紅霉素微生物檢定法操作及注意事項

一、紅霉素概述

  紅霉素系大環(huán)內酯類(lèi)抑菌性抗生素，但在高濃度時(shí)對高度敏感的細菌也有殺菌作用。臨床上主要用于治療支原體肺炎、沙眼衣原體引起的新生兒結膜炎、嬰兒肺炎、生殖泌尿道感染、軍團菌病、皮膚軟組織感染，空腸彎曲菌腸炎以及梅毒、痤瘡等癥。本品為白色或類(lèi)白色的結晶或粉末，在甲醇、乙醇或丙酮中易溶，在水中極微溶解。本品在pH<6時(shí)易被破壞。紅霉素制劑腸溶劑為主要劑型，以克服紅霉素對酸的不穩定性及降解物對胃腸道的刺激等缺點(diǎn)，此外還有紅霉素眼膏、軟膏及栓劑等。

二、2015版中國藥典效價(jià)測定方法及注意事項

  （1）培養基：抗生素1號培養基（pH為7.8～8.0）

  （2）試驗菌：短小芽孢桿菌（CMCC（B）63202）

  （3）緩沖液：取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使其成1000ml，濾過(guò)，在115℃溫度下滅菌30min，制成pH值為7.8的磷酸鹽緩沖液。

  （4）雙碟的制備：菌層培養基菌懸液的量約為培養基量的2%，加菌懸液量可視抑菌圈大小及清晰程度進(jìn)行調整。

  （5）制備供試溶液

   A、紅霉素原料藥供試溶液：精密稱(chēng)取該供試品適量（約相當于紅霉素50mg），置50ml的量瓶中，加乙醇（每10mg紅霉素加4ml乙醇）溶解后，用滅菌水制成每1ml中約含1000單位的溶液，再用磷酸緩沖液（pH7.8）制成抗生素濃度范圍為5.0-20.0單位/ml的高、低劑量溶液，即得。

   B、紅霉素腸溶衣片供試溶液：取本品4片，研細，用乙醇適量（紅霉素0.25g，加乙醇25ml）研磨使溶解，用滅菌水制成每1ml中約含1000單位的溶液，再用磷酸鹽緩沖液（pH7.8）制成抗生素濃度范圍為5.0-20.0單位/ml的高低劑量溶液，即得。

   C、紅霉素軟膏供試溶液：取本品，精密稱(chēng)取適量（約相當于紅霉素10mg），置分液漏斗中，加石油醚20ml，緩緩振搖，使基質(zhì)溶解，用磷酸鹽緩沖液（pH為7.8-8.0）提取4次，每次約25ml，合并提取液，置100ml量瓶中，加磷酸鹽緩沖液（pH為7.8-8.0）至刻度，制成每1ml中約含1000單位的溶液，再用磷酸鹽緩沖液制成抗生素濃度范圍為5.0-20.0單位/ml的高、低劑量溶液，即得。

  （6）培養溫度和時(shí)間：培養溫度為35-37℃，培養時(shí)間為14-16h。

三、測定中的關(guān)鍵點(diǎn)、易出現的問(wèn)題及注意事項

  （1）稱(chēng)量：本品微有引濕性，稱(chēng)取樣品時(shí)除注意準確稱(chēng)量外，特別是環(huán)境濕度較高時(shí)，尚需注意稱(chēng)量過(guò)程中的吸濕問(wèn)題，以免引入誤差。

  （2）供試品制備：檢測中曾發(fā)現因紅霉素溶解不完全，使含量測定結果低的情況。溶解供試品時(shí)，尤其是制劑，因輔料對主藥的包裹吸附等作用，影響紅霉素的溶出，應用超聲處理等使其完全溶解。

  （3）培養基：紅霉素含量測定，對培養基的質(zhì)量要求較苛刻。盡量選擇批量生產(chǎn)的質(zhì)量穩定性好的培養基進(jìn)行測定（我公司有成品干粉培養基，檢測效果好，可購買(mǎi)使用）。

  （4）緩沖液：USP23版采用pH8.0磷酸鹽緩沖液稀釋樣品，而中國藥典采用pH7.8的磷酸鹽緩沖液，經(jīng)比較二者對效價(jià)測定結果無(wú)明顯影響。

  （5）雙碟的制備：中國藥典對紅霉素品種雙碟的制備沒(méi)有特殊的要求。底層培養基冷卻凝固后，鋪加菌層培養基前，應注意保溫，一般可以將雙碟放置在37℃的恒溫箱中，臨加上層培養基時(shí)取出。待菌層完全冷卻凝固后，再放置牛津杯（也可用我公司生產(chǎn)的四聯(lián)式牛津杯），牛津杯穩定后，開(kāi)始滴加藥液。

  （6）滴加藥液：每組滴加的雙碟數以不超過(guò)5個(gè)為宜，以免擴散時(shí)間相差過(guò)大，造成結果誤差。

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