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一、菌落形態(tài)
1.平板制作將15～20 ml融化的營(yíng)養瓊脂培養基冷卻至50℃左右，按無(wú)菌操作倒人直徑9 cm的培養皿內。如有冷凝水，倒置于30～37℃溫箱內，使之干燥以便于單菌落的出現。
2.單菌落平板（劃線(xiàn)法）一點(diǎn)菌苔或一環(huán)細菌懸液，在上述無(wú)冷凝水的平板一側邊緣處，反復涂抹在直徑約為1 cm大小的面積上；燒灼接種環(huán)，冷卻后，從上述涂菌處劃出7～8條直線(xiàn)，前3～4條線(xiàn)的從涂菌處劃出，后3～4條直線(xiàn)可不通過(guò)涂菌處，劃線(xiàn)時(shí)接種環(huán)與平板表面成30°～40°角，輕輕接觸，不要使接種環(huán)劃破表面；如上述燒灼、劃線(xiàn)操作再重復數次，以劃滿(mǎn)整個(gè)平板為宜；倒置平板，于最適溫度培養1～2天，出現單菌落。
3.菌落形態(tài)觀(guān)察 形狀和大小、邊緣、表面、隆起形狀，透明度、菌落及培養基的顏色等。
二、生長(cháng)溫度和耐熱性
最高、最適、最低和耐受溫度能力的特征常常是某些細菌鑒定的特征之一，常用的測定溫度(℃)有4,20,30,37,41,45和65。
以液體培養物(24h培養物）一小環(huán)轉入澄清營(yíng)養肉汁或合適的液體培養基，置不同溫度培養。37℃以上的測定應置水浴中，需3次移種生長(cháng)者才能確認。
耐熱性意味著(zhù)細胞經(jīng)受高溫還能存活，主要用于鏈球菌的鑒定。在1m1合適的肉湯或脫脂牛奶中接種1滴24小時(shí)的培養物，于60℃水浴30 min,然后于35～37℃培養48 h,生長(cháng)者則表明存活，糞腸球菌(Enterococcous f aecalis)為該測定的陽(yáng)性對照。
三、氧和二氧化碳的需要
氧和二氧化碳的需要，常以對氧要求的不同程度來(lái)區別細菌，例如好氧菌、微好氧菌和厭氧菌以及兼性厭氧。測定方法有兩種：
1.需氧性測定將接種的培養物培養于不同條件包括空氣、含5% CO2和10% O2厭氧罐中，分別測得需氧性。
2.芽孢菌厭氧性測定
（1）厭氧培養基
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酪素水解物 |
20g |
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NaCl |
5g |
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疏基醋酸鈉 |
1g |
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甲醛次硫酸鈉 |
1g |
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瓊脂 |
15g |
|
蒸餾水 |
1000ml |
（2）接種與觀(guān)察：用一小環(huán)（外徑1.5mm的接種環(huán)）營(yíng)養肉湯培養物穿刺于上述培養基，培養于30℃，3天和7天分別記載，僅在表面生長(cháng)者為好氧菌，如沿穿刺線(xiàn)牛長(cháng)或下部生長(cháng)者為兼性厭氧菌或厭氧菌。
本文節選自《常見(jiàn)細菌系統鑒定手冊》第十三章。
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