革蘭氏染色法

  目的要求
1 ．學(xué)習并初步掌握革蘭氏染色法。
2 .了解革蘭氏染色法的原理及其在細菌分類(lèi)鑒定中的重要性．
二、基本原理
革蘭氏染色法是1884 年由丹麥病理學(xué)家Christain Gram創(chuàng )立的，而后一些學(xué)者在此基礎上作了某些改進(jìn)，革蘭氏染色法是細菌學(xué)中最重要的鑒別染色法，
革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結晶紫進(jìn)行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇（或丙酮）脫色，最后用復染劑（如番紅）復染．經(jīng)此方法染色后，細胞保留初染劑藍縈色的細菌為革蘭氏陽(yáng)性菌；如果細胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細菌染上復染劑的顏色（紅色）．該菌解于革蘭氏陰性菌．
革蘭氏染色法將細菌分為革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性，是由這兩類(lèi)細菌細胞壁的結構和組成不同決定的．實(shí)際上，當用結晶紫初染后，像簡(jiǎn)單染色法一樣，所有細菌都被染成初染荊的藍縈色．碘作為媒染劑，它能與結晶縈結合成結晶紫一碘的復合物，從而增強了染料與細菌的結合力甲當用脫色劑處理時(shí)，兩類(lèi)細菌的脫色效果是不同的，革蘭氏陽(yáng)性細菌的細胞壁主要由膚聚籍形成的網(wǎng)狀結構組成．壁厚、類(lèi)脂質(zhì)含量低，用乙醇（或丙酮）脫色時(shí)細胞壁脫水、使吠聚塘層的網(wǎng)狀結構孔徑縮小，透性降低，從而使結晶紫一腆的復合物不易被洗脫而保留在細胞內，經(jīng)脫色和復染后仍保留初染劑的藍紫色．革蘭氏陰性菌則不同，由于其細胞壁膚聚糖層較薄、類(lèi)脂含t 高．所以當脫色處理時(shí)，類(lèi)脂質(zhì)被乙醇〔 或丙酮）溶解，細胞壁透性增大，便結晶紫一碘的復合物比較容易被洗脫出來(lái)，用復染劑復染后，細胞被染上復染劑的紅色。
革蘭氏染色反應是細菌重要的鑒別特征，為保證染色結果的正確性，采用規范的染色方法是十分必要的．本實(shí)臉將介紹被普遙采用的H 成ker 氏改良的革蘭氏染色法．
三、器材
1 ．菌種大腸桿菌約24h 百養瓊脂斜面培養物，金黃色葡萄球菌約24h 營(yíng)養瓊脂斜面培養物．蠟樣芽孢桿菌12~20h 營(yíng)養瓊脂斜面培養物。
2 ．染色劑革蘭氏染色液．
3 ．儀器或其他用具 
四、操作步驟
1 ．制片
取苗種培養物常規涂片、干燥、固定．
要用活暇生長(cháng)翔的幼培葬臨作，蘭氏染色；涂片不宜過(guò)厚．以免脫色不憲全造成假陽(yáng)性；火焰固定不宜過(guò)熱（以玻片不扭手為宜）. 
2 ．初染
滴加結晶紫（以剛好將菌膜覆蓋為宜）染色1~2min，水洗。
3 ．媒染
用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋約1min，水洗．
4 ．脫色
用濾紙吸去玻片上的殘水，將玻片傾斜，在白色背景下．用滴管流加95 ％的乙醇脫色，直至流出的乙醇無(wú)紫色時(shí)，立即水洗。
5 ．復染
用番紅掖復染約2min，水洗．
6 ．鏡檢
干燥后，用油鏡觀(guān)察．
菌體被染成藍紫色的是革蘭氏陽(yáng)性菌，被染成紅色的為革蘭氏陰性菌．
7 ．混合涂片染色
按上述方法，在同一載玻片上．以大腸桿菌和蠟樣芽袍桿菌或大腸桿菌和金黃色葡萄苗作混合涂片染色、鏡檢進(jìn)行比較。
五、實(shí)驗報告
1.結果
列表簡(jiǎn)述3 株細菌的染色觀(guān)察結果（說(shuō)明各菌的形狀頤色和革蘭氏染色反應〕 ，2 ．思考題
（1）你認為哪些環(huán)節會(huì )影響革蘭氏染色結果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節是什么？ 
（2）現有一株細菌寬度明顯大于大腸桿菌的粗壯桿菌，請你鑒定其革蘭氏染色反應．你怎樣運用大腸桿國和金黃色葡萄球菌為對照菌株進(jìn)行涂片染色，以證明你的染色結果正確性．
( 3 ）你的染色結果是否正確？如果不正確，請說(shuō)明原因。
( 4 ）進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，為什么特別強調菌齡不能太老，用老齡細菌染色會(huì )出現什么問(wèn)題？
( 5 ）革蘭氏染色時(shí)，初染前能加碘液?jiǎn)�？乙醇脫色后復染之前，革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌應分別是什么顏色？
（6）你認為革蘭氏染色中，哪一個(gè)步腳可以省去而不影響最終結果？在什么情況下可以采用？
 
   

 

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