細菌的簡(jiǎn)單染色法

   一、目的要求
1 學(xué)習微生物涂片、染色的基本技術(shù)，拿握細菌的簡(jiǎn)單染色法．
2 初步認識細菌的形態(tài)特征。
3 鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無(wú)菌操作技術(shù)．
二、基本原理
簡(jiǎn)單染色法是利用單一染料對細菌進(jìn)行染色的一種方法．此法操作簡(jiǎn)便，適用于菌體一般形狀和細菌排列的觀(guān)察。
常用堿性染料進(jìn)行簡(jiǎn)單染色，這是因為：在中性、堿性或弱酸性洛液中，細菌細胞通常帶負電荷，而堿性染料在電離時(shí)．其分子的染色部分帶正電荷（酸性染料電離時(shí)，其分子的染色部分帶正電荷），因此堿性染料的染色部分很容易與細菌結合使細菌著(zhù)色．經(jīng)染色后的細菌細胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易于識別．常用作簡(jiǎn)單染色的染料有：美藍、結晶紫、堿性復紅等．
當細菌分解搪類(lèi)產(chǎn)酸使培養基pH 下降時(shí)，細菌所帶正電荷增加，此時(shí)可用伊紅、酸性復紅或剛果紅等酸性染料染色．
三、器材
l.菌種枯草芽孢桿菌12 ~18h 營(yíng)養瓊脂斜面培養物，藤黃微球菌約24h 營(yíng)養瓊脂斜面培養物．
2 ．染色劑呂氏堿性美藍染液（或草酸按結晶紫染液），齊氏石炭酸復紅染液．
3 ．儀器或其他用具 顯微鏡．酒精燈，載玻片，接種環(huán)，雙層瓶（內裝香柏油和二甲苯），擦鏡紙，生理鹽水等．
四、操作步驟．
1 ．涂片
2 ．干燥
室溫自然干燥。
3 ．固定
涂面朝上，通過(guò)火焰2 ~ 3 次．此操作過(guò)程稱(chēng)熱固定，其目的是使細胞質(zhì)授固，以固定細胞形態(tài)，并便之牢固附著(zhù)在載玻片上．
4 ．染色
將玻片平放于玻片擱架上，滴加染液于除片上（染液剛好覆蓋涂片薄膜為宜）. 
5 ．水洗
倒去染液．用自來(lái)水沖洗，直至涂片上流下的水無(wú)色為止，
6 ，干燥
自然干燥，或用電吹風(fēng)吹干，也可用吸水紙吸千．
7 ，鏡檢
涂片干后鏡檢．
涂片必須完全干燥后才能用油鏡觀(guān)察.
五、實(shí)驗報告
1 ．結果
根據觀(guān)察結果，繪出兩種細菌的形態(tài)圖．
2 ．思考題
( 1) 你認為制備細菌染色標本時(shí)，尤其應該注意哪些環(huán)節？
( 2 ）為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀(guān)察？
( 3 ）如果你的涂片未經(jīng)熱固定，將會(huì )出現什么問(wèn)題？如果加熱溫度過(guò)高、時(shí)間太長(cháng)，又會(huì )怎樣呢？
   

 

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