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1.培養基
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肉汁胨培養基 |
1000ml |
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KNO3 |
1g |
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pH 7.0-7.6 |
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每管分裝4-5 ml, 121℃蒸氣滅菌15-20 min。
2.試劑
（1）格里斯氏(Griess）試劑
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A液 |
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對氨基苯磺酸 |
0.5g |
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稀醋酸（10%左右） |
150ml |
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B液 |
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α-萘胺 |
0.1g |
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蒸餾水 |
20ml |
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稀醋酸（10%左右） |
150ml |
（2）二苯胺試劑：二苯胺0.5g溶于100 ml濃硫酸中，用20 ml蒸餾水稀釋。
3.接種
將測定菌接種于硝酸鹽液體培養基中，置適溫培養1,3,5天。每株菌作二個(gè)重復，另留兩管不接種作對照。
4.操作
取二支干凈的空試管或在比色瓷盤(pán)小窩中倒入少許培養l,3,5天的培養液，再各加一滴A液和B液，在對照管中同樣加入A液，B液各一滴。
5.結果觀(guān)察
當培養液中滴入A,B液后，溶液如變?yōu)榉奂t色、玫瑰紅色、橙色、棕色等表示亞硝酸鹽存在，為硝酸鹽還原陽(yáng)性。如無(wú)紅色出現，則可加一、二滴二苯胺試劑，此時(shí)如呈藍色反應，則表示培養液中仍有硝酸鹽，又無(wú)亞硝酸鹽反應，表示無(wú)硝酸鹽還原作用；如不呈藍色反應，表示硝酸鹽和形成的亞硝酸鹽都已還原成其他物質(zhì)，故仍應按硝酸鹽還原陽(yáng)性處理。
6.注意事項
（1）還原硝酸鹽反應是在較為厭氧條件下進(jìn)行的，雖不必用礦油封液面，但分裝試管時(shí)液層不宜太薄，對生長(cháng)緩慢的細菌尤應注意。
（2）對不同種的細菌來(lái)說(shuō)，亞硝酸鹽可以是硝酸鹽還原的最終產(chǎn)物，也可以是整個(gè) 還原過(guò)程的中間產(chǎn)生，另一方面，有的種還原極為迅速，有的種還原緩慢因而第一次檢查這一項目時(shí)要及時(shí)(18-24 h)，并且對陰性反應的菌株應連續觀(guān)察。并且對千未呈現亞硝酸鹽反應的測定應檢查是否仍有硝酸鹽（二苯胺測定），然后才能判斷有無(wú)硝酸鹽的還原反應。
本文節選自《常見(jiàn)細菌系統鑒定手冊》第十四章。
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