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1.揮發(fā)性有機酸
（1）標準溶液配制：（國產(chǎn)分析純）
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乙酸 |
5.78ml |
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丙酸 |
7.5ml |
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異丁酸 |
9.37ml |
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丁酸 |
9.28ml |
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異戊酸 |
11.15ml |
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戊酸 |
10.97ml |
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已酸 |
12.12ml |
將上述溶液分別置于100 ml容量瓶中，加水至刻度，為1 mol/L標準母液，取母液稀釋100倍為10 mmol/L。
（2）樣品預處理（酸化）：準備取1 ml的幼齡(24 h) PYG培養液， 以50%H2S04,調pH至2，混勻，8000r/min離心1 min，同時(shí)有標準樣品混合物和空白PYG培養液同時(shí)酸化。
（3）氣相色譜測定：用10 μl微量注射器取上述離心的上清液2μl用氣相色譜分析
儀器型號：日本島津公司GC-TAG型氣相色譜儀C-R3A型自動(dòng)積分記錄儀。
檢測器：FID
色譜柱：3mm X lm不銹鋼柱
色譜柱填料：GDX-401(60-80目）載氣及流速：高純氮50 ml/min
氫氣壓力：0.6 kg/cm2
空氣壓力：0.5 kg/cm2
色譜柱溫度：220℃
檢測器溫度：300℃
記錄紙速：3mm/min
（4）結果判斷：將待檢菌株的測定結果與標準溶液結果比較，根據各組分峰的保留時(shí)間以決定各峰的組分，并根據各組分峰的積分面積計算其濃度，參閱VPI厭氧菌實(shí)驗室手冊分析標準菌株圖譜進(jìn)一步識別。
2.非揮發(fā)性有機酸
（1）標準溶液配制：
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琥珀酸 |
1.1789g |
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丙二酸 |
1.04g |
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草酸 |
1.234g |
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反丁烯二酸 |
0.582g |
將上述溶液移入同一個(gè)100ml容量瓶中，加少許蒸餾水待溶解后，再吸取丙酮酸0.72ml,乳酸1.35 ml置于上述的容量瓶中，再加蒸餾水至刻度。乳酸，草酸，丙二酸，丙酮酸，驍珀酸的濃度分別為0.1 mol/L，反丁烯二酸的濃度為0.05 mol/L。在進(jìn)行氣相色譜分析時(shí)要像培養物一樣進(jìn)行甲酯化。
（2）樣品甲酯化①吸取1 ml培養液于5 ml比色管中；②加入0.4 ml50% H2S04和2ml無(wú)水甲醇，蓋塞混勻，放60℃水浴30 min或室溫過(guò)夜；③測定前加入1 ml蒸餾水和0.5 ml氯仿，混勻，3000r/min,離心5 min。
（3）氣相色譜測定：用10 μl微量注射器取管底氯仿層2μl進(jìn)樣分析。
儀器型號：日本島津公司GC-TAG型氣相色譜儀C-R3A型自動(dòng)積分記錄儀。
檢測器：FID
色譜柱：3mm X 2m不銹鋼柱
色譜柱填料：GDX-401(60-80目）載氣及流速：高純氮30 ml/min
氫氣壓力：0.6 kg/cm2空氣壓力：0.5kg/cm2色譜柱溫度：150'C檢測器溫度：250℃記錄紙速：3 mm/min
（4）結果判斷；同揮發(fā)性有機酸。
附：如果無(wú)氣相色譜儀的條件，測定有否乳酸，可用紙層析方法， 方法如下：
乳酸測定
(1)培養基：本試驗可結合測定乳酸細菌從葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣試驗進(jìn)行。 使用的培養基同前（見(jiàn)糖醇類(lèi)發(fā)酵試驗）。將被測定的菌接種于液體培養基中，30℃培養3～5天，如果產(chǎn)酸，再做紙層析。
(2)紙層析法：①展開(kāi)劑：水：苯甲醇：正丁醇以1:5:5的量相混合，然后加1％的甲酸。②顯色劑：0.04％的溴酚藍乙醇溶液，用O.lN的NaOH調pH到6.7。
采用國產(chǎn)新華濾紙或Whatman一號濾紙，依據樣品的多少，選擇一大小合適的濾紙，在紙張下方距邊約3cm處劃條橫線(xiàn)，每隔2.5-3 cm劃一點(diǎn)作為點(diǎn)樣位置，并注明點(diǎn)樣編號。在點(diǎn)樣的同時(shí)需要用2％的乳酸和不接種培養液二個(gè)樣品用為對照。
將紙放入層析缸先用展開(kāi)劑飽和已點(diǎn)樣的濾紙過(guò)夜，然后加展開(kāi)劑開(kāi)始層析。一般上行25cm即可。取出諒干后噴顯色劑，觀(guān)察樣品上行是否出現有黃色斑點(diǎn)，并與對照比較其產(chǎn)生黃點(diǎn)的位置，以確定是否乳酸。
本文節選自《常見(jiàn)細菌系統鑒定手冊》第十四章。
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