2015年版《中國藥典》最常見(jiàn)126個(gè)的問(wèn)題

1.2015年版《中國藥典》的修訂介紹

  答：《中國藥典》是國家為保證藥品質(zhì)量可控、確保人民用藥安全有效而依法制定的藥品法典，是藥品研制、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)、使用和管理都必須嚴格遵守的法定依據，是國家藥品標準體系的核心。2015年版《中國藥典》是新中國成立以來(lái)的第10版藥典。2010年3月第十屆藥典委員會(huì )組建成立，歷時(shí)5年完成新版藥典編制工作。編制期間，所有藥典的修訂內容均在網(wǎng)上公示并征求意見(jiàn)，共收到網(wǎng)上反饋意見(jiàn)4000余條，遠遠超過(guò)歷版藥典收到反饋意見(jiàn)的數量，反映了社會(huì )、公眾對新版藥典編制的關(guān)注度和參與度不斷提高。針對各類(lèi)反饋意見(jiàn)，藥典委員會(huì )各專(zhuān)業(yè)委員會(huì )逐條研究討論，組織召開(kāi)標準審議會(huì )議700余次，并向社會(huì )進(jìn)行了意見(jiàn)反饋�？梢哉f(shuō)，2015年版《中國藥典》既體現了第十屆藥典委員會(huì )全體委員、廣大專(zhuān)家學(xué)者、藥品檢驗機構、科研院所、大專(zhuān)院校、藥品生產(chǎn)企業(yè)的心血，也包含了社會(huì )公眾的共同智慧。

2.2015版藥典實(shí)施詳情

  答：新版《中國藥典》2015年12月1日施行，每五年發(fā)布一版藥典。自實(shí)施之日起，已上市的藥品的質(zhì)量標準就應當符合2015版《中國藥典》收載的品種項下的質(zhì)量標準。對已經(jīng)上市的但是在2015版藥典未收載的該品種質(zhì)量標準，也應當符合《中國藥典》通則的相關(guān)要求。在我們已經(jīng)提交了注冊申請的這些品種，還沒(méi)有經(jīng)過(guò)批準的，在批準時(shí)也應該要求他們符合2015版藥典標準的相關(guān)要求。

3.2015年版《中國藥典》的主要變化有哪些？

  答：一是收載品種增幅達到27.4%。2015版藥典擬收載5800個(gè)品種，比2010版藥典增加1200多個(gè)，修訂品種751個(gè)。

  二是通過(guò)藥典凡例、通則、總論的全面增修訂，從整體上進(jìn)一步提升了對藥品質(zhì)量控制的要求，完善了藥典標準的技術(shù)規定，使藥典標準更加系統化、規范化。

  三是健全了藥品標準體系。特別是藥用輔料品種增加至260個(gè)，新增相關(guān)指導原則;在歸納、驗證和規范的基礎上實(shí)現了《中國藥典》各部共性檢測方法的協(xié)調統一。

  四是2015版藥典附錄(通則)、輔料獨立成卷，構成《中國藥典》四部的主要內容。

  五是藥用輔料品種收載數量顯著(zhù)增加。擬新增128個(gè)，共計260個(gè)，增長(cháng)率高達97%。

  六是安全性控制項目大幅提升。

  中藥：制定了中藥材及飲片中二氧化硫殘留量限度標準，推進(jìn)建立和完善重金屬及有害元素、黃曲霉毒素、農藥殘留量等物質(zhì)的檢測限度標準;加強對重金屬以及中藥材的有毒有害物質(zhì)的控制等。

  化學(xué)藥：有關(guān)物質(zhì)加強了雜質(zhì)定性和定量測定方法的研究，實(shí)現對已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的區別控制，優(yōu)化抗生素聚合物測定方法，設定合理的控制限度，整體上進(jìn)一步提高有關(guān)物質(zhì)項目的科學(xué)性和合理性等。

  生物制品：增加相關(guān)總論的要求，嚴格生物制品全過(guò)程質(zhì)量控制要求，以保證產(chǎn)品的安全有效性，同時(shí)增訂“生物制品生產(chǎn)用原輔材料質(zhì)量控制通用性技術(shù)要求”，加強源頭控制，最大限度降低安全性風(fēng)險等。

  七是進(jìn)一步加強有效性控制。中藥材加強了專(zhuān)屬性鑒別和含量測定項設定�；瘜W(xué)藥適當增加了控制制劑有效性的指標，研究建立科學(xué)合理的檢查方法。生物制品進(jìn)一步提高效力測定檢測方法的規范性，加強體外法替代體內法效力測定方法的研究與應用，保證效力測定方法的準確性和可操作性。

4.以第五代菌做陽(yáng)性對照，實(shí)驗過(guò)程中的接種按藥典應該也算傳代，那是否算是第六代菌呢？

  答：依然算第五代(接種的菌株算第5代，培養后算第6代)

5.藥典規定只能傳代五次，此次實(shí)驗結果是否有效？

  答：有效

6.現在有無(wú)對照菌種可以購買(mǎi)？聯(lián)絡(luò )電話(huà)？

  答：省藥檢所業(yè)務(wù)科銷(xiāo)售藥典規定的標準菌株，為第二代甘油凍存管，電話(huà)：020-81854392

7.菌種發(fā)放單應包括什么信息？

  答：根據自己工作的需要，大致包括：菌種名稱(chēng)，編號，來(lái)源，接收日期，接收人等。

8.如何檢查黑曲霉孢子懸浮液孢子含量為50~100個(gè)／ml。銅綠假單胞菌單菌如果用甘油冷凍管，也是低溫，是否也會(huì )影響它的活性？應如何保存？

  答：可用玫瑰紅鈉瓊脂培養基或改良馬丁瓊脂來(lái)確定黑曲霉孢子懸浮液。銅綠假單胞菌應使用最終甘油濃度為20%的甘油凍存管保存，保存在-30℃或更低溫度，則可保持其活性。若是斜面或營(yíng)養肉湯，建議室溫保存。

9.工作菌株，2-8℃下可連續使用一周，這里的工作菌株是指原液還是制備好的菌懸液。為何工作菌株不低溫存放，而是2-8℃？

  答：首先要說(shuō)明，所有的操作應按藥典要求來(lái)操作，這里的工作菌株指原液，工作菌株建議在2-8℃保存，但要注意的是，銅綠假單胞菌的工作菌液不能低溫保存，低溫會(huì )損傷其活性。

10.簡(jiǎn)單方便的厭氧培養方案？

  答：硫乙醇酸鹽培養基；固體培養基的話(huà)可考慮使用一次性厭氧袋。

11.三糖鐵斜面穿刺會(huì )斷層，這是為什么？

  答：產(chǎn)氣菌產(chǎn)氣使培養基斷層，或培養基本身質(zhì)量問(wèn)題。

12.第一代菌種可不可以作為工作菌株使用？

  答：建議不這樣使用，因為擔心菌株沒(méi)有充分復壯，生化特性可能不典型。

13.制備菌懸液時(shí)，要使其在10～100cfu中，應多注意的地方是什么？

  答：制定標準化操作規程，減少不同實(shí)驗者帶來(lái)的誤差，接種量、培養溫度和時(shí)間應每次一致。

14.黑曲霉的存放期如何驗證？

  答：通過(guò)孢子懸液計數和菌落特征，進(jìn)行驗證。

15.標準儲備菌株必須進(jìn)行純度和特性確認？還是在必要情況下才做？

  答：詳見(jiàn)《中國藥品檢驗標準操作規范》2010版341頁(yè)，建議在制備標準貯備菌液前進(jìn)行純度和特性確認，最好在使用前再進(jìn)行純度和特性確認。

16.銅綠假單胞菌貯存溫度應為多少度？

  答：一般在10℃以上，甘油凍存管至少在-30℃以下。

17.制備工作菌種進(jìn)行菌種保藏中的保存期是否要進(jìn)行驗證？

  答：可參考2010年版《中國藥典》標準操作規程（SOP），應進(jìn)行驗證。

18.斜面低溫保藏法：每一次的菌種傳代都需要做菌種純度鑒定嗎？

  答：建議制備斜面保存管前進(jìn)行菌種純度鑒定，以后的每次傳代視具體情況而定。

19.如何比較快速有效判斷菌液的濃度？除了可以用“比濁儀”參考，還有什么方法？

  答：比濁儀只做輔助參考，還需通過(guò)平板計數來(lái)最后確認菌液的濃度。

20.曾于中檢所中購買(mǎi)過(guò)黑曲霉的0代包子懸液，說(shuō)明書(shū)上表示應于-20℃中保存，可保存一年，對于此保存唯獨及效期，藥企可否同法保存自制的黑曲霉孢子懸液？是否要驗證？如何驗證？

  答：黑曲霉孢子懸液制備請參照2010版藥典的相關(guān)內容。關(guān)于驗證在前面的問(wèn)題中已經(jīng)回復。

21.菌種斜面最多能保存菌幾代？經(jīng)冰箱保存的斜面菌種是否需復蘇二次才能進(jìn)行菌懸液配制？

  答：藥典規定，菌種傳代不應超過(guò)5代。冰箱保存的斜面菌種復蘇后即可使用。

22.哥倫比亞血瓊脂平皿生長(cháng)的菌落，對氧化酶試驗是否有影響？菌懸液的制備過(guò)程中，接種菌種新鮮培養物至營(yíng)養肉湯或營(yíng)養瓊脂培養基中，這個(gè)新鮮培養物怎么理解，冰箱保存斜面菌種是新鮮培養物嗎？

  答：沒(méi)使用過(guò)哥倫比亞血瓊脂及相關(guān)實(shí)驗。新鮮培養物指剛培養好的菌株，冰箱保存斜面菌種不算新鮮培養物。

23.大腸埃希菌鏡檢時(shí)，有時(shí)固定好的菌在染色過(guò)程中脫落，請問(wèn)是什么原因引起這種情況？

  答：首先，洗干凈撥片，挑菌注意不要太多，待菌固定好后再進(jìn)行染色。

24.生孢梭菌，菌落培養計數時(shí)一定要在厭氧條件下進(jìn)行嗎？

  答：是

25.為什么有時(shí)候細菌管會(huì )長(cháng)真菌，而真菌管也會(huì )長(cháng)細菌。

  答：原因可能是多方面的，某些細菌適宜在真菌培養基上生長(cháng)，而某些真菌也能在細菌培養基上生長(cháng)。比如2010版藥典無(wú)菌檢查法，兩種培養基的使用范圍已刪去，已不是絕對的細菌培養基或真菌培養基。

26.在做方法驗證時(shí)，黑曲霉菌濃度大于20cfu/皿時(shí)，培養5天后菌落蔓延擴散，無(wú)法各個(gè)區分，如何在藥典要求的50~100cfu和實(shí)際操作結果中找到平衡？因為菌濃對回收率及操作RSD%影響很多.

  答：培養48-72h后，菌落剛形成時(shí)，及時(shí)點(diǎn)計并做記號，然后每天觀(guān)察有無(wú)新的菌落長(cháng)出并計數。

27.標準菌黑曲霉在傳代前需要先接到改良馬丁培養基復蘇后，再傳代，如果需要，接到改良馬丁培養基后培養時(shí)間怎么定？

  答：2010版藥典規定，黑曲霉傳代，培養時(shí)間為5~7天

28.有時(shí)候在玫瑰紅鈉瓊脂或營(yíng)養瓊脂平板上生長(cháng)有酵母菌，在酵母菌生長(cháng)的位置底部產(chǎn)生了一個(gè)氣泡狀的圓形，把底部的瓊脂都貢起來(lái)了，又或者表面沒(méi)有任何菌落，而瓊脂被貢起來(lái)，請問(wèn)這種圓形氣泡是菌嗎？在計數時(shí)是否也把它算入酵母菌？

  答：建議挑取氣泡內含物接種至改良馬丁瓊脂培養基中，若能生長(cháng)，且為酵母菌的菌落形態(tài)，應該可以將其算入酵母菌。

29.大腸生化實(shí)驗中的靛基質(zhì)試驗（I）項結果為“+”或者“-”均不影響最終結果的判斷，請問(wèn)該項的意義何在？是否可以取消？

  答：反應為+，為典型大腸埃希氏菌，-為非典型大腸埃希菌。關(guān)系到最終判斷，都是必須的實(shí)驗，不可取消。

30.生化檢查用的鑒定盒是否需要跟培養基一樣做適用性檢查？如果需要做，應該如何進(jìn)行？

  答：用陽(yáng)性菌做一次，實(shí)驗結果相符即可。

31.銅綠假單胞菌用什么方法保存及更活處理方法？

  答：建議采用甘油凍存管（終濃度為20%的甘油凍存管），-30℃（或更低溫度）保存。

32.菌株的純度和特性要多久確認一次，最短時(shí)間和最長(cháng)時(shí)間分別是多少？

  答：做標準儲備菌株之前務(wù)必要進(jìn)行鑒定，其它根據實(shí)際情況：如污染、活性下降、儲存條件發(fā)生改變等。

33.革蘭氏染色前，菌落是否要先純化（接到營(yíng)養瓊脂斜面上）還是直接從選擇性培養基上挑起菌落直接染色？

  答：要純化，從選擇性培養基挑取單個(gè)菌落，最好先接到營(yíng)養瓊脂斜面后，再進(jìn)行染色。

34.供試品傳入無(wú)菌，對表面進(jìn)行消毒。用75%無(wú)菌酒精浸泡表面是否可行？可用如何方法。（等紫外照射1h+酒精噴射，是否可行？注：無(wú)緩沖間的情況。從一般區直接進(jìn)入傳遞窗）

  答：用75%無(wú)菌酒精浸泡表面應該可行，但酒精易燃�？捎闷胀ㄏ�毒劑如新潔爾滅等消毒。

35.無(wú)菌實(shí)驗供試品在傳入無(wú)菌傳遞窗前能否泡消毒液？

  答：視包裝而定。如：玻璃安瓿，可以；西林瓶，不可以。

36.檢驗針劑時(shí)，安瓿表面消毒可否用碘液浸泡作為消毒，如果可以，它會(huì )殺死樣品本身的微生物嗎？

  答：我們沒(méi)有碘液浸泡消毒的經(jīng)驗。 就浸泡方式而言，視包裝而定，如：玻璃安瓿，可以；西林瓶，不可以。

37.微生物檢查樣品傳遞消毒處理，需作驗證嗎?如何確定其消毒效果？

  答：驗證當然最好，但也應結合常識、經(jīng)驗等，盡量減低工作量。

38.藥典要求只要供試品的特性允許優(yōu)先考慮薄膜過(guò)濾法。對于小劑量無(wú)抑菌作用的注射劑，是直接接種法好還是薄膜過(guò)濾法好？

  答：優(yōu)先考慮薄膜過(guò)濾法，可視樣品包裝情況而定。

39.無(wú)菌檢查驗證，2010年版方法改變，變換了大腸埃希桿菌，請問(wèn)從前經(jīng)過(guò)驗證的無(wú)菌檢查方法，實(shí)施2010年藥典時(shí)是否必須從新的驗證方法進(jìn)行驗證？驗證后從能進(jìn)行無(wú)菌檢查？

  答：應重新驗證。

40.無(wú)菌制劑的處方與工藝都沒(méi)有改變，10版藥典出版是否還需重新驗證？

  答：10版用大腸埃希替代銅綠假單胞，應重新驗證。

41.05版我們已經(jīng)做了方法驗證，10版還要再做方法驗證嗎？

  答：如前所述。

42.做陽(yáng)性對照，為什么同是做5批檢樣，到最后只是兩到三批長(cháng)菌？原因出在哪？濾膜嗎？（我們是做抗菌素的產(chǎn)品）

  答：原因是多方面的。請考慮方法的耐用性；此外，操作前后是否一致（比如：供試品溶液溶解是否徹底、供試品溶液的濃度是否一致、對濾膜濾筒的濕潤、每次過(guò)濾對濾筒的蕩洗、抽干、抽干是否過(guò)久等等）等等都有可能是影響因素。

43.清潔無(wú)菌室所用消毒液如何做到無(wú)菌拖把、拖桶如何做到無(wú)菌？

  答：消毒液可采用過(guò)濾的方法。無(wú)菌拖把、拖桶可采用浸泡、高溫滅菌的方法。

44.微生物的操作記錄，可否直接用電子版進(jìn)行記錄。也就是將操作結果及過(guò)程記錄在電子系統內？如細菌培養時(shí)間為72小時(shí)，在操作規程上可否寫(xiě)成為72±2小時(shí)。生產(chǎn)企業(yè)可否將有菌種的檢查項目，如方法學(xué)驗證、培養基適用性檢查委托有資格的單位檢驗

  答：可直接用電子版進(jìn)行記錄。 細菌培養時(shí)間為72小時(shí)，建議在操作規程上寫(xiě)成為72小時(shí)。生產(chǎn)企業(yè)應該可將有菌種的檢查項目，如方法學(xué)驗證、培養基適用性檢查委托有資質(zhì)的單位檢驗。

45.高壓消毒爐的培訓一般在哪里有舉行？

  答：廣州：特種設備培訓機構鍋爐所

46.化妝品微控的容器洗滌一般用什么洗滌較好？

  答：表面活性劑

47.日常所用的消毒液有哪些？

  答：新潔爾滅、消毒粉、75%酒精、來(lái)蘇兒。

48.消毒液本來(lái)就是用來(lái)消毒殺菌的，又怎么會(huì )存在消毒液是否無(wú)菌這一說(shuō)法？

  答：消毒液不是萬(wàn)能的，對絕大對數菌有效，不排除對有些微生物無(wú)效。 有些消毒劑質(zhì)量難保證，如果有效成分濃度過(guò)低甚至無(wú)，則達不到滅菌效果。

49.能否直接用電磁爐煮培養基（加熱）？最佳加熱方法是？

  答：電磁爐不能加熱玻璃瓶。我們所：水�。�100℃），微波爐

50.硫乙醇酸鹽流體培養基培養后會(huì )有點(diǎn)渾濁（排除是菌生長(cháng)），是否可以在滅菌之前過(guò)濾培養基?

  答：找出培養基混濁的原因，若是培養基與樣品發(fā)生作用導致的混濁，滅菌之前過(guò)濾培養基也是沒(méi)用的。硫乙醇酸鹽流體培養基含瓊脂，如果用濾膜，一般很難過(guò)濾；如果用紗布、棉花、濾紙等，則須考慮濾材對不同成分的吸附程度不同，可能造成培養基成分比例的改變。

51.方法驗證時(shí)：對照加的菌液是最后才加嗎？

  答：按藥典，在最后一次沖洗液中加入。

52.培養基適用性檢查無(wú)菌性檢查中“每批培養基隨機取不少于5支（瓶））中”中“每批”指脫水商品培養基的生產(chǎn)批次，還是指制備的批次？

  答：指制備批次的培養基。

53.微生物檢驗用的各種試劑除了化學(xué)純，能否使用分析純？

  答：可以。

54.生物安全柜，凈化操作臺每年是否需要檢定？

  答：是的，我所是每年檢定一次。并定期檢測潔凈度，頻次自己制訂。

55.無(wú)菌操作時(shí)，對顯微鏡硬件條件的需求是怎樣？

  答：顯微鏡：至少1000X，也就說(shuō)要有油鏡。

56.生產(chǎn)原料藥的公司，其微生物檢測方法采用限度檢查法，請問(wèn)潔凈室的劃分中還需要建立“無(wú)菌檢查室”嗎？

  答：只要滿(mǎn)足藥典規定的萬(wàn)級背景下的局部百級即可。

57.陽(yáng)性接種室，有沒(méi)有硬性要求在萬(wàn)級區域局部百級區域？

  答：無(wú)硬性要求。但應使用生物安全柜，并按生物安全柜的要求設置外圍空間。

58.陽(yáng)性操作間的空調系統是否應與微生物限度檢查的空調系統完全分開(kāi)，若未分開(kāi)，是否可以采取直排的方式？（不利用陽(yáng)性間的空調回風(fēng)）

  答：應分開(kāi)。直排不等于分開(kāi)。

59.微生物限度實(shí)驗室和陽(yáng)性對照室的潔凈系統要分別獨立，如用同一套的HVAC，但都是全排，是否能接受？

  答：應分開(kāi)。直排不等于分開(kāi)。

60.微生物與無(wú)菌潔凈系統也一定分別設置嗎？

  答：有條件最好將微生物限度檢查與無(wú)菌檢查潔凈系統分開(kāi)。

61.潔凈區監控中，某些設備不宜采用沖淋法和接觸碟法取樣，而擦拭法中棉簽釋放率很低（普通棉簽釋放率只有20%左右）。請問(wèn)如何設計采樣方法才能真實(shí)反映設備表面微生物情況？

  答：有些國外生產(chǎn)微生物檢驗儀器的大公司，有專(zhuān)用的小拭子，可能更有效。

62.用潔凈服材質(zhì)做成袋子來(lái)代替牛皮紙的包扎滅菌是否可行？

  答：我們所目前采用此法。

63.環(huán)境監測用平皿預培養溫度和時(shí)間?

  答：30-35℃，時(shí)間不少于48h

64.靈敏度檢測如何確定接種菌數量？

  答：菌液在接種至靈敏度檢測用培養基的同時(shí)用微生物限度檢查法的平皿法測定每1ml菌液的cfu。

65.如何驗證消毒劑消毒效果？

  答：目前沒(méi)有統一的方法，自行設計。

66.消毒劑消毒效果如何驗證？如何設定SAL接受標準？

  答：目前沒(méi)有統一的方法，自行設計。

67.驗證試驗中，若供試品需加入β-內酰胺酶，那么陽(yáng)性對照管是否應該加入等量β-內酰胺酶？

  答：驗證試驗時(shí)，不加，因為對照管是用于比較試驗菌生長(cháng)情況的。 檢驗時(shí)的陽(yáng)性對照則加。

68.全封閉式無(wú)菌驗證中，用0.9%Nacl溶液溶解后，抽入集菌器中，樣品溶液是否要停留幾秒鐘？讓樣品與濾膜充分接觸或者停留后溶液造成抗生素殘角？如何停留幾秒鐘？應在100ml試停留還是50ml時(shí)停留合適？

  答：不應停留，應讓樣品盡快通過(guò)，避免抑菌成分被吸附。薄膜過(guò)濾法的目的是僅讓微生物截留在濾膜上。

69.每張濾膜每次沖洗量一般100ml，總沖洗量不得超過(guò)1000ml，若供試品容量較大，總供試品樣品量按標準規定超過(guò)1000ml，那這種情況應如何看待呢？

  答：中國藥典未規定供試品溶液的體積，設計檢驗方法時(shí)，兼顧供試品溶液的濃度和體積，盡量采用較小的體積。

70.裝消毒劑的容器是否要求滅菌？例如用可滅菌的不銹鋼材質(zhì)，因為塑料的容器不能滅菌問(wèn)題。

  答：應該滅菌

71.配制用水最長(cháng)可以放置多久？

  答：視放置條件，經(jīng)驗證，自己設定。

72.對滅菌效果進(jìn)行驗證，多久進(jìn)行一次？

  答：根據自己工作情況，自己制訂。

73.微生物限度檢查時(shí)所用吸管是否均需計量？

  答：無(wú)規定。

74.無(wú)菌，微生物限度實(shí)驗，樣品與陽(yáng)性對照可以共用一個(gè)培養箱嗎？

  答：有2種意見(jiàn)：其一，條件許可，分開(kāi)，以免污染；其二，共用一個(gè)培養箱，使其在相同條件下培養。我們：分開(kāi)。

75.在無(wú)菌檢查項下，供試品檢驗時(shí)，陽(yáng)性對照是否必須每批都需做？是否供試品無(wú)菌試驗跟陽(yáng)性對照必須同步操作？

  答：ChP要，同步。

76.生產(chǎn)企業(yè)一次生產(chǎn)80mg/瓶的凍干粉36000瓶，企業(yè)取20瓶做無(wú)菌檢驗，是否應另增加10瓶做陽(yáng)性試驗？（方法：薄膜過(guò)濾法，濾膜三分法，一份陽(yáng)性，另兩份置兩種不同培養基中。

  答：是，總共需30瓶。

77.培養基靈敏度試驗所用的菌種有6種，為什么沒(méi)有大腸？

  答：有專(zhuān)家解釋?zhuān)阂蜚~綠與大腸均為革蘭氏陰性桿菌，而銅綠在醫院及自然界中更廣泛存在，致病性更強。

78.如果產(chǎn)品經(jīng)無(wú)菌驗證后，是以大腸為對照菌時(shí)，可行嗎？

  答：如果驗證6種菌均可行，建議按藥典陽(yáng)性對照章節的要求，設定陽(yáng)性對照菌。

79.如果驗證結果樣品是抗革蘭陰性菌的，則陽(yáng)性菌應用大腸埃希菌。靈敏度試驗可要加入大腸？

  答：否。

80.薄膜過(guò)濾法中，菌懸液的加入，在最后一次的沖洗液中加入小于100cfu的試驗菌，過(guò)濾，這個(gè)說(shuō)法用封閉式過(guò)濾器（）要如何做？如果做法是加入培養基后，再從管子里加1ml的100cfu的菌，可行嗎？

  答：在最后一次沖洗液中，經(jīng)封閉式過(guò)濾器頂部的透氣孔加入1ml的少于100cfu的菌液，抽干，再加培養基。

81."全封閉式無(wú)菌檢驗中，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，我們驗證的是50ml*3+100ml*3，總沖洗量不超1000ml,可行嗎？"

  答：可行。

82.《中國藥典》無(wú)菌檢查方法驗證中“菌種加在最后一次沖洗液中，過(guò)濾”，如果某供試品無(wú)菌檢查方法無(wú)需進(jìn)行沖洗，那么菌懸液應該加在哪合適？

  答：藥典無(wú)規定，可在過(guò)濾完樣品后直接加菌液，然后加入培養基。

83."無(wú)菌驗證后，試驗菌數經(jīng)測定，若加入菌數大于100cfu,該情況如何處理？是否需要判斷其試驗無(wú)效，重新驗證"

  答：重新驗證。

84.南方天氣濕度大，易發(fā)霉，毛巾或者衣服上可能有黑色的霉點(diǎn)洗不干凈，請問(wèn)有沒(méi)有好的方法去除霉點(diǎn)？

  答：漂白、消毒。

85.粉針注射劑，同一個(gè)品種有不同規格的產(chǎn)品，在建立方法學(xué)驗證時(shí)是否每個(gè)規格都需要進(jìn)行驗證？

  答：理論上，以最大規格建立的方法應適用于其他較小規格。 但這樣做可能會(huì )提高成本，因小規格的沖洗量、滅活劑等用量可能可以更少，難以一概而論。

86.無(wú)菌檢查方法中陰性對照，每瓶溶劑，稀釋液，沖洗液都需要收集，是不是每做一批試驗，都需同時(shí)操作兩臺集菌儀？陰性對照能否每一批溶劑，稀釋液，沖洗液抽一、兩瓶做陰性對照？

  答：不一定每做一批試驗，都需同時(shí)操作兩臺集菌儀。 陰性對照不應該僅僅每一批溶劑，稀釋液，沖洗液抽一、兩瓶做陰性對照，應盡可能將所用到的每瓶都留少量做陰性。

87."每一張膜總沖洗量不得超過(guò)1000ml,這個(gè)總沖洗量包括樣品溶液?jiǎn)幔?

  答：不包括。

88.無(wú)菌性檢查，培養基是直接拿去培養，還是按照說(shuō)明書(shū)滅菌處理后再拿去培養？

  答：成品培養基直接培養；脫水培養基或自己配制的培養基滅菌后拿去培養。

89.液體硫乙醇酸鹽培養基（中檢所）極易被氧化，藥檢所做實(shí)驗時(shí)是將管裝量定在多高？

  答：我們所用的是全封閉一次性濾筒，裝量100ml，高度約6.5cm。

90.如果培養過(guò)程氧化層高度已超過(guò)藥典中要求的1/2高度，并發(fā)現其中長(cháng)菌，結果如何判定？若未長(cháng)菌，結果判定認為無(wú)菌是否成立？此類(lèi)問(wèn)題應該如何衡量？

  答：如果培養過(guò)程氧化層高度已超過(guò)藥典中要求的1/2高度，并發(fā)現其中長(cháng)菌，可判斷為不合格；若未長(cháng)菌，按藥典，結果判定認為無(wú)菌應不成立；此類(lèi)問(wèn)題應該照藥典執行，培養后不超過(guò)1/2高度。

91.“無(wú)菌性檢查中每批培養基隨機取不少于5支（瓶）”,這句話(huà)中的“5支（瓶）”是5支或5瓶，還是5支和5瓶？”

  答：或

92.潔凈區與陽(yáng)性實(shí)驗室空調系統應如何分別設置？送風(fēng)分離，回風(fēng)分離，或兩者均分離？即2套空調系統？

  答：2套系統互不相干。

93.十四烷酸異丙酯若經(jīng)驗證后，不影響陽(yáng)性菌生長(cháng)，可否濕熱滅菌？

  答：濕熱滅菌的水蒸氣可能會(huì )影響十四烷酸異丙酯的性能，建議按藥典。

94.沖洗液的濾清，加入不渾濁，是否可不用過(guò)濾？

  答：可

95.無(wú)菌檢查時(shí)，陽(yáng)性對照的接種與培養是否也必須和供試品培養同一天進(jìn)行？

  答：應同步操作。

96.使用的消毒劑應無(wú)菌，比如購買(mǎi)的新潔而滅要用無(wú)菌的4.5微米濾膜過(guò)濾再用嗎？

  答：如用在關(guān)鍵地方，建議過(guò)濾。

97.產(chǎn)品穩定性考察，有無(wú)菌檢查項目，請問(wèn)留樣產(chǎn)品的無(wú)菌檢查的數量和常規檢查的數量要一樣嗎？如果是，留樣量就會(huì )相當大，有的藥品比較貴重，這樣會(huì )造成企業(yè)較大的損失.

  答：無(wú)菌檢查的數量和常規檢查的數量應一樣。 按藥典穩定性試驗指導原則附表，該做就應做，但若情況特殊，或許可減低檢驗頻次，但如此一來(lái)，可能一些藥品注冊審評專(zhuān)家或GMP檢查員會(huì )有不同意見(jiàn)。穩定性試驗的無(wú)菌檢查很大程度是在考察包裝。

98.做培養基適用性與方法驗證時(shí)，若加菌量為100~120cfu＞100cfu，是否需要重新做驗證？

  答：要。

99.藥典只是提供了化藥中干擾物的中和劑方法，能否提供一些中成藥的除菌方法？

  答：無(wú)

100.潔凈區污染霉菌怎么處理？

  答：可嘗試甲醛熏蒸

101.潔凈區有霉菌生長(cháng)，要怎么凈化環(huán)境？注：我們用75%的乙醇抹洗全部空間，然后開(kāi)臭氧半小時(shí)，但是檢測后還是發(fā)現有霉菌，老師是不是還有更好的方法？

  答：可嘗試甲醛熏蒸

102.老師說(shuō)的酒精棉過(guò)一段時(shí)間會(huì )生長(cháng)細菌，請問(wèn)酒精棉保存期多久？

  答：未考察，我們使用期一般不超過(guò)一周。

103.酒精棉怎樣取樣進(jìn)行微生物檢查？

  答：請自行設計

104.酒精棉有規定超過(guò)多少的菌數不能再用？

  答：無(wú)規定

105.廣州環(huán)凱有凍干菌粉賣(mài)，是否可以在其單位購買(mǎi)？

  答：建議向中檢所購買(mǎi)。

106.請問(wèn)藥典說(shuō)“當產(chǎn)品的組分或原檢驗條件發(fā)生改變時(shí)，應對檢驗方法重新驗證”，如何理解“原檢驗條件發(fā)生改變”

  答：比如，將沖洗量500ml改為300ml，等等。

107.靈敏度檢查：改良馬丁和硫乙醇酸性流體培養基都要做6種菌株嗎？

  答：硫乙醇：4種，為金葡、銅綠、枯草、生孢；馬�。�2種，為百念、黑曲。

108.清潔后的潔具需用微生物純化水洗滌？

  答：清潔后的潔具需用純化水洗滌。

109.無(wú)菌：陽(yáng)性對照培養48~72小時(shí)就可以滅活了嗎？不用跟供試品培養14天嗎？

  答：是的

110.供試品處理時(shí)，需加入適量的聚山梨酯80，聚山梨酯80需要滅菌嗎？方法如何？

  答：需滅菌，可采用濕熱滅菌。

111.含0.05%（v∕v）聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液如何配制？

  答：可直接用聚山梨酯80配制，或先配制聚山梨酯80的濃溶液，然后取濃溶液作進(jìn)一步配制。

112.如何證明“表面活性劑，中和劑或滅活劑使用應有效性及對微生物無(wú)毒性”？

  答：自行設計

113.抗生素效價(jià)室放在潔凈室里面是否合適？

  答：應與潔凈區分開(kāi)。

114.最后滅菌產(chǎn)品的原輔料是否需要做微生物限度檢查？

  答：一般情況應做。

115.薄膜過(guò)濾法若試驗沖洗量1000ml陽(yáng)性用量多少？

  答：也1000ml。

116.無(wú)菌用培養基是否不用對照培養基？

  答：是

117.無(wú)菌檢查法從開(kāi)始制樣到加入培養基也不能超過(guò)1h嗎？

  答：一般情況應該如此。

118.薄膜過(guò)濾法濾膜若＞50mm，沖洗量是否需調整？如何調整？

  答：建議按藥典規定，選用直徑約50mm的濾膜。如要調整，即重新驗證。

119.陽(yáng)性菌接種使用生物安全柜后，那接種室的空調系統能否與微生物限度檢查室共用？如果現在共用了，有什么方法能避免交叉污染？

  答：請掌握原則，凈化系統應分開(kāi)。

120.怎么消毒在試驗中要用的無(wú)菌溫度計？

  答：我們沒(méi)有這方面的經(jīng)驗。

121.發(fā)酵分裝容器要預先滅菌，請問(wèn)分裝時(shí)是否有要求在無(wú)菌的環(huán)境下進(jìn)行，分裝后再進(jìn)行滅菌，程序是否復雜化？

  答：我們不明白該問(wèn)題，一般而言，既然容器要預先滅菌，分裝也應無(wú)菌操作。

122.無(wú)菌檢查用的菌懸液是否必須用新鮮培養制備？用于制備菌懸液的培養物可否在25℃條件下連續使用一周？

  答：請按藥典10版要求，否則，自己驗證。

123.滅菌鍋壓力表檢定時(shí)，只檢定了滅菌鍋的溫度是否可以？若只檢壓力呢?

  答：請咨詢(xún)檢定機構。

124.薄膜過(guò)濾法檢水驗證？

  答：不明白問(wèn)什么。

125.潔凈室的無(wú)菌采樣區域是否相當預處理操作？

  答：不明白問(wèn)什么。

126.飲用水檢測中GB標準中“總大腸菌群檢出應進(jìn)一步檢驗大腸埃希菌或耐熱大腸菌群”，是否可以只做大腸埃希菌？

  答：我們目前尚未開(kāi)展水質(zhì)檢驗。

 

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