放線(xiàn)菌形態(tài)的觀(guān)察

一、目的要求
1 ．學(xué)習并掌握觀(guān)察放線(xiàn)菌形態(tài)的基本方法．
2 ．初步了解放線(xiàn)菌的形態(tài)特征，
二、基本原理
放線(xiàn)菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類(lèi)革蘭氏陽(yáng)性細菌，常見(jiàn)放線(xiàn)菌大多佬形成菌嫂體，緊貼培養基表面或深入培養基內生長(cháng)的叫基內菌欽（簡(jiǎn)稱(chēng)“基絲”，) ，基絲生長(cháng)到一定階段還能向空氣中生長(cháng)出氣生菌絲〔 簡(jiǎn)稱(chēng)“氣絲”) ，并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。有的放線(xiàn)菌只產(chǎn)生基稗而無(wú)氣越。在顯微鏡下直接觀(guān)察時(shí)，氣處在上層、基絲在下層，氣理色暗，墓絲較透明．孢子絲依種類(lèi)的不同，有直波曲、各種螺旋形或輪生．在油鏡下觀(guān)察，放線(xiàn)菌的孢子有球形、橢圓、桿狀或柱狀．能否產(chǎn)生菌絲體及由菌絲體分化產(chǎn)生的各種形態(tài)特征是放線(xiàn)菌分類(lèi)鑒定的重要依據．為了觀(guān)察放線(xiàn)菌的形態(tài)特征，人們設計了各種培養和觀(guān)察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線(xiàn)菌自然生長(cháng)狀態(tài)下的形態(tài)特征．本實(shí)狡介紹其中幾種常用方法．扦片法：將放線(xiàn)菌接種在瓊脂平板上，扦上滅菌蓋玻片后培養，使放線(xiàn)菌菌絲沿著(zhù)培養基表面與蓋玻片的交接處生長(cháng)而附著(zhù)在蓋玻上．觀(guān)察時(shí)，輕輕取出蓋玻片，t 于載玻片上直接鏡檢．這種方法可觀(guān)察到放線(xiàn)菌自然生長(cháng)狀態(tài)下的特征，而且便于觀(guān)察不同生長(cháng)期的形態(tài)．玻璃紙法；玻璃紙是種透明的半透膜，將滅菌的玻璃紙班蓋在瓊脂平板表面，然后將放線(xiàn)菌接種于玻璃紙上，經(jīng)培養，放線(xiàn)菌在玻璃紙上生長(cháng)形成菌苔，觀(guān)察時(shí)，揭下玻璃紙，固定在載玻片上直接鏡檢．這種方法既能保持放線(xiàn)菌的自然生長(cháng)狀態(tài)，也便于觀(guān)察不同生長(cháng)期的形態(tài)特征。印片法將要觀(guān)察的放線(xiàn)菌的菌落或菌谷，先印在載玻片上，經(jīng)染色后觀(guān)察．這種方法主要用于觀(guān)察飽子絲的形態(tài)，孢子的排列及其形狀等．方法簡(jiǎn)便、但形態(tài)特征可能有所改變，
三、器材
l 菌種 細黃鏈霉菌或青色鏈霉菌．弗氏鏈霉菌。
2 ，培養基 滅菌的高氏I 號瓊脂
3 ．儀器或其他用具 經(jīng)滅菌的：平皿、玻璃紙、蓋玻片、玻璃涂棒，以及載玻片，接種環(huán)，接種鏟，鑷子，石炭酸復紅染液，顯微鏡等。
四、操作步驟
1.扦片法
( 1 ）倒平板 取融化并冷至大約50 ℃ 的高氏1 號瓊脂約20 而倒平板，凝固待用．
（2）接種用接種環(huán)挑取菌種斜面培養物（孢子）在瓊脂平板上劃線(xiàn)接種．
（3）扦片以無(wú)菌操作用鑷子將滅菌的蓋玻片以大約45 。角扦人瓊脂內（扦在接種線(xiàn)上），扦片數量可根據需要而定，
( 4 ）培養將扦片平板倒置，28 ℃ 培養，培養時(shí)間根據觀(guān)察的目的而定、通常3 ~5d ．
 ( 5 ）鏡檢 用鑷子小心拔出蓋玻片，擦去背面培養物，然后將有菌的一面朝上放在載玻片上，直接鏡檢．
2 玻璃紙法
( l ）倒平板 同扦片法．
( 2 ）鋪玻璃紙 以無(wú)菌操作用鑷子將已滅菌（155～160 ℃ 干熱滅菌2h ）的玻璃紙片（似蓋玻片大�。╀佋谂囵B簽瓊脂表面，用無(wú)菌玻璃涂棒（或接種環(huán)）將玻璃紙壓平，使其緊貼在瓊脂表面，玻璐紙和瓊脂之間不留氣泡。每個(gè)平板可鋪5 ~ 10 塊玻璃紙．
也可用略小于平皿的大張玻璃紙代替小紙片，但觀(guān)察時(shí)需要再剪成小塊．
( 3 ）接種 用接種環(huán)挑取菌種斜面培養物（孢子〕 在玻璃紙上劃線(xiàn)接種．
( 4 ）培養 將平板倒里，28 ℃ 培養3~5d . 
（5）鏡檢 在潔凈載玻片上加一小滴水，用攝子小心取下玻璐紙片，菌面朝上放在玻片的水滴上，使玻璃紙平貼在玻片上（中間勿留氣泡），先用低倍鏡觀(guān)察，找到適當視野后換高倍鏡觀(guān)察。
操作過(guò)程，勿碰動(dòng)玻璃紙面上的培養物．
3 ．印片法
( 1 ）接種培養 用高氏I 號瓊脂平板，常規劃線(xiàn)接種或點(diǎn)種，28 ℃ 培養4 ~ 7 d ．也可用上述兩種方法所使用的瓊脂平板上的培養物，作為制片觀(guān)察的材料．
( 2 ）印片 用接種鏟或解剖刀將平板上的菌苔連同培養基切下一小塊，菌面朝上放在一載玻片上．另取一潔凈載玻片里火焰上微熱后，蓋在菌苔上。輕輕按壓，便培養物（氣性、孢子絲或孢子）枯附（“印”）在后一塊載玻片的中央，有印跡的一面朝上，通過(guò)火焰2 ~3 次固定． 
( 3 ）染色用石炭酸復紅覆蓋印跡，染色約1min后水洗．
（4）鏡檢 干后用油鏡觀(guān)察．
五、實(shí)驗報告
! ．結果
繪圖說(shuō)明你所觀(guān)察到的放線(xiàn)菌的主要形態(tài)特征．
2 ．思考題
( l) 試比較三種培養和觀(guān)察放線(xiàn)菌方法的優(yōu)缺點(diǎn)。
( 2 ）玻璃紙培養和觀(guān)察法是否還可用于其他類(lèi)群微生物的培養和觀(guān)察？為什么？
（3）鏡檢時(shí)，你如何區分放線(xiàn)菌的基內菌絲和氣生菌絲？
   
   

 

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