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“椰毒假單胞菌”，全稱(chēng)椰毒假單胞酵米面亞種Pseudomonas cocovenenans subsp.Farinofermentans，是—種存在于酵米面、變質(zhì)鮮銀耳及其他淀粉類(lèi)發(fā)酵產(chǎn)品中的食源性致病菌。
由于椰毒假單胞酵母菌酵米面亞種不是國際公開(kāi)發(fā)表和承認的細菌分類(lèi)科學(xué)名稱(chēng)，1999年劃分為唐菖蒲伯克霍爾德氏菌Burkholderiagladioli的一個(gè)病原型，目前現行標準GB/T 4789.29-2003《食品衛生微生物學(xué)檢驗椰毒假單胞菌酵米面亞種檢驗》。2018年9月國家衛生健康委員會(huì )發(fā)布的《食品安全國家標準食品微生物學(xué)檢驗唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（椰毒假單胞菌酵米面亞種）檢驗(征求意見(jiàn)稿）》中，將該菌進(jìn)行更名，同時(shí)新增分離培養基mPDA同PCFA用于唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（椰毒假單胞菌酵米面亞種）的分離。
唐菖蒲伯克霍爾德氏菌檢驗流程圖
一、前增菌以及選擇性分離過(guò)程
前增菌：
淀粉類(lèi)食品25g+225mLGVC增菌液，均質(zhì)混勻，36土1℃，24-48h。
鮮銀耳1g+20mL GVC增菌液，均質(zhì)混勻，36土1℃，24-48h。
分離：
用直徑3mm的接種環(huán)取增菌液一環(huán)，分別劃線(xiàn)接種于mPDA平板和PCFA平板，36℃±1℃培養24 h～48 h。觀(guān)察各個(gè)平板上生長(cháng)的菌落。
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mPDA平板 |
PCFA平板 |
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24-48h，紫色、光滑、濕潤、邊緣整齊 培養48h后，部分菌落中心可有凸起呈草帽狀 |
24-48h，灰白色，光滑、濕潤、邊緣整齊 |
二、初篩實(shí)驗
自選擇性瓊脂平板上分別挑取5個(gè)以上典型或可疑菌落，分區劃線(xiàn)卵黃瓊脂平板，36℃±1℃培養。
挑取培養18～24 h的菌落進(jìn)行革蘭氏染色及氧化酶試驗。對于革蘭氏染色陰性、氧化酶試驗陰性的菌繼續培養至48 h±2 h。
對于卵磷脂酶陽(yáng)性，帶有虹彩環(huán)的單個(gè)菌落，接種PDA平板，36℃±1℃培養24 h±2 h。
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卵黃瓊脂（卵磷脂酶試驗) |
PDA平板 |
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培養24h后，菌落2mm～3mm，表面光滑、濕潤，培養48h后，菌落周?chē)纬扇榘咨鞚岘h(huán)，斜射光下可見(jiàn)菌落及周?chē)囵B基表面呈虹彩現象。 (通常需培養3-4d才看到明顯特征) |
36土1℃，24-48h，菌落灰白或乳白色，光滑，邊緣整齊，中心有凸起，呈草帽狀。 |
三、生化試驗
從純培養的PDA平板上挑取菌苔進(jìn)行生化鑒定。唐菖蒲伯克霍爾德氏菌生化特征見(jiàn)下表�？蛇x擇生化鑒定試劑盒或微生物生化鑒定系統。
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生化試驗 |
特 征 |
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O/F 試驗（氧化型） |
+ |
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葡萄糖 |
+ |
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果糖 |
+ |
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木糖 |
+ |
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半乳糖 |
+ |
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蔗糖 |
- |
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阿拉伯糖 |
+ |
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甘露醇 |
+ |
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側金盞花醇 |
+ |
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肌醇 |
+ |
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衛茅醇 |
+ |
|
動(dòng)力 |
+ |
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卵磷脂酶 |
+ |
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氧化酶 |
- |
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尿素 |
+ |
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明膠液化 |
+ |
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硝酸鹽還原 |
+ |
|
檸檬酸鹽利用 |
+ |
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精氨酸 |
+ |
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石蕊牛乳 |
+ |
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靛基質(zhì) |
- |
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V-P |
- |
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MR |
- |
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苯丙氨酸脫氨酶 |
- |
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H2S 產(chǎn)生 |
- |
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注：＋表示陽(yáng)性;－表示陰性。 |
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唐菖蒲伯克霍爾德氏菌檢驗用培養基列表
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用途 |
貨號 |
名稱(chēng) |
規格 |
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增菌 |
HB8591 | GVC增菌液 |
250g |
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分離 |
HB9153 | 改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂（mPDA) |
250g |
| HB9153a | 氯霉素溶液 |
1ml*5支 |
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| HB9153b | 龍膽紫溶液 | 1ml*5支 | |
| HB9140 | PCFA培養基 | 250g | |
| HB9140a | PCFA培養基添加劑 | 1ml*5支 | |
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初篩 |
HB0262 | 卵黃瓊脂培養基基礎 | 250g |
| HB8295 | 50%卵黃乳液 | 5ml*10支 | |
| HB2100 | 氧化酶試紙 | 10片 | |
| HB8278 | 革蘭氏染色液 | 5ml*8 | |
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純化 |
HB0233 | 馬鈴薯葡萄糖瓊脂 | 250g |
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產(chǎn)毒培養 |
HB0233-2 | 馬鈴薯葡萄糖半固體瓊脂 | 250g |
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生化鑒定 |
GB049 | OF生化管 | 20支 |
| GB117 | 葡萄糖 | 20支 | |
| GB144-1 | 果糖 | 20支 | |
| GB032 | 木糖 | 20支 | |
| GB152 | 半乳糖 | 20支 | |
| GB163 | 阿拉伯糖 | 20支 | |
| GB169 | 蔗糖 | 20支 | |
| 側金盞花醇 | 20支 | ||
| GB007 | 甘露醇 | 20支 | |
| GB105 | 肌醇 | 20支 | |
| GS008 | 衛茅醇 | 20支 | |
| GB008 | 半固體瓊脂 | 20支 | |
| GS004 | 尿素 | 20支 | |
| SN039 | 明膠生化管 | 20支 | |
| SN047 | 硝酸鹽還原 | 20支 | |
| GS011 | 西蒙氏枸櫞酸鹽 | 20支 | |
| 精氨酸 | 20支 | ||
| HB8801 | 石蕊牛奶培養基 | 250g | |
| GS001 | 蛋白胨水 | 20支 | |
| GS003 | MR-VP生化管 | 20支 | |
| GB095 | 苯丙氨酸脫氨酶 | 20支 | |
| GB095a | 苯丙氨酸指示劑 | 5ml*4 | |
| GB065 | 硫化氫 | 20支 |
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