
|
磷酸二氫鉀 |
1.0 |
|
硫酸鎂 |
0.5 |
|
孟加拉紅 |
0.033 |
|
氯霉素 |
0.1 |
|
瓊脂 |
20.0 |
三、培養基原理
蛋白胨作為培養基中的營(yíng)養物質(zhì)，提供菌體生長(cháng)所需的氮源等；葡萄糖提供微生物生長(cháng)所需的碳源，自然界中大多數微生物都能利用葡萄糖，由于細菌代謝過(guò)程中分解代謝葡萄糖產(chǎn)酸，培養及加熱滅菌時(shí)葡萄糖被破壞焦化，因此應注意其用量及滅菌時(shí)間和溫度；磷酸二氫鉀作為培養基的緩沖劑；硫酸鎂能夠促進(jìn)菌體細胞的生長(cháng)；孟加拉紅可抑制細菌的生長(cháng)，也可抑制繁殖過(guò)快的霉菌菌落的大小和高度，此外還可作為著(zhù)色劑，霉菌或酵母菌吸收后便于菌落的觀(guān)察；氯霉素作為抗生素可抑制細菌的生長(cháng)；瓊脂為培養基的凝固劑。
四、質(zhì)控菌株
在GB4789.28-2013培養基和試劑的質(zhì)量要求中關(guān)于孟加拉紅培養基的質(zhì)量控制標準如下表所示：
表1孟加拉紅培養基的質(zhì)量控制標準
|
質(zhì)控菌株 |
菌株編號 |
參比或計數培養基 |
方法 |
質(zhì)控結果 |
其他特征 |
|
釀酒酵母 |
ATCC 9763 |
SDA |
定量 |
PR≥0.7 |
奶油色菌落 |
|
黑曲霉 |
ATCC 16404 |
SDA |
定量 |
PR≥0.7 |
白色菌絲，黑色孢子 |
|
大腸埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
|
金黃色葡萄球菌 |
ATCC 6538 |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
為了更好地對培養基進(jìn)行質(zhì)量控制，從實(shí)驗室中選取5株釀酒酵母和7株黑曲霉、6株大腸埃希氏菌和8株金黃色葡萄球菌進(jìn)行檢驗。
具體菌株信息如下表所示：
表2孟加拉紅培養基的質(zhì)控菌株
|
菌株名稱(chēng) |
菌株編號 |
菌株名稱(chēng) |
菌株編號 |
|
釀酒酵母 |
ATCC 9763 |
黑曲霉 |
ATCC 16404 |
|
CMCC 98017 |
CMCC 98020 |
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|
CMCC 98018 |
CMCC 98021 |
||
|
CMCC 98019 |
CMCC 98022 |
||
|
CMCC 98023 |
|||
|
CICC 1425 |
CMCC 98024 |
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|
CICC 2089 |
|||
|
大腸埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
金黃色葡萄球菌 |
ATCC 6538 |
|
CMCC 43201 |
CMCC 26302 |
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|
CMCC 43203 |
CMCC 26305 |
||
|
CMCC 43204 |
CMCC 26304 |
||
|
CMCC 43205 |
CMCC 26307 |
||
|
CMCC 26306 |
|||
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CICC 24652 |
CICC 10145 |
||
|
CICC 10790 |
五、培養基質(zhì)控檢驗方法：
1.稱(chēng)取本品36.6g，加熱攪拌溶解于1000mL蒸餾水中，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15分鐘，冷卻至45-50℃備用；
2.將新活化的目標菌（釀酒酵母和黑曲霉）用生理鹽水進(jìn)行10倍梯度系列稀釋?zhuān)晃∵m宜稀釋度的質(zhì)控菌液1mL加入至無(wú)菌空平皿中，加入約10-15mL孟加拉紅瓊脂搖勻，凝固后覆蓋約5mL孟加拉紅瓊脂，每株菌接種3個(gè)平板，同時(shí)傾注3個(gè)SDA平板做參比培養基計數，待培養基凝固；
3.挑取非目標菌（大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌）至TSB試管中，過(guò)夜培養；使用1μL接種環(huán)挑取1環(huán)菌液，劃六線(xiàn)接種于孟加拉紅瓊脂平板，每株菌接種3個(gè)平板；
4.將平板倒置于恒溫培養箱內，28±1℃需氧培養5d，記錄試驗結果。
六、培養基質(zhì)控試驗結果
1.7株黑曲霉在孟加拉紅培養基上28±1℃需氧培養5d后，均有黑色孢子產(chǎn)生，回收率在90%以上。
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黑曲霉ATCC 16404 |
黑曲霉CICC 2089 |
黑曲霉CMCC 98020 |
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黑曲霉CMCC 98021 |
|
黑曲霉CMCC 98022 |
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黑曲霉CMCC 98023 |
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黑曲霉CMCC 98024 |
2.5株釀酒酵母在孟加拉紅培養基上28±1℃需氧培養5d后，為奶白色菌落，回收率均在90%以上。
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釀酒酵母CICC 1425 |
釀酒酵母ATCC 9763 |
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釀酒酵母CMCC 98017 |
釀酒酵母CMCC 98018 |
釀酒酵母CMCC 98019 |
3.本培養基要求抑制大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌的生長(cháng)，大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌在培養基上劃六線(xiàn)28±1℃需氧培養5d后，均未生長(cháng)，符合標準要求，計數菌株生長(cháng)指數G值結果如下表所示：
表3非目標菌生長(cháng)指數G值計數結果
菌株名稱(chēng)
菌株編號
孟加拉紅培養基
平皿1
平皿2
平皿3
大腸埃希氏菌
ATCC 25922
0
0
0
CMCC 43201
0
0
0
CMCC 43203
0
0
0
CMCC 43204
0
0
0
CMCC 43205
0
0
0
CICC 24652
0
0
0
金黃色葡萄球菌
ATCC 6538
0
0
0
CMCC 26302
0
0
0
CMCC 26305
0
0
0
CMCC 26304
0
0
0
CMCC 26307
0
0
0
CMCC 26306
0
0
0
CICC 10145
0
0
0
CICC 10790
0
0
0
七、參考文獻
[1]GB 4789.28-2013 食品微生物學(xué)檢驗 培養基和試劑的質(zhì)量要求.
[2]GB 4789.15-2016 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 霉菌和酵母計數.
[3]趙貴明. 微生物培養基及其原材料質(zhì)量控制. 北京中國標準出版社，2018.1.
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